江苏省医学重点建设学科资助项目(XK200723)
- 作品数：6 被引量：15H指数：3
- 相关作者：王惠民鞠少卿王跃国浦江黄华更多>>
- 相关机构：南通大学南通大学附属东台医院中国科学院更多>>
- 发文基金：江苏省医学重点建设学科资助项目南通市科技局社会发展科技计划项目江苏省政府留学奖学金项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 酶显色法基因芯片检测幽门螺杆菌克拉霉素耐药基因被引量：1
- 2009年
- 目的建立酶显色法基因芯片快速、准确检测幽门螺杆菌(Hp)克拉霉素耐药基因。方法设计一对引物,以地高辛标记其中一条引物,扩增Hp 23S rRNA部分基因,得到285 bp DNA片段,根据23S rRNA上的5个位点设计探针和制作芯片,扩增产物与芯片杂交,酶显色后扫描判读结果。结果63例Hp阳性标本中,芯片结果显示突变率:A2143G为3.17%、T2182C为11.11%、A2143G+T2182C为14.29%;酶显色法芯片和DNA直接测序法检测Hp 23S rRNA基因多态性结果符合率为96.83%;质粒浓度为1.53×102拷贝/μl时芯片法仍可检测到野生和突变信号。结论酶显色法芯片检测实现了高通量的同时具有较高敏感性和特异性,能同时检测23S rRNA的多种突变型,无需特殊仪器,可以用于指导临床合理用药和进行流行病学调查,有一定的临床应用价值。
- 宣世海周玉贵邵柏崔亚林周洁王琴徐康王惠民褚少朋景奉香金庆辉
- 关键词：基因芯片幽门螺杆菌克拉霉素耐药
- 人BAFF-R基因启动子活性的初步研究
- 2010年
- 目的以B淋巴细胞刺激因子受体BAFF-R基因5'上游区序列为研究对象,初步鉴定、分析该基因的启动子所在区域。方法克隆BAFF-R基因5'侧翼区1823 bp序列,构建8个含有不同长度启动子序列的荧光素酶报告基因表达质粒pGL3-B1～B8,将这8个序列缺失重组质粒与psv-β-gal质粒共转染细胞,检测荧光素酶的相对活性,确定启动子所在区域。结果8个重组质粒中pGL3-B2、pGL3-B3、pGL3-B5、pGL3-B6启动子的活性较低;pGL3-B7启动子的活性最强,pGL3-B8启动子活性最低。结论BAFF-R基因5'端-288～-430、-712～-868和-1420～-1562三个区段可能存在转录沉默子元件,-617～-712和-1277～-1420区段存在转录增强子元件,BAFF-R基因的核心启动子可能位于-1420～+261区域。
- 袁宏香钱晶晶王惠民王跃国吴信华祝文彩浦江申娴娟鞠少卿
- 关键词：启动子报告基因
- 靶向增殖诱导配体的RNA干扰对人结直肠癌裸鼠移植瘤的影响被引量：6
- 2010年
- 目的利用RNA干扰（RNAi）技术观察增殖诱导配体（APRIL）siRNA（pGC—shAPRIL重组干扰质粒）对裸鼠SW480移植瘤的影响。方法建立裸鼠人结直肠癌移植瘤模型，待皮下瘤块长到一定体积，全部裸鼠分为APRILsiRNA组、空载体组和磷酸盐缓冲液（PBS）组，分别进行瘤块内注射。逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测移植瘤APRILmRNA水平；瘤块和裸鼠肝肺苏木素-伊红（HE）染色病理检测；免疫组织化学法检测APRIL、核增殖抗原（Ki-67）、基质金属蛋白酶（MMP）-2蛋白表达。结果APRILsiRNA组，与空载体组和PBS组比较，APRILmRNA[（1．36±0．03）×10^8、（1．05±0．02）×10^7、（1．04±0．01）×10^8copy／ml]和蛋白表达得分（2．00±0．40、7．00±0．45、8．00±0．40）明显降低（P〈0．05）；瘤块体积显著减小[（0．78±0．04）、（1．60±0．07）、（1．66±0．06）cm3]（P〈0．05）；与之相应Ki-67（2．00±0．45、8．00±0．54、7．00±0．44）和MMP-2（3．00±0．44、7．00±0．45、7．00±0．55）蛋白表达显著减弱（P〈0．05）。结论RNAi敲低APRIL基因表达，抑制了裸鼠SW480移植瘤的生长和转移，打靶APRIL基因的RNAi技术有望成为人结直肠癌的治疗途径。
- 王敬春王惠民丁伟峰黄华孙宝兰景蓉蓉
- 关键词：RNA干扰结直肠癌增殖
- B淋巴细胞刺激因子及其受体在多发性骨髓瘤中的表达及其意义被引量：3
- 2009年
