河南省科技攻关计划(112102310209)
- 作品数：20 被引量：31H指数：4
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- 相关机构：新乡医学院中山大学更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划博士科研启动基金河南省教育厅自然科学基金更多>>
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- 弓形虫MIC6羧基端与醛缩酶相互作用的鉴定被引量：3
- 2013年
- 目的鉴定弓形虫MIC6羧基端和醛缩酶的相互作用及两种蛋白在虫体内的定位。方法分别用GST-MIC6C多克隆抗体和兔免疫前血清结合的sepharose与弓形虫裂解液进行免疫共沉淀实验,实验产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。弓形虫速殖子涂片,免疫荧光定位法确定两种蛋白在虫体内的定位。结果与对照相比,GST-MIC6C多克隆抗体的免疫共沉淀产物中有蛋白条带可分别被相应的抗体识别。荧光显微镜下显示,MIC6(红色荧光)和醛缩酶(绿色荧光)两种蛋白皆定位于弓形虫的顶端。结论弓形虫MIC6羧基端与醛缩酶存在相互作用并在虫体内存在共定位关系。
- 郑斌尹志奎詹希美
- 关键词：刚地弓形虫醛缩酶免疫共沉淀共定位
- 重组刚地弓形虫MIC8 CTD蛋白及其多克隆抗体的制备被引量：5
- 2011年
- 目的制备弓形虫微线体蛋白8羧基端胞质尾(MIC8 CTD)重组蛋白及其多克隆抗体。方法以弓形虫基因组为模板,PCR扩增MIC8 CTD基因片段,构建MIC8 CTD/pGEX-4T-1原核表达系统;IPTG诱导表达GST-MIC8CTD融合蛋白;用纯化的融合蛋白加免疫佐剂免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,亲和层析纯化并分析抗体的特异性及效价。结果构建了MIC8 CTD原核表达系统,表达并纯化了GST-MIC8 CTD融合蛋白;获得了抗该蛋白的兔源性抗血清,纯化后的多克隆抗体能特异识别MIC8 CTD,ELISA测定抗体效价为1∶8 000。结论制备的GST-MIC8 CTD融合蛋白具有免疫原性,用该抗原免疫动物可获得高效价的多克隆抗体。
- 郑斌尹志奎何蔼詹希美
- 关键词：刚地弓形虫多克隆抗体
- 刚地弓形虫MIC8 CTD作用蛋白的筛选及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的从刚地弓形虫速殖子裂解液中筛选并鉴定微线体蛋白8羧基端胞质尾（MIC8CTD）的作用蛋白。方法分别以GST—MIC8CTD蛋白和GST蛋白（对照）作为探针蛋白，采用GSTpull—down技术从弓形虫裂解液中筛选目标蛋白并进行SDS-PAGE分析；将目标蛋白转印至PVDF膜，测序，通过BLAST2在线对比搜索相似蛋白序列，初步确定目标蛋白；以目标蛋白抗体为一抗进行Westernblot，分析GSTpull—down产物与目标蛋白抗体的相互作用；分别用GST—MIC8CTD多克隆抗体和兔免疫前血清结合的sepharose与弓形虫裂解液进行免疫共沉淀试验，沉淀物进行SDS—PAGE和Westernblot分析。结果PAGE显示GST—MIC8CTD蛋白的pull—down产物中有一蛋白条带（分子质量单位约35～45ku），GST蛋白的pull—down产物中无此蛋白；BLAST2比对目标蛋白的氨基酸序列与弓形虫醛缩酶序列一致；ECM检测GST—MIC8CTD多克隆抗体的免疫共沉淀产物中有蛋白组分可被相应的抗体识别，免疫前血清的免疫共沉淀产物中无可被识别的蛋白。结论经GSTpull—down技术和免疫共沉淀试验筛选、鉴定，弓形虫MIC8CTD的作用蛋白为醛缩酶。
- 郑斌尹志奎史明珠任红斌詹希美
- 关键词：刚地弓形虫醛缩酶免疫共沉淀
- 弓形虫肌动蛋白表达及其抗血清制备
- 2013年
- 目的体外制备弓形虫肌动蛋白(actin)及其多克隆抗体。方法以弓形虫cDNA链为模板,PCR扩增actin基因,亚克隆至pET30a载体,转化到大肠埃希菌BL21中;异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达actin-His6蛋白;用纯化的蛋白加免疫佐剂免疫SD大鼠,收集抗血清,制备多克隆抗体,抗体亲和纯化柱纯化并分析抗体的效价。结果 actin基因的PCR扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳,结果显示,在1 000 bp附近有一条带,与目的基因(actin cDNA长度为1 131 bp)大小相符;actin/pET30a重组质粒经BamHI和XhoI双酶切,1.0%琼脂糖凝胶电泳分析酶切产物,在1 000和5 000 bp附近可见条带;actin-His6蛋白在3～4 h时表达量达到峰值;蛋白可溶性分析显示,actin-His6蛋白主要以包涵体的形式存在;获得了抗actin-His6蛋白的大鼠源性抗血清。结论弓形虫actin蛋白在原核系统中得到了表达,用该蛋白免疫动物后获得了抗血清。
