国家自然科学基金(30470958)
- 作品数：11 被引量：27H指数：4
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- 相关机构：温州医学院浙江省人民医院温州医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金温州市科技局资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CEQ^(TM)8800型遗传分析系统检测DNA序列的影响因素研究被引量：1
- 2006年
- 目的:研究DNA循环测序过程中一些影响因素及其序列图谱。方法:对测序中模板、引物、测序反应条件和体系及其产物的纯化等因素进行比较研究。结果:模板因素是测序成败的主要原因,模板的质量直接影响着测序图谱;引物失效,与模板匹配不完全,Tm值过低等因素也能引起测序失败;利用乙醇沉淀纯化测序反应产物、效果好且简单、经济。结论:模板的纯度和浓度对测序成功与否起决定作用。最佳反应条件可降低成本,提高测序成功率。仪器操作熟练、正确与否也会影响测序结果。
- 季敬璋张洁吕建新
- 关键词：DNA测序影响因素
- 线粒体tRNA^(Leu(UUR))基因A3243G突变糖尿病家系的基因诊断被引量：2
- 2007年
- 目的确认一个由线粒体 tRNA^(Leu(UUR))基因 A3243G 点突变引起的母系遗传糖尿病家系,并分析其临床特征。方法采用 PCR 产物直接测序法对53例无血缘关系的有家族史的2型糖尿病(T2DM)患者线粒体 DNA(mitochondria DNA,mtDNA)片段(nt3153～nt3551)进行点突变筛选,然后对筛选到的 A3243G 异质性突变样本作 DHPLC 分析确认。详细调查此突变糖尿病家系发病特征,并做线粒体基因组全序列分析。结果在53例样本中检测到1例 A3243G 突变,对其家系调查发现7例母系成员中5例患病(1男4女),患者多数伴听力损害,体重指数减低,口服降糖药效果不佳最终需用胰岛素治疗,呈母系遗传,发病年龄不等,平均32.75岁。线粒体全基因组测序表明患者存在包括 A3243G 突变的共33个变异位点,但除 A3243G 突变外其余都不是进化上高度保守的位点,因此 A3243G 突变是与这个糖尿病家系发病有关的惟一的 mtDNA 突变。结论线粒体 tRNA^(Leu(UUR))基因 A3243G 突变是这个三代母系遗传糖尿病家系发病的原因,其临床特点是发病年龄轻、不胖、母系遗传、耳聋发生率和使用胰岛素比率高等。
- 郦卫星季敬璋俞红吕建新
- 关键词：糖尿病DNA线粒体突变
- 应用DHPLC进行线粒体异质性突变分析被引量：4
- 2007年
- 目的:检测人类线粒体DNA异质性从而建立有效的筛查低水平异质性DNA的方法。方法:选择包含Ⅱ型糖尿病高突变位点的人mtDNA 3083～3339 nt片段进行PCR扩增,以不同比例混合相差一个碱基的两种DNA片段的PCR扩增产物,建立不同比例异质性DNA模型。确定最佳检测条件后分别用变性高效液相色谱技术(DHPLC)和DNA测序技术进行分析和比较。结果:应用DHPLC检测mtDNA 3083～3339 nt(257 bp),最低可检测出该区域含量为5%的异质性样本,而DNA测序技术只能检测出异质性含量大于20%的样本。结论:成功建立分析mtDNA3083～3339 nt片段异质性突变的方法,该方法可用于检测低水平的mtDNA异质性。
- 胡昕许惠惠吕建新叶薇季敬璋
- 关键词：变性高效液相色谱测序线粒体DNA
- 线粒体基因组np16181～16193区基因变异与2型糖尿病的关联研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨线粒体基因组np16181～16193区基因变异与2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）之间的关联。方法随机收集199例浙江地区2型糖尿病患者和205名正常对照，采用聚合酶链反应、基因直接测序检测该区域基因，同时分析变异与2型糖尿病及主要临床指标间的关联。结果发现np16181～16193区域为高度变异区，存在多种变异形式，考虑为基因多态性位点；在该区域发现有4种变异碱基排列形式仅存在于T2DM中；在np16181～16193区域中变异组餐后1h血糖明显高于未变异组（P〈0．05），而其余各生化指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论线粒体基因组np16181～16193区域引起的变异尚不能视为2型糖尿病的易感因素。
- 陈芳建俞红林虹胡朝晖胡雅国吕建新
- 关键词：线粒体基因组2型糖尿病
- 单纯线粒体DNA变异的2型糖尿病的检验诊断和临床研究被引量：4
- 2007年