- 目的探讨B淋巴细胞刺激因子（BLyS）及其受体在多发性骨髓瘤（MM）中的表达及其意义。方法采用流式细胞术（FCM）分析人MM肿瘤细胞系KM3及CZ-1细胞表面BLyS及其受体的表达；RT—PCR及Western blot进一步验证BLyS及其受体的表达；采用荧光免疫细胞化学法和激光共聚焦技术鉴定KM3细胞中BEyS蛋白的表达与定位；WST细胞增殖实验检测BLyS对MM肿瘤细胞生长与存活的影响。ELISA及荧光定量-聚合酶链反应（RTQ-PcR）测定MM患者BLyS蛋白与mRNA的表达水平。同时分析乳酸脱氢酶（LDH）、β2微球蛋白浓度与BLys蛋白及mRNA表达水平的关系。结果①MM细胞能够表达BLyS及其受体；②BLyS定位表达于KM3细胞的浆膜上；③BLyS促进MM细胞的生长与存活；④MM患者BLys蛋白或mRNA表达水平显著高于正常对照组（P值均〈0．01）；⑤直线相关分析显示LDH、β2微球蛋白浓度与BLyS蛋白及mRNA表达水平呈显著相关性。结论BLyS及其受体对于MM发生、发展可能起着重要的作用。
- 浦江王跃国王梅袁红香鞠少卿
- 关键词：多发性骨髓瘤B淋巴细胞刺激因子乳酸脱氢酶Β2微球蛋白
- 增殖诱导配体小干扰RNA对人结直肠癌裸鼠移植瘤细胞增殖和凋亡的影响被引量：4
- 2010年
- 目的 研究增殖诱导配体（APRIL）小干扰RNA（siRNA）对人结直肠癌裸鼠移植瘤细胞增殖和凋亡的抑制作用.方法 建立人结直肠癌裸鼠移植瘤模型,将裸鼠分为3组,瘤块内分别注射APRIL siRNA、空载体和PBS液,每2天注射1次,共2周.采用实时荧光定量PCR法和免疫组化SP法检测APRIL siRNA对APRILmRNA和蛋白表达的影响,采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测肿瘤内增殖细胞核抗原（PCNA）含量的变化,采用免疫组化SP法检测肿瘤内bcl-2和bcl-xl蛋白的表达,采用原位末端标记（TUNEL）法检测肿瘤细胞的凋亡.结果 APRIL siRNA能敲低APRIL基因的表达水平,APRIL siRNA组移植瘤内APRIL mRNA的相对表达量为（0.13 ±0.05）×10-3,明显低于空载体组[（0.95 ±0.04）× 10-3]和空白对照组[（0.96±0.05）×10-3,P＜0.05].APRIL siRNA组APRIL蛋白的表达比空载体组和空白对照组降低了（87.5%±5.0%,P＜0.05）.APRILsiRNA组裸鼠移植瘤生长缓慢,瘤块重量较空载体组和PBS对照组明显降低（P＜0.05）.APRIL siRNA组移植瘤内PCNA的含量为（176.8±18.1）ng/ml,明显低于空载体组[（330.0±20.5）ng/ml]和空白对照组[（328.4±22.8）ng/ml,P＜0.05];bcl-2和bcl-xl蛋白的表达量也较空载体组和空白对照组明显降低（P＜0.05）.APRIL siRNA组移植瘤内凋亡细胞的数量增多,凋亡率为40.1%±2.5%,明显高于空载体组（2.5%±0.1%）和空白对照组（2.5%±0.2%,P＜0.05）.结论 APRIL siRNA能在裸鼠体内抑制人结直肠癌细胞的增殖,并促进细胞凋亡,达到显著的抑瘤效果.APRIL基因可能成为人结直肠癌基因靶向沉默治疗的重要候选基因之一.
- 王敬春丁伟峰孙宝兰景蓉蓉黄华王惠民
- 关键词：增殖诱导配体结直肠肿瘤裸鼠
- NF-κB抑制剂和IFN-γ对BAFF-R基因启动子活性的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨IFN-γ和NF-κB抑制剂对人BAFF-R基因启动子活性的影响。方法:以人全血基因组DNA为模板,PCR方法扩增得到BAFF-R基因转录起始点上游5’端-1562^+261 bp的片段,与荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic连接构建8个序列缺失质粒。将重组质粒瞬时转染人多发性骨髓瘤细胞株KM3,通过检测荧光素酶的相对活性,确定启动子活性最强的区域;分别用NF-κB抑制剂(BAY11-7082)和IFN-γ对活性最强的启动子进行干预,测定并比较荧光素酶的相对活性;同时RT-PCR检测干预前后BAFF-R基因mRNA的表达水平。结果:IFN-γ对BAFF-R基因启动子活性有促进作用并且可以上调BAFF-R mRNA的表达,NF-κB抑制剂(BAY11-7082)对BAFF-R基因启动子活性有抑制作用并且可以下调BAFF-R mRNA的表达。结论:IFN-γ和NF-κB信号通路参与了BAFF-R基因的转录调控,为进一步研究BAFF-R的调节机制提供了基本的依据。
- 袁宏香王跃国吴信华倪红兵浦江申娴娟鞠少卿
- 关键词：BAFF-R启动子IFN-ΓNFΚ-B
