国家自然科学基金(30873021)
- 作品数：9 被引量：31H指数：3
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- SATB1、hTERT基因在前列腺癌组织中的表达及其临床意义被引量：10
- 2011年
- 目的探讨特异性核基质结合区结合蛋白-1（SATB1）、人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学技术检测前列腺癌和前列腺增生症组织中SATBl、hTERT基因的表达。结果60例前列腺癌组织SATB-1阳性表达率86．7％，而30例前列腺增生组织中无阳性表达，差异有统计学意义（P〈0．01）；其中，前列腺癌转移组100．0％阳性表达，而未转移组73．3％阳性表达，SATB-1表达在有无转移组间差异有统计学意义（P〈0．01）。前列腺癌组织中hTERT阳性表达率为88．3％，前列腺增生组织中阳性率为20．0％，差异有统计学意义（P〈0．01）；而前列腺癌转移组和未转移组hTERT阳性率分别为90．0％和86．7％，差异无统计学意义（P〉0．05）。相关分析提示，前列腺癌和前列腺增生组织中SATB-1蛋白与hTERT蛋白表达无明显相关。结论SATB1、hTERT基因的表达可能与前列腺癌的发生和转移相关，联合检测SATB1、hTERT基因对评价前列腺癌进展有一定的临床意义。
- 毛立军李望杨春华王军起陈家存郑骏年
- 关键词：前列腺癌HTERT基因
- DNA甲基化对Ki-67启动子转录活性的影响被引量：6
- 2011年
- 目的观察DNA甲基化对Ki-67启动子转录活性的影响。方法使用S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体，使用甲基化酶（M．SssI、M．HpalI、M．HhaI）诱导Ki-67启动子DNA片段发生不同程度的甲基化，将甲基化的启动子片段插入pGL3-Basic载体得到甲基化Ki-67启动子荧光素酶报告质粒，并以非甲基化Ki-67启动子荧光素酶报告质粒作为对照，分别转染正常细胞（HL-7702、HUVEC）和肿瘤细胞（A549、EJ、Kert-3、Hela和SGC-7901），使用双荧光素酶报告基因检测系统测定甲基化的Ki-67启动子在这些细胞中的转录活性。结果甲基化Ki-67启动子的转录活性均有不同程度的下降，其下降幅度依次为M．SssI处理组〉M．HhaI处理组〉M．HpalI处理组，其中M．SssI处理组启动子的转录活性几乎完全消失。结论Ki-67启动子的甲基化抑制了其转录活性，抑制程度与DNA甲基化程度和甲基化位置有关。
- 李望钱国伟徐为田卉李连涛刘俊杰陈菲菲李慧中章龙珍郑骏年
- 关键词：DNA甲基化KI-67基因启动子转录活性
- Ki-67核心启动子在胃癌SCG-991细胞中的转录活性被引量：3
- 2009年
- 目的观察Ki-67核心启动子在人胃癌细胞中的转录活性。方法使用缺失分析法分别从5’端和3’端对Ki-67基因启动子逐段缺失，得到不同长度的8个和3个截短DNA片段。分别插入pG13-Basic载体后转染人胃癌SCG-991细胞，使用双荧光素酶检测系统鉴定转录活性，确定Kj-67基因核心启动子。比较Ki-67核心启动子与另2种肿瘤启动子hTERT和Survivin的转录活性。结果自5’端缺失得到的-223～＋771截短片段在SCG-991细胞内转录活性达到病毒SV40启动子活性的56．5％；自3’端缺失的-223～＋30截短片段转录活性更强，为-223～＋771片段活性的2．1倍，是hTERT启动子的1．7及Survivin启动子和15．3倍。结论Ki-67核心启动子区域为-225～＋30，在胃癌SCG-991细胞中的转录活性超过SV40启动子，以及hTERT启动子及Survivin启动子。
- 徐为郑骏年宋文哲李圆张宝福刘俊杰顾玉明高超章龙珍李望裴冬生
- 关键词：KI-67基因启动子胃癌
