辽宁省自然科学基金(20050302)
- 作品数：6 被引量：16H指数：4
- 相关作者：胡兰郝文博杨晓宇李新华谷文峰更多>>
- 相关机构：沈阳农业大学黑河学院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
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- 乌鸡MSTN基因的3个转录子的克隆测序及序列分析
- 2010年
- 以3周龄乌鸡腿肌为试验材料,提取RNA进行RT-PCR反应、TA克隆和测序,并进行序列测定。结果表明:乌鸡腿肌中存在3种不同的MSTN基因转录子,分别将其命名为cbMSTN-1、cbMSTN-2和cbMSTN-3;cbMSTN-1由1128bp组成,cbMSTN-2由985bp组成,cbMSTN-3由754bp组成;cbMSTN-2与cbMSTN-1相比缺失了374～517bp处的143bp碱基,cbMSTN-3与cbMSTN-1相比缺失了374～748bp处的374bp碱基;cbMSTN-2、cbMSTN-3与cbMSTN-1的同源性均为99%。
- 袁亚琦郝文博王宏艳张婷婷胡兰
- 关键词：MSTN基因乌鸡克隆
- 大骨鸡胚胎肌生成抑制素基因(MSTN)cDNA的克隆、测序及原核表达被引量：4
- 2009年
- 提取大骨鸡胚胎腿肌RNA，对肌生成抑制素基因（MSTN）RT—PCR扩增、TA克隆和测序。结果表明，大骨鸡胚胎腿肌中存在2种不同大小的MSTN cDNA，一种MSTN cDNA由1128bp组成，我们将该序列称为chMSTN-1，与已报道的鸡MSTN cDNA（gi：38349516）序列同源性为100％；另外一种MSTN cDNA由985bp组成，与chMSTN-1相比，缺失了374～517处的143个碱基，并且在51，234，324bp处也发生碱基变化，这可能是一种新的MSTN cDNA，我们将该序列命名为chMSTN-2。另外，分别对上述2种MSTN cDNA进行双酶切、亚克隆，成功构建重组表达载体pGEX—KG-chMSTN-1与pGEX-KG-chMSTN-2，转染大肠杆菌并诱导表达。检测结果表明，chMSTN-1和chMSTN-2均能在大肠杆菌中表达，重组蛋白以包涵体形式存在，大小分别约为66000和55000。
- 胡兰李桂伶吴丹郝文博杨晓宇董顺义
- 关键词：大骨鸡原核表达
- 一种新的番鸭MSTN基因转录本的克隆及真核表达被引量：4
- 2009年
- 利用RT-PCR扩增MSTN cDNA全序列,然后进行克隆、测序;将重组质粒pEGFP-N1-MSTN-2通过脂质体瞬时转染番鸭成纤维细胞,用RT-PCR和SDS-PAGE检测其蛋白表达.结果表明,番鸭体内存在2种MSTN基因转录本,MSTN-1(EU336991)和MSTN-2(EU336992),大小分别为1128 bp和754 bp,同源性为94%;且MSTN-2是一个全新的MSTN转录本,含有1个开放阅读框,可编码124个氨基酸.将pEGFP-N1-MSTN-2转染番鸭成纤维细胞48 h后,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白表达,蛋白大小约为14 kDa.这对于进一步研究MSTN基因功能及作用机理具有重要意义.
- 郝文博杨晓宇李新华谷文峰胡兰
- 关键词：克隆真核表达
- 寿光鸡MSTN基因3种不同转录子的克隆及序列分析被引量：7
- 2008年
- 采集1日龄寿光鸡腿肌,提取RNA进行RT-PCR反应、TA克隆和测序,序列测定结果表明:寿光鸡腿肌中存在3种不同大小的MSTN cDNA。第1种MSTN cDNA由1128bp组成,将该序列命名为csMSTN-1,与已报道的鸡MSTN cDNA序列(gb:AF019621.1)同源性为99%;第2种MSTN cDNA由985bp组成,命名为csMSTN-2,与csMSTN-1相比,缺失了374～517处的143个碱基,并且在6处存在碱基变化;第3种MSTN cDNA由754bp组成,命名为csMSTN-3,与csMSTN-1相比,缺失了374～748处的374个碱基,并且存在26处碱基变化。这是世界上首次发现鸡体内存在3种不同大小的MSTN基因转录子,该结果为进一步确定MSTN基因的作用机理提供了新的试验依据。
- 李新华胡兰谷文峰郝文博杨晓宇
- 关键词：MSTNCDNA寿光鸡
- SD大鼠Sirt1基因真核表达的研究
- 2008年
- 用RT-PCR扩增含有XhoI/EcoRI酶切位点的Sirt1片段,克隆、测序后,构建真核荧光表达载体pEGFP-N1-Sirt1、脂质体介导转染293细胞,最后利用SDS-PAGE检测蛋白表达情况。结果表明,经脂质体介导重组体pEGFP-N1-Sirt1可成功转染293细胞;转染48h后,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达;SDS-PAGE证明表达的融合蛋白相对分子质量约为41kD。该结果为进一步研究Sirt1在哺乳动物细胞中的作用奠定了基础。
- 谷文峰李新华刘希颖胡兰
- 关键词：SIRT1基因克隆真核表达
- MSTN RNAi双元表达载体对成肌细胞增殖及分化的影响被引量：4
- 2009年
- 为了确定MSTN RNAi双元表达载体pEGFP-N1-M1-M2对成肌细胞增殖和分化的影响,利用脂质体介导法将该双元表达载体转染成肌细胞,MTT法检测MSTN RNAi双元表达载体对成肌细胞增殖的作用,Giemsa染色检测pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体对成肌细胞融合率的影响。试验结果表明,pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体有促进成肌细胞增殖和分化的作用,能够促进成肌细胞大量融合。该结果为进一步探讨MSTN基因的作用机理提供了更为便捷的研究方法。
- 吴丹胡兰
- 关键词：MSTN基因双元表达载体成肌细胞增殖分化
