国家自然科学基金(20777042)
- 作品数：8 被引量：72H指数：3
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- 筛选维甲酸样内分泌干扰物报告基因方法的建立被引量：1
- 2009年
- [目的]建立应用荧光素酶报告基因筛检干扰维甲酸功能的环境化学物的方法。[方法]利用基因重组方法将3个重复序列RXR/RXR反应元件和2个重复序列RAR/RXR反应元件插入含荧光素酶报告基因的pGL4质粒上游,再将该质粒转染表达维甲酸受体的MLE-12细胞,加入全反式维甲酸或雌二醇后,检测荧光素酶活性。[结果]构建的RARE-TATA-pGL4报告基因质粒经限制性内切酶和DNA测序证实构建成功。经报告基因试验证实,与阴性对照组相比,维甲酸能使pGL4质粒的荧光素酶相对活性增加30.28倍,而雌二醇仅为1.4倍,说明雌二醇没有干扰作用。[结论]RARE-TATA-pGL4报告基因质粒可用于筛检环境中维甲酸样干扰物。
- 陈刚江俊康丁绍红王春徐广飞黄春妍姚陈娟
- 关键词：内分泌干扰物维甲酸
- 大、小鼠吸收和代谢双酚A的差异被引量：3
- 2010年
- 目的探讨相同剂量双酚A（bisphenol A，BPA）经口染毒后，引起大、小鼠血清BPA浓度差异的机制。方法无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级雄性SD大鼠和ICR小鼠各18只，一次性经口给予300mg／kg的BPA后，在第0．5、1．0、12．0小时时间点各采集6只大、小鼠血液，用荧光-高效液相色谱法（fluorescence—high performance liquid chromatography，FL—HPLC）检测血清中BPA浓度；大、小鼠各6只采用原位小肠吸收模型循环灌流100ml 0．1mmol／LBPA灌流液，用FL-HPLC法分别检测第0．5、1．0、2．0小时时间点灌注液中BPA浓度和灌流后2．0h血清中的浓度；采用逆转录PCR（RT—PCR）方法检测大、小鼠肝脏尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶281（UDP-glucuronosyhransferase 2B1，UGT281）mRNA的表达水平，并采用FL—HPLC法检测UGT281的酶活性；大、小鼠各6只禁食24h后，一次性经口给予300mg／kgBPA，收集24h粪便，用FL-HPLC法检测粪便中BPA含量。结果300mg／kg BPA经口染毒后第0．5、1．0、12．0小时时间点小鼠血清中BPA浓度分别为（66．57±14．95）、（51．16±16．06）、（22．73±5．00）μg/ml，大鼠血清中BPA浓度分别为（15．63±5．65）、（18．34±5．02）、（7．65±2．58）μg／ml，各时间点小鼠均高于大鼠，差异有统计学意义（F值分别为50．660，17．957，8．420，P值均〈0．05）；0～、0．5～、1．0～2．0h小鼠小肠各时间段吸收速率分别为（10．20±4．20）、（1．49±0．67）、（1．31±0．55）μg·cm^-2·min^-1均高于大鼠相应时间段吸收率[（1．87±0．69）、（0．47±0．13）、（0．36±0．08）μg·cm^-2·min^-1]，差异均有统计学意义（F值分别为14．954、8．877、11．536，P值均〈0．05）。0．1mmol／LBPA灌肠2h后小鼠血清中的BPA浓度为（22．64±4．35）μg／ml，高于大鼠的（4．13±0．83）μg/ml，差异有统计学意义（F=74．643，P=0．000）；大鼠
- 黄春妍姚陈娟鞠晶昀潘少聪任飞林陈刚
- 关键词：酚类小鼠肠吸收代谢
- 细菌脂多糖经p38丝裂原激活蛋白激酶通路调节claudin-11基因的表达
- 2009年
- 目的阐明细菌内毒素细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是否影响紧密连接蛋白claudin-11的表达及其分子机制。方法表达claudin-11基因的原代培养人皮肤成纤维细胞,加入纯化的LPS或核转录因子κB(NF-κB)特异性抑制剂MG132或p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580后,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹方法检测claudin-11基因mRNA和蛋白质表达水平变化,利用细胞免疫荧光染色法检测NF-κB核转移。结果LPS细胞膜受体TLR4在人皮肤成纤维细胞表达;2μg/ml LPS能提高claudin-11基因mRNA和蛋白质的表达水平。进一步研究发现:虽然LPS能使NF-κB从细胞质转移到细胞核,但LPS引起claudin-11基因表达增加不能被NF-κB特异性抑制剂MG132抑制,而能被p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580明显抑制。结论细菌内毒素LPS影响claudin-11基因的表达可能是通过p38 MAPK通路来调节的。
