国家高技术研究发展计划(2004AA241171)
- 作品数：3 被引量：12H指数：3
- 相关作者：古勤生彭斌李莉刘丽锋胡京昂更多>>
- 相关机构：中国农业科学院郑州果树研究所中国农业大学上海市农业科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划河南省科技攻关计划河南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- CMV甜瓜分离物外壳蛋白基因的克隆及植物表达载体的构建被引量：3
- 2005年
- 从河南省临颖县采集的病毒感染的甜瓜样本经ELISA检测和接种分离获得黄瓜花叶病毒(Cucunbermosaicvirus,CMV)分离物。把该分离物接种西葫芦,从发病的叶片中提取总RNA,并以此为模板经RTPCR扩增获得CMV的外壳蛋白(cp)基因,将其克隆到pUCmT质粒上。经序列测定和分析,结果表明该cp基因由657个核苷酸组成,编码218个氨基酸。其核苷酸序列与黄瓜花叶病毒亚组I的分离物有较高的同源性,达92.2%～93.9%,与亚组II的同源性仅为76.8%～77.8%,与我国报道的CMV分离物的cp基因序列比较,除香蕉株系XB外核苷酸序列的同源性达91.8%～93.4%。根据这些分析,该CMV分离物属于亚组I。将cp基因通过中间载体pJIT163定向克隆到植物表达载体pBINPLUS中(重组双元载体质粒命名为pBCP),并经冻融法导入农杆菌中,经PCR及酶切鉴定,证实质粒已被导入。利用该植物表达载体对西瓜的遗传转化工作目前正在进行中。
- 马新艳古勤生刘丽锋李宁杨民和彭斌李莉
- 关键词：CMV中国分离物外壳蛋白基因
- 小西葫芦黄花叶病毒外壳蛋白基因植物表达载体的构建被引量：3
- 2004年
- 小西葫芦黄花叶病毒(Zucchiniyellowmosaicvirus,ZYMV)是危害中国葫芦科作物主要病毒之一。试验以该病毒中国分离物外壳蛋白基因的克隆载体pZCP-87(含ZYMV的CP基因)为材料,经SalⅠ和BamHⅠ双酶切,从胶上回收目的基因,与经过同两种酶酶切的植物表达载体pBIN438连接,转化感受态的大肠杆菌细胞,提取质粒,经PCR和SalⅠ/BamHⅠ双酶切验证,已将该病毒外壳蛋白基因克隆到植物表达载体上(重组质粒命名为pBZCP5),采用冻融法完成了对pBZCP5质粒的农杆菌转化。该工作是通过转基因获得抗ZYMV病毒研究的基础。
- 胡京昂古勤生古勤生刘丽锋张穗彭斌
- 关键词：外壳蛋白基因植物表达载体小西葫芦黄花叶病毒
- 小西葫芦黄花叶病毒外壳蛋白基因导入西瓜的遗传转化被引量：7
- 2007年
- 研究了西瓜品种ZKM的再生体系和农杆菌介导小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellowmosaic virus,ZYMV)的外壳蛋白(cp)基因导入西瓜的遗传转化体系。结果表明,质量分数0.6%琼脂是适宜种子萌发的基本培养基,切取5d龄的西瓜无菌苗子叶为外植体,接种在MS+BA2.0mg/L诱导培养基上,诱导不定芽效率最高。选用75mg/L卡那霉素筛选西瓜抗性芽较为合适,外植体经预培养2～3d,菌液浓度以OD600nm值为0.4,共侵染10min有利于提高西瓜转化的效率。经PCR检测,ZYMVcp基因已经导入西瓜植株,转化频率为0.15%。
- 刘丽锋古勤生胡京昂俞正旺刘君璞彭斌李莉
- 关键词：西瓜外壳蛋白
