海外青年学者合作研究基金(30528012)
- 作品数：7 被引量：39H指数：3
- 相关作者：卢运萍王世宣马丁翁丹卉周婷更多>>
- 相关机构：华中科技大学首都医科大学附属北京佑安医院上海市浦东新区公利医院更多>>
- 发文基金：海外青年学者合作研究基金国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 糖原合酶激酶-3β磷酸化抑制顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡的研究被引量：6
- 2009年
- 目的探讨增加糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)的磷酸化状态对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的作用。方法体外培养人卵巢癌细胞株OV2008细胞,运用GSK-3β特异性抑制剂LiCl增加磷酸化GSK-3β的表达,应用流式细胞仪检测不同浓度顺铂诱导的细胞凋亡,Western blot检测GSK-3β及磷酸化GSK-3β蛋白的表达。结果流式细胞仪检测结果显示,梯度增加的顺铂(40、80、120μmol/L)作用于OV2008细胞24 h,其凋亡率不断增加,分别为(4.55±1.64)%、(25.50±0.94)%和(53.80±1.62)%;而应用抑制剂预孵育的细胞,不同浓度顺铂作用24 h后凋亡率分别为(2.10±0.80)%(、15.75±0.97)%和(20.45±0.87)%;Western blot显示,抑制剂LiCl作用后,细胞的磷酸化GSK-3β表达明显增加,并且顺铂作用亦可引起磷酸化GSK-3β表达上调;流式结果还显示,PI3K的特异性抑制剂LY294002作用后使顺铂诱导的细胞凋亡率从(18.75±0.70)%增加至(28.40±1.50)%。结论磷酸化GSK-3β表达增加可抑制顺铂诱导的卵巢癌细胞的凋亡。
- 宋晓红翁丹卉邢辉卢运萍王世宣马丁
- 关键词：糖原合酶激酶-3Β顺铂细胞凋亡卵巢癌
- 雷帕霉素联合紫杉醇诱导卵巢癌细胞A2780和SKOV3凋亡及其分子机制被引量：21
- 2007年
- 背景与目的:研究表明,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)在恶性肿瘤发生发展中起重要作用,本研究观察特异性mTOR抑制剂雷帕霉素联合紫杉醇对卵巢癌细胞A2780和SKOV3的作用,并探讨其内在的分子机制。方法:A2780、SKOV3细胞经雷帕霉素和紫杉醇处理后,以MTT法检测细胞的增殖情况,金正均法计算q值判断两药的相互作用。以流式细胞仪检测细胞凋亡,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测survivin的表达。结果:雷帕霉素联合紫杉醇可抑制A2780和SKOV3细胞增殖,且随时间延长抑制作用越显著,当两药合用72h时抑制率分别达到34.9%(A2780)和37.1%(SKOV3),与单独用药组相比差异有显著性(P<0.01),金正均法显示各时间点q值均>1.15,显示二者有协同作用。雷帕霉素和紫杉醇可使A2780和SKOV3细胞发生凋亡,并且在两者联用时凋亡率达到最高。经雷帕霉素和紫杉醇作用后的A2780和SKOV3细胞表达survivin较处理前明显下降。结论:体外雷帕霉素和紫杉醇可抑制A2780和SKOV3细胞增殖并诱导其发生凋亡,并可使survivin基因的表达下调,且两者联合应用时可显著增加其抑制作用,具有协同作用。
- 马湘一王世宣刘琰刘荣华卢运萍马丁
- 关键词：雷帕霉素紫杉醇A2780细胞SKOV3细胞凋亡
- 三位点GSK3β shRNA真核表达质粒的构建及鉴定
- 2010年
