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Raji细胞基因组文库的构建与筛选被引量：1: 2008年; 目的：构建Raji细胞基因组文库，用EBV DNA探针对文库进行筛选。方法：Raji细胞基因组DNA经BamHI酶切消化后，低熔点琼脂糖回收9～23kb的酶切DNA片段，通过匹配黏性末端与磷酸化的Lambda DASH ⅡBam HI酶切载体臂连接，在体外经包装系统包装成活的重组噬菌体，测定原始文库与扩增文库的滴度，用同位素标记的EBVDNA探针对Raji细胞基因组文库进行筛选。结果：Raji细胞原始文库与扩增文库的滴度分别为1．8×10^5和2．8×10^8pfu／mL。文库经筛选获得4个阳性克隆，随机挑取1个阳性克隆稀释后铺平板作进一步杂交鉴定，发现所有噬茵斑均有杂交信号，证明该克隆确为阳性克隆。抽提该阳性克隆DNA，进行Bam HI酶切鉴定，证实插入片段的长度为8．5kb。经测序、BLAST序列比对，结果显示插入片段一侧为EBV BamHI W片段，另一侧与人类15号染色体RPl1-665A22克隆高度同源。结论：Raji细胞基因组文库的成功构建，为进一步克隆包含EBV整合位点的细胞基因组序列、探讨EBV整合参与肿瘤发生发展的分子机制奠定了基础。; 高建明李小玲李桂源; 关键词：RAJI细胞基因组文库

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国家自然科学基金(30470955)