- Ki-67启动子的克隆及其转录活性被引量：8
- 2009年
- 目的克隆肿瘤特异Ki-67启动子，观察其在人肿瘤细胞中的转录活性。方法提取。肾癌Ketr-3细胞基因组总DNA作为模板，聚合酶链反应（PCR）获取1．6kb的Ki-67启动子DNA片段。克隆到pGL3-Basic载体构建双荧光素酶检测质粒pGLB-Ki-67。将pGLB—Ki-67转染4种人肿瘤细胞及人脐静脉内皮Huvec细胞，使用双荧光素酶检测系统鉴定启动子活性及肿瘤特异性。结果电泳与测序结果显示克隆出的Ki-67启动子片段序列与Genbank中记录一致，pGLB．Ki-67质粒构建成功。其启动子活性在Hela、BIU-87、Ketr-3、A5494种人肿瘤细胞内分别达到SV40 promoter／enhancer活性的21．0％、31．1％、23．9％和7．2％；在Huvec细胞内仅为0．5％。结论克隆出Ki-67基因启动子（-820～＋771），并证明其具有良好转录活性。
- 孙方浩郑骏年徐为刘晓昀张宝福宋文哲刘俊杰章龙珍顾玉明高超李望裴冬生
- 关键词：KI-67基因肿瘤启动子基因治疗
- 野生型p53转录抑制肿瘤HeLa细胞Ki-67基因表达
- 2011年
- 目的观察野牛型p53对脖瘤HeLa绍庭Ki-67基因转录的影响。方法将不冠浓度的野生型p53表达质粒pCMV—p53（0．01、0．02、0．05、0．10和0．20Ixg）与Ki-67核心启动子质粒pGL-BK235瞬时共转染HeLa细胞，荧光素酶活性分析检测Ki-67核心启动子活性，逆转录-聚合酶链反应（RT～PCR）检测Ki-67mRNA表达。结果单独转染pGL3—8K235组相对荧光素酶活性为59．32±3．57，不同浓度pCMV—p53（0．01、0．02、0．05、0．10、0．20μg）处理组荧光素酶活性分别为32．03±0．59、21．67±0．38、13．03±0．49、9．63±0．42和9．61±0．11。除0．1、0．2μg浓度两组间差异无统计学意义（P〉0．05）外，其余各组间差异均有统计学意义（P〈0．05）。随pCMV—p53转入量的增加，Ki-67mRNA的表达量显著下降（P〈0．05）。结论野生型p53过表达可以有效抑制Ki-67核心启动子的活性、下调Ki-67基因的转录。
- 李望王梅娟徐为钱国伟李连涛刘俊杰陈菲菲李慧中裴冬生郑骏年
- 关键词：肿瘤P53转录
- 荷载β-actin、GAPDH基因小干扰RNA的双调控增殖腺病毒的构建
- 2009年
- 目的构建hTERT启动子调控的表达β—actin、GAPDH基因小干扰RNA（siRNA）的条件增殖腺病毒。方法分别将β—actin—siRNA、GAPDH—siRNA的模板DNA克隆至质粒pGPH1／GFP／Neo，构建pGPH1／GFP／Neo—β-actin、pGPH1／GFP／Neo—GAPDH。以pGPH1／GFP／Neo-β—actin为模板，PCR扩增出β—actin—siRNA表达框并克隆进质粒pZHTERT，获得pZHTERT—β—actin；以pGPH1／GFP／Neo-GAPDH为模板，扩增出GAPDH表达框并克隆进质粒pZD55，获得pZD55-GAPDH。将pZHTERT—β—actin、pZD55-GAPDH重组，构建穿梭质粒pTD—GAPDH—β—actin，并与腺病毒右臂质粒pBHGE3共转染293细胞，9～12d后出现病毒空斑，提取重组腺病毒的DNA、聚合酶链反应（PCR）鉴定正确者即为双调控增殖腺病毒TD—GAPDH—β—actin。扩增、纯化、测病毒滴度。结果成功构建hTERT启动子调控的表达GAPDH、β—actin小干扰RNA的条件增殖腺病毒。病毒滴度为2×10^11PFU／ml。结论成功构建了TD—GAPDH—β—actin，为研究双基因小干扰RNA靶向治疗肿瘤奠定了基础。
- 马武剑毛立军韩正祥徐为李海龙刘俊杰顾玉明郑骏年
- 关键词：启动子RNA干扰