- 尹志奎赵林静郑斌
- 关键词：弓形虫肌动蛋白蛋白表达多克隆抗体
- 国外牛、马弓形虫感染及影响因素分析被引量：2
- 2013年
- 弓形虫可以感染多种动物和人导致人兽共患弓形虫病。牛和马感染后不仅影响其发育、繁衍,而且对畜牧业发展造成一定的经济损失。若以感染动物来源的奶和肉制品为食物,还可能威胁到人类的健康。本文对境外的牛、马弓形虫感染及影响因素进行了分析。
- 郑斌尹志奎黄倩李小会
- 关键词：弓形虫影响因素
- 国外猪弓形虫感染的风险因素及基因型研究进展被引量：3
- 2014年
- 弓形虫可以感染多种动物和人导致人兽共患弓形虫病。猪感染弓形虫后不仅影响其自身的发育、繁殖,对养殖业发展造成一定的经济损失,若以感染猪来源的肉制品为食物,还可能威胁到其他动物和人类的健康。猪弓形虫感染受多种因素(年龄、猪场管理及外界环境中猫、鼠的存在等)的影响,不同地区的猪弓形虫感染的风险因素不同;弓形虫在遗传上有多样性,不同地区的猪感染弓形虫的基因型不同。论文对国外的猪弓形虫感染的风险因素及基因型的研究进展进行了综述。
- 尹志奎王东郑斌
- 关键词：弓形虫基因型
- 弓形虫actin蛋白多克隆抗体的制备及纯化
- 2013年
- 目的制备弓形虫肌动蛋白(actin)的多克隆抗体并纯化。方法以弓形虫cDNA链为模板PCR扩增1 131bp actin基因,亚克隆至pET30a载体后转化入大肠埃希菌BL21中,用1mmol/L IPTG诱导表达actin-His6蛋白,采用亲和层析法纯化;取200μg纯化蛋白加等量佐剂混合,免疫SD大鼠4次,收集抗血清,用亲和纯化柱纯化。结果 PCR扩增出actin基因并成功构建actin/pET30a/BL21表达系统,获得actin-His6蛋白,制备的大鼠源性actin-His6蛋白多克隆抗体纯化后为单一蛋白抗体。结论制备并纯化了抗弓形虫actin的多克隆抗体,为弓形虫入侵机制的研究奠定了基础。
- 郑斌尹志奎詹希美
- 关键词：弓形虫肌动蛋白多克隆抗体
- 弓形虫MIC2胞质尾段蛋白及其多克隆抗体的制备被引量：4
- 2013年
- 目的:制备弓形虫微线体蛋白2胞质尾段(MIC2C)蛋白片段及其多克隆抗体。方法:以弓形虫cDNA文库为模板,PCR扩增135bp MIC2C基因片段,构建MIC2C/pGEX-4T-1原核表达系统;IPTG诱导表达GST-MIC2C融合蛋白;用纯化的融合蛋白加免疫佐剂背部皮内注射免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,亲和层析纯化并分析抗体的效价。结果:构建了MIC2C原核表达系统,表达并纯化了GST-MIC2C融合蛋白,蛋白的浓度为3.07mg/ml;获得了抗该蛋白的兔源性抗血清,纯化后的多克隆抗体效价为1:16 000。结论:在体外制备并纯化了GST-MIC2C融合蛋白及其多克隆抗体,为后续弓形虫入侵机制的研究奠定了基础。
- 尹志奎郑斌詹希美
- 关键词：刚地弓形虫多克隆抗体
- 刚地弓形虫醛缩酶蛋白的表达及其多克隆抗体的纯化被引量：8
- 2011年
- 目的:体外制备弓形虫醛缩酶(aldolase)蛋白及其多克隆抗体。方法:以弓形虫cDNA链为模板,PCR扩增醛缩酶基因,构建aldolase/pET30a原核表达系统;IPTG诱导表达aldolase-His6蛋白;用纯化的蛋白加免疫佐剂免疫SD大鼠,收集抗血清,制备多克隆抗体,亲和层析纯化并分析抗体的效价。结果:构建了aldolase原核表达系统,表达并纯化了aldolase-His6蛋白;获得了抗该蛋白的大鼠源性抗血清,纯化后的多克隆抗体效价为1∶4000。结论:在体外制备并纯化了aldolase-His6蛋白及其多克隆抗体,为后续研究aldolase的功能奠定了基础。
- 尹志奎邓智建郑斌
- 关键词：刚地弓形虫醛缩酶蛋白表达多克隆抗体
- 国外羊弓形虫感染情况及影响因素研究进展被引量：5
- 2013年
- 弓形虫可以感染多种动物和人导致人兽共患弓形虫病。山羊和绵羊感染后不仅影响其发育、繁衍,对畜牧业发展造成一定的经济损失。若以感染动物来源的奶和肉制品为食物,还可能威胁到人类的健康。本文对国外的山羊、绵羊弓形虫感染情况及影响因素的研究进展进行了综述。
- 郑斌尹志奎韩丁丁亢彩彩
- 关键词：山羊绵羊弓形虫血清阳性率影响因素