- 目的构建三位点干扰GSK3β基因的高效shRNA表达质粒载体。方法用DNA重组技术将针对人GSK3β基因不同部位所设计的3对shRNA序列克隆到高效RNAi真核表达质粒载体pshRNA-U3中,构建shRNA表达载体pshRNA-U3/GSK3β。脂质体介导转染人卵巢癌细胞株OV2008,流式细胞仪检测转染效率。运用实时定量PCR和Westernblot分别检测RNA水平和蛋白水平GSK3β的干扰效果。运用流式细胞仪检测紫杉醇诱导的凋亡率。结果经测序证实成功构建携带3个GSK3βshRNA的表达载体pshRNA-U3/GSK3β。RT-PCR和Westernblotting均证实重组质粒pshRNA-U3/GSK3β转染OV2008后可明显降低细胞内GSK3βmRNA丰度及GSK3β蛋白表达。FACS显示,干扰GSK3β可抵抗紫杉醇诱导的凋亡。结论成功构建了针对GSK3β的三位点shRNA表达载体pshRNA-U3/GSK3β,并进行了初步的功能效应验证,为进一步研究GSK3β蛋白分子的生物学功能及应用奠定了基础。
- 宋晓红翁丹卉邢辉卢运萍马丁王世宣
- 关键词：卵巢癌SHRNAGSK3Β
- 短发卡状RNA抑制人Bub1基因表达及其对人卵巢癌A2780细胞药物敏感性和周期的影响被引量：2
- 2010年
- 背景与目的:既往研究提示,紫杉醇类药物作用的发挥有赖于功能完整的纺锤体检查点,而Bub1是纺锤体检查点的重要组成部分。本研究旨在探讨Bub1短发卡状RNA真核表达载体稳定转染对人卵巢癌A2780细胞紫杉醇敏感性及细胞周期的影响。方法:构建Bub1基因短发卡状RNA真核表达载体pEGFP-Bub1-shRNA,以脂质体LipofectamineTM2000包裹空质粒转染体外培养的人卵巢癌细胞株A2780后进行稳定筛选。应用RT-PCR、Western印迹法分析目的基因mRNA及其蛋白水平的表达情况;MTT法、流式细胞术等方法检测转染前后,A2780细胞对紫杉醇敏感性及其细胞周期的变化;Hoechst33342染色法检测细胞分裂指数。结果:与对照组pEGFP-C1/A2780及A2780组相比,pEGFP-Bub1-ShRNA/A2780组细胞中mRNA和蛋白水平的表达均明显下降,其差异具有统计学意义(P<0.05);MTT检测结果提示,转染pEGFP-Bub1-shRNA质粒后细胞对紫杉醇的敏感性明显降低,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,紫杉醇1μmol/L处理细胞24及48h后,与pEGFP-C1/A2780及A2780组相比,该组细胞凋亡率明显降低(P<0.05),G2/M期细胞比例下降,差异具有统计学意义(P<0.05);Hoechst33342染色提示,与对照组相比,pEGFP-Bub1-shRNA/A2780组的分裂指数(MI)明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:Bub1基因的下调可导致人卵巢癌A2780细胞对紫杉醇敏感性及G2/M期细胞比例下降。pEGFP-C1-shBub1质粒的成功构建,为研究Bub1基因的功能及定位的研究提供了进一步的实验条件。
- 周婷翁丹卉王世宣卢运萍马丁
- 关键词：卵巢癌紫杉醇
- 人Bub1基因shRNA真核表达质粒的构建及其对人卵巢癌细胞SKOV3紫杉醇敏感性的影响被引量：1
- 2010年