- 目的分析线粒体 DNA(mitochondria DNA,mtDNA)变异与2型糖尿病(T2DM)及其并发症的关系,探讨 mtDNA 检测对于 T2DM 的诊断价值。方法采用 PCR 产物直接测序法对浙江籍汉族人群中无血缘关系的315例 T2DM 患者及158名正常对照个体的 mtDNA 片段(nt3153～nt3551)进行分析,同时对每例患者作常规生化检测。结果 T2DM 患者组和健康对照组与标准序列比对存在着大量的基因变异位点,具有中国汉族人的多态性。把患者检测到的变异位点结合临床资料分析发现 T3183A、A3243G、T3290C、T3338C、T3398C、G3421A、C3435T 等基因变异与糖尿病家族史或并发症有密切联系。比较有家族史和无家族史的有基因变异的 T2DM 患者,有家族史组发病年龄较无家族史组明显提前[(47.7±11.1)岁与(55.1±13.8)岁,t=2.489,P<0.05],有家族史组的体重指数(BMI)显著低于无家族史组[(20.59±5.16)kg/m^2与(23.82±2.32)kg/m^2,t=3.234,P<0.01],差异有统计学意义;而两组的甘油三酯(TG)[(1.32±0.60)mmol/L 与(1.33±0.68)mmol/L,t=0.071,P>0.05]、总胆固醇(TC)[(4.07±1.23)mmol/L与(4.13±0.72)mmol/L,t=0.277,P>0.05]、空腹血糖(FBG)[(9.27±2.52)mmol/L与(9.49±3.36)mmol/L,t=0.308,P>0.05]等差异无统计学意义。结论中国汉族人 mtDNA 存在多态性,T2DM 患者 mtDNA 中存在着大量的变异位点,尽管 mtDNA 变异位点与糖尿病特征、家族史或并发症有一定关系,但目前尚不能作为诊断 T2DM 的独立指标。
- 郦卫星吕建新
- 关键词：DNA线粒体基因
- 浙江汉族人群线粒体DNA ND1基因G3316A突变与2型糖尿病
- 2009年
- 目的:研究与日本人2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)相关的线粒体DNA(mitochondria DNA,mtDNA)ND1基因G3316A突变在浙江汉族T2DM人群中的发生率及其临床意义。方法:采用PCR产物直接测序法对浙江籍汉族人群中无血缘关系的315名T2DM患者及158名正常对照的外周血mtDNA进行检测,并用DNASTAR和Antheprot 5.0软件分析突变位点。结果:在T2DM患者中检测到6例(占1.90%)G3316A突变,对照组中发现3例(占1.90%)突变,突变发生率在两组间差异无显著性(P>0.05)。携带G3316A位点突变的T2DM组与无该突变的T2DM组之间的临床特点(发病年龄、体重指数和血糖水平等)比较差异亦无显著性。蛋白二级结构中α-螺旋、β-折叠、β-转角和不规则卷曲的构成比没有发生改变。结论:线粒体DNA ND1基因G3316A突变可能与浙江汉族人群T2DM的发生无关,仅为人群中的基因多态性。
- 郦卫星华燕吟吕建新
- 关键词：糖尿病线粒体DNA突变多态性
- 线粒体基因组D-Loop区基因多态性与2型糖尿病的相关性被引量：5
- 2009年
- 随机选取199例浙江地区2型糖尿病患者与102例正常对照,采用聚合酶链反应(Polymerase chain re-action,PCR)、基因片段直接测序来检测线粒体基因组D-Loop区域基因变异情况,同时分析其与主要临床指标的关系。结果显示:线粒体基因组D-Loop区域为一高变异区,np73A-G、np263A-G、np16223C-T、np16519T-C为4个高变异位点;发现29个未见报道的新变异位点;np193A-G、np234A-G、np16108C-T等变异与糖尿病家族史有关。这表明浙江籍汉族人线粒体基因组D-Loop区存在大量基因多态性现象,此区域的某些变异可能与糖尿病的发生发展等具有一定相关性。
- 陈芳建俞红樊璠吕建新
- 关键词：线粒体基因组2型糖尿病
- 浙江地区汉族人线粒体DNA ND1基因T3394C突变与老年2型糖尿病
- 2008年
- 目的探讨线粒体DNA ND1基因T3394C突变与老年2型糖尿病的关系。方法采用聚合酶链反应（PCR）产物直接测序法对340例无血缘关系的2型糖尿病患者（其中老年糖尿病组90例，非老年糖尿病组250例）和265例健康对照者（老年健康对照组130例，非老年健康对照组135例）的血细胞线粒体DNA进行突变位点检测，并用DNASTAR和Antheprot 5．0软件分析突变位点。结果老年糖尿病组、老年健康对照组和非老年糖尿病组分别检出5例、1例和2例T3394C突变。T3394C突变在老年糖尿病组和老年健康对照组之间分布差异有统计学意义（P〈0．05），在老年糖尿病组和非老年糖尿病组之间分布差异也有统计学意义（P〈0．05）。蛋白质结构预测显示T3394C突变引起ND1蛋白二级结构改变。结论线粒体DNA ND1基因T3394C突变可能与老年2型糖尿病的发生有关。
- 郦卫星季敬璋吕建新
- 关键词：DNA线粒体DNA突变分析
- 线粒体基因组D-Loop区基因多态性与2型糖尿病的相关性研究
- 探讨线粒体基因组 D—Loop 区基因多态性及与2型糖尿病之间的关系。随机选取浙江地区人群199例2型糖尿病(T2DM)患者与102例同龄正常对照,采用 PCR 扩增和基因片段直接测序方法检测线粒体基因组 D-Loop ...
- 陈芳建俞红樊璠吕建新
- 关键词：2型糖尿病线粒体基因组多态性
- 文献传递
- 2型糖尿病患者mtDNA变异筛查研究被引量：6
- 2007年
- 目的探讨线粒体基因突变与2型糖尿病的关系。方法随机筛查222例散发2型糖尿病患者和191名正常对照，以聚合酶链反应、限制性内切酶片段长度多态性及T-A克隆测序和变性高效液相色谱分析技术验证等方法检测线粒体基因突变。结果糖尿病组线粒体基因（3153—3551nt）突变总的发生率（24．32％）明显高于正常组（7．33％）（P〈0．05）；发现3个尚未见报道的新突变位点：A3209T、T3253G和A3467C，而C3497T则在糖尿病中是首次报道；起病年龄、体重指数、空腹血糖、糖化血红蛋白、高密度脂蛋白和糖尿病肾病等指标是线粒体基因突变的相关因素（P〈0．05）。结论温州地区糖尿病患者存在多种线粒体基因点突变，其在糖尿病的发生发展中起重要作用。
- 季敬璋吕建新叶薇胡昕汪大望
- 关键词：线粒体DNA糖尿病突变