- 表达端粒酶逆转录酶siRNA的溶瘤腺病毒对裸鼠肾癌移植瘤的治疗作用被引量：3
- 2009年
- 目的观察表达针对端粒酶逆转录酶（hTERT）基因的小干扰RNA（hTERTsiRNA）的溶瘤腺病毒（ZD55-hTERT）抑制肾癌移植瘤生长作用。方法荷肾癌裸鼠随机分4组，每组8只。瘤体内分别注射ZD55-hTERT、增殖缺陷型腺病毒（Ad—hTERT）、溶瘤腺病毒ZD55．EGFP及磷酸盐缓冲液（PBS），每次注射病毒7×10^8pfu／只，连续注射3d。注射后第7天，每组处死3只取肿瘤组织，免疫组织化学检测肿瘤hTERT、E1A表达及凋亡。第50天时处死动物测量肿瘤体积。结果ZD55-hTERT、Ad—hTERT、ZD55-EGFP及PBS处理组肿瘤体积（mm^3）分别为：124．1±27．5、609．0±102．5、499．8±77．1、1552．1±206．4，ZD55-hTERT处理组与各组之间差异有统计学意义（P〈0．01）。Ad—hTERT处理组肿瘤无EIA表达，ZD55-hTERT处理组E1A大量表达，表明病毒复制。ZD55-hTERT处理组肿瘤hTERT表达显著低于Ad—hTERT处理组，凋亡细胞阳性率均显著高于Ad—hTERT处理组。结论表达hTERTsiRNA的溶瘤腺病毒ZD55-hTERT具有更强的抑制肾癌生长作用。
- 薛松郑骏年李望李海龙朱海涛辛勇刘俊杰徐为宋文哲刘斌高超顾玉明
- 关键词：肾癌溶瘤腺病毒HTERT基因
- 转录因子Sp1对人Ki-67基因表达的调控作用被引量：3
- 2011年
- 目的 观察转录因子Sp1对人肿瘤细胞Ki-67基因表达的调控作用.方法 Sp1真核表达载体pN3-Sp1转染人宫颈癌Hela细胞、肾癌OS-RC-2细胞、肺癌A549细胞,蛋白免疫印迹法检测Hela细胞Sp1蛋白表达,细胞免疫组织化学检测3种肿瘤细胞Ki-67蛋白表达.pN3-Sp1与Ki-67基因核心启动子pGLBK235共转染上述3种肿瘤细胞,双荧光素酶报告基因系统检测启动子活性.以空载体pN3作为对照.结果 转染pN3-Sp1的Hela细胞Sp1蛋白表达量,是空载体对照组的2.4倍.转染pN3-Sp1的3种肿瘤细胞Ki-67蛋白表达量与pN3转染组比较均显著增加.pN3-Sp1、pGLBK235共转染3种肿瘤细胞的启动子转录活性均较单转染pGLBK235显著升高,在Hela、OS-RC-2、A549细胞中的启动子活性分别为仅转染pGLBK235的1.68、 1.34、1.83倍.结论 转录因子Sp1具有激活Ki-67基因转录作用.
- 李望钱国伟徐为田卉李连涛刘俊杰陈菲菲李慧中章龙珍郑骏年
- 关键词：KI-67基因转录因子SP1
- Ki-67核心启动子内最关键Sp1顺式作用元件的确定
- 2011年
- 目的 确定Ki-67启动子内调控转录最关键的Sp1顺式作用元件,探讨肿瘤细胞Ki-67基因高表达机制.方法 对Ki-67启动子内（-170～-145 nt）位置的Sp1顺式作用元件A2含有的两个Sp1一致性序列（-170/-160 nt）、（-159/-145 nt）分别作定点突变,把每个Sp1一致性序列的第3个碱基胞嘧啶＂C＂突变为胸腺嘧啶＂T＂,得到突变体MutA（-170/-160 nt）和MutB（-159/-145 nt）.使用双荧光素报告基因系统检测这些突变体在宫颈癌Hela细胞、人肾癌OS-RC-2和A549细胞中的转录活性.结果 2个Sp1一致性序列定点突变的启动子重组体在3种肿瘤细胞的转录功能均有显著降低,其中MutA在Hela细胞、OS-RC-2细胞、A549细胞中的活性分别降至突变前启动子活性的79.8%、65.9%、77.5%.MutB分别降至突变前启动子活性的36.9%、26.9%、28.6%.结论 Ki-67启动子-159～-145 nt区域的Sp1顺式作用元件对转录激活最为关键,起到调控肿瘤细胞Ki-67基因表达的作用.
- 李望钱国伟徐为田卉李连涛刘俊杰陈菲菲李慧中章龙珍郑骏年
- 关键词：点突变转录因子SP1