- 目的构建人Bub1 shRNA真核表达质粒,鉴定该质粒对人卵巢癌SKOV3细胞中Bub1基因的抑制作用,并探讨其对SKOV3细胞紫杉醇敏感性的影响。方法构建pEGFP-Bub1-shRNA质粒,将其经脂质体Lipo 2000TM转染SKOV3细胞后,通过RT-PCR及Western blot检测干扰效率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT法比较转染前后SK-OV3细胞的紫杉醇敏感性。结果成功构建了pEGFP-Bub1-shRNA质粒;RT-PCR和Western blot检测结果提示,转染后Bub1的mRNA和蛋白表达均显著降低;MTT和FACS提示,与对照组细胞相比,转染后SKOV3细胞生长抑制率及凋亡率明显降低(P<0.05)。结论pEGFP-Bub1-shRNA质粒能有效抑制Bub1 mRNA及蛋白的表达,并降低SK-OV3细胞紫杉醇敏感性,该质粒的成功构建为进一步研究Bub1基因的生物学功能提供了工具。
- 周婷王世宣翁丹卉卢运萍马丁
- 关键词：紫杉醇耐药卵巢癌SKOV3细胞
- 人Mad2基因正义真核表达质粒的构建及其对人卵巢癌细胞A2780紫杉醇敏感性的影响被引量：1
- 2010年
- 背景与目的:紫杉醇是一种高效广谱的抗肿瘤药物,已常规应用于卵巢癌的化疗。但近年来随着耐药的发生,紫杉醇耐药已成为影响肿瘤化疗预后的主要难题,有研究显示紫杉醇药效的发挥与纺锤体检测点功能完整性相关。本研究通过构建人纺锤体检测点蛋白Mad2基因正义真核表达质粒,旨在探讨Mad2蛋白对人卵巢癌A2780细胞株紫杉醇敏感性的影响。方法:构建pEGFP-Mad2正义表达质粒,通过脂质体LipofectamineTM 2000将其转入体外培养的人卵巢癌细胞株A2780中,应用RT-PCR、Western blot等方法分析相关基因和蛋白水平的变化情况;通过流式细胞术比较稳筛细胞对紫杉醇敏感性的改变情况。结果:成功构建了pEGFP-Mad2正义表达质粒;并筛选出稳定高表达Mad2的细胞株。RT-PCR、Western blot检测均显示稳定筛出的pEGFP-Mad2/A2780细胞株中Mad2呈高表达。流式细胞术检测结果显示,紫杉醇作用24或48 h后,对照组pEGFP-N1/A2780的细胞凋亡率分别为12.34%和58.76%,而pEGFP-Mad2/A2780组细胞凋亡率则分别为27.32%和87.53%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:pEGFP-Mad2正义表达质粒能够有效上调A2780细胞中Mad2基因mRNA和蛋白的表达,并增加人卵巢癌细胞A2780对紫杉醇化疗的敏感性。
- 郝星叶双梅周志刚周婷卢运萍王世宣
- 关键词：卵巢癌紫杉醇MAD2基因
- 紫杉醇对卵巢癌细胞作用的浓度依赖性及其机制探讨被引量：8
- 2008年
- 目的探讨不同浓度紫杉醇对卵巢癌细胞发挥抗癌效应的内在机制。方法以0．01、0．1、1、10、50μmol／L紫杉醇作用于人卵巢癌细胞系A2780，采用碘化丙啶（PI）单染法流式细胞术检测不同浓度紫杉醇作用下细胞周期的变化情况。进而对细胞进行同步化处理，采用PI单染法流式细胞术分析低浓度（0．01μmol／L）紫杉醇对细胞周期的影响；Annexin V／PI双染法流式细胞术分析高浓度（50μmol／L）紫杉醇对A2780细胞坏死的影响。结果①紫杉醇浓度为0．1、1、10μmol／L时，G2／M期细胞比例明显高于0．01μmol／L组（P〈0．01）和50μmol／L组（P〈0．01）。②A2780细胞经同步化处理后给予0．01μmol／L紫杉醇，经过一个细胞倍增时间未观察到G0／G1期阻滞。③0．01μmol／L组，1μmol／L组坏死细胞比例明显低于50μmol／L组（P〈0．01）。结论在0．1～10μmol／L的浓度范围内，紫杉醇可能通过诱导G2／M期阻滞使卵巢癌细胞发生凋亡，浓度为0．01μmol／L时紫杉醇诱导凋亡与G0／G1期或G2／M期阻滞均无关，浓度为50μmol／L时紫杉醇可能主要通过诱导细胞坏死发挥抗癌效应。
- 王丽杨宾烈郝星马湘一翁丹卉廖书杰卢运萍王世宣于洪涛马丁
- 关键词：卵巢癌紫杉醇细胞周期细胞凋亡
