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排序方式：

羧肽酶A1全酶及其活性中心基因的克隆及原核表达被引量：1: 2003年; 通过RT-PCR方法扩增出CPA1全酶及活性中心基因,分别克隆入载体pGEM-T easy,测序分析。将两段目的基因亚克隆于表达载体pGEX-4T-1,测序证实序列插入正确后转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达重组蛋白。结果表明,成功克隆了人CPA1全酶及其活性中心基因并得到了原核表达产物,为进一步分析比较CPA1全酶及其活性中心的特性、了解CPA1结构与功能的关系并最终得到CPA1最小活性结构域奠定基础。; 岳乔红苏明权郝晓柯程晓东杨柳于文彬; 关键词：活性中心基因克隆原核表达

电转化条件对大肠杆菌XL1-Blue菌株转化效率的影响被引量：22: 2003年; 探讨XL1-Blue菌株电转化的最优条件。通过改变电压、质粒DNA浓度、细菌生长周期等影响电转化的重要条件,做出转化率的变化曲线,从中探索电转化的最优条件。实验结果得出在电容25μF、电阻200 Ω、电压2.5 kV、D600nm为0.3～0.4、0.2 cm电转化杯、DNA终浓度0.1μg/ml、感受态细胞终浓度2.5×1012、氨苄青霉素浓度50μg/ml的条件下,电转化效率最高,可达到7.64×108。电转化实验转化效率高,重复性好,为成功的建立抗体库提供了保证。; 韦晓明苏明权杨安钢赵晶温伟红郝晓柯; 关键词：电穿孔电转化大肠杆菌

以鼠源重链Fd片段为模板导向筛选人源性抗γ-精浆蛋白抗体轻链被引量：1: 2006年; 目的:以鼠源抗γ-sm抗体重链Fd片段为模板,筛选人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链。方法:利用RT-PCR从前列腺癌患者外周血淋巴细胞扩增出全套的人抗体轻链基因,克隆入含鼠源性抗γ-sm抗体重链Fd片段的噬粒载体pComb3X/mFd中,电转化大肠杆菌XL1-Blue后建立人-鼠杂合的Fab抗体库。通过稀释滴定、限制性酶切和随机测序,对所建杂合库的库容、重组率和多样性分别进行鉴定,以M13K07辅助噬菌体超感染,利用亲和纯化的γ-sm为抗原,对挽救展示的噬菌体抗体库进行3轮淘筛和克隆鉴定。最后对筛选出的杂合抗体进行初步的功能检测。结果:构建成功1.2×107CFU、重组率为90%、多样性好的杂合人-鼠噬菌体抗体库。利用纯化的γ-sm3轮亲和淘筛后,5个克隆成功诱导表达特异性的pIII融合抗体。ELISA进一步检测表明,5个克隆均呈特异性阳性反应,其中2个克隆亲和力较高,测序显示其所含轻链基因序列完全相同,可变区来源于IGKV4-101胚系基因家族。结论:利用鼠源Fd片段为模板,导向筛选杂合噬菌体库,成功筛选到人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链。; 张青张思河易静苏明权包国强郝晓柯; 关键词：噬菌体抗体库

人羧肽酶A1活性中心基因的克隆及原核表达被引量：4: 2003年; 目的 :克隆人羧肽酶A1 (carboxypeptidaseA1 ,CPA1 )活性中心基因 ,构建重组表达载体并对其进行诱导表达 .方法 :通过RT PCR方法扩增出正常胰腺组织中CPA1活性中心基因 ,克隆入载体 pGEM Teasy ,测序分析 .将该目的基因亚克隆于表达载体 pGEX 4T 1 ,测序证实序列正确后转化大肠杆菌DH5α ,经IPTG诱导表达重组蛋白 .结果 :获得了人CPA1活性中心基因 ,构建了重组表达质粒 ,表达的蛋白以SDS PAGE分析 ,在Mr 约 4 6 0 0 0处出现一条新生蛋白带 ,经凝胶薄层扫描检测 ,表达量约占菌体总蛋白的 2 2 .1 % .结论 :成功克隆人CPA1活性中心基因并得到了其原核表达产物。; 岳乔红于文彬郝晓柯别良峰程晓东苏明权杨柳; 关键词：活性中心基因克隆原核表达

人抗体Fab段天然抗体库的建立被引量：2: 2008年; 目的:提取健康人外周血淋巴细胞的mRNA,利用反转录PCR方法,建立一个大容量的人抗体Fab段的天然抗体库。方法:收集健康者外周血,提取淋巴细胞,以淋巴细胞mRNA为模板,扩增人抗体Fab段,连入载体pComb3内,利用电转化的方法,构建噬菌体抗体库。结果:最终建立了重链库为1.73×107,轻链库为8.52×104的天然抗体库,并利用酶切鉴定计算出实际库容为重链库1.21×107,轻链库4.26×104,所以理论上所建天然噬菌体抗体库总的库容量可以达到5.15×1011。结论:成功构建了一个大容量的完全人源化的天然抗体库。; 韦晓明苏明权杨安钢温伟红郝晓柯; 关键词：FAB 反转录PCR

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国家科技重大专项(2002AA2Z3109)