- 陈刚江俊康王春徐广飞黄春妍姚陈娟Nakahori Yutaka
- 关键词：核转录因子ΚB细菌脂多糖
- 双酚A诱导的成年雄性大鼠生殖系统细胞病理学与功能被引量：4
- 2009年
- 陈刚仇家荣江俊康黄春妍王春丁绍红仇梁林
- 关键词：双酚A雌二醇内分泌干扰物雄性生殖系统
- 双酚A在染毒雄性大鼠血清中时间-浓度关系被引量：1
- 2010年
- 目的探讨经口给予雄性大鼠双酚A（bisphenol A，BPA）后，血清中BPA时间．浓度关系。方法66只无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级雄性SD大鼠应用数字表法随机分为10个实验组和1个对照组，每组6只。各实验组大鼠一次性灌胃给予300mg／kg剂量的BPA后，在0．5、1、2、4、6、12、24、36、60、84h时间点各采集一组大鼠血液，分离出血清，用荧光-高效液相色谱法检测血清中游离型和总BPA浓度。结果大鼠一次性经口染毒后，1h血清中总BPA浓度最高，达17．13μg/ml，2h血清中BPA浓度急剧下降，24h血清中总BPA浓度又上升到15．18μg／ml，持续观察84h，血清中BPA仍有0．51μg/ml。游离型BPA含量较低，染毒0．5h，血清中游离型BPA浓度为0．57μg／ml，而后急剧下降，1h下降到0．06μg／ml，4h下降到0．03μg／ml，36h仅有0．01μg／ml。在染毒0．5h，游离型BPA在血清中所占的百分率最高，为血清总BPA的4．15％（0．57／13．73），其他各时间点血清中游离型BPA所占的百分率均较低。结论一次性经口给予大鼠BPA后，血清中主要以结合型BPA存在，血清总BPA随染毒时间的延长出现双峰现象，可能与BPA代谢过程中肝肠循环有关。
- 陈刚黄春妍仲齐庆鞠晶昀潘少聪王春姚陈娟
- 关键词：酚类血药浓度
- 敌百虫经ERK1/2通路影响类固醇激素的合成被引量：1
- 2010年
- 目的初步探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)通路在敌百虫抑制小鼠睾丸间质细胞瘤细胞(MLTC-1)类固醇激素合成中的作用。方法运用放射免疫法检测不同浓度敌百虫及加入ERK1/2通路抑制剂UO126后对MLTC-1细胞孕酮合成的影响;采用蛋白质印迹技术(Western-blot)检测敌百虫对ERK1/2磷酸化表达的影响。结果敌百虫显著抑制MLTC-1细胞孕酮的合成,并且随敌百虫剂量的增加,孕酮合成量呈下降趋势;当同时加入UO126后,随敌百虫染毒剂量的升高孕酮合成量的下降趋势更为明显;敌百虫与UO126一样能明显抑制ERK1/2的磷酸化,而对总ERK1/2表达无明显影响。结论在本试验条件下,敌百虫能明显抑制MLTC-1细胞的孕酮合成,其机制可能是通过ERK1/2通路。
- 瞿建华江俊康陈刚
- 关键词：敌百虫ERK1/2通路
- 某自来水厂水源水有机提取物的雌激素样活性研究被引量：1
- 2010年
- [目的]了解某自来水厂水源水有机提取物的雌激素样活性。[方法]用固相萃取法富集水样,分低、中、高剂量染毒组(体外试验为每毫升染毒量分别相当于10、100、1000mL水源水中有机提取物的剂量;体内试验为每千克体重灌胃量相当于2、5、10、25L水源水中有机提取物的剂量)、阴性对照组和雌二醇阳性对照组,通过体外人乳腺癌(MCF-7)细胞增殖试验、报告基因试验和初断乳大鼠子宫增重试验对水源水有机提取物的雌激素样活性进行研究。[结果]体外细胞增殖试验中,高剂量组较阴性对照组出现细胞增殖效应(P<0.05),细胞增殖率为(130.85±13.68)%;而报告基因试验中,中剂量组检测到荧光强度增加(P<0.05),相对荧光强度为(207.67±12.40)%。子宫增重试验中,相当于低、中、高剂量染毒组大鼠子宫湿重和黏液重脏器系数与阴性对照组相比差异无统计学意义。[结论]体外试验表明水源水中含有雌激素样活性物质,但体内试验尚不能确定该水源水具有明确的雌激素样活性。
- 王春陈刚李晓东江俊康姜启玉丁绍红彭永芳
- 关键词：有机提取物子宫增重试验
- 1985～2008年间我国正常男性精液质量变化分析被引量：61
- 2010年
- 目的:研究1985～2008年间国内正常男性精液质量变化趋势。方法:检索历年发表的精子质量方面的文献,系统收集相关资料和数据,利用散点图和直线回归法,分析近24年正常男性精液精子密度、精液量及精子总数的变化。结果:1985～2008年间国内正常男性精液质量参数中精液量没有明显变化(P>0.05)。1985～1994年精子密度和精子总数不存在与时间相关的变化(P>0.05),但自1995年后的14年以来,精子密度和精子总数呈现显著下降趋势(P<0.05),精子密度从1995年81.5×106/ml下降到2008年66.7×106/ml,每年降低1.40%;精子总数从1995年257.2×106下降到2008年的185.9×106,每年下降2.15%。结论:1985～1995年间国内正常男性精液质量未见明显变化,而1995～2008年14年间精子密度和精子总数明显降低,很可能与进入重化工时代引起的日益加重的环境污染有关。
- 黄春妍姚陈均王春江俊康陈刚
- 关键词：精子密度精液量精子质量
