国家自然科学基金(31170226)
- 作品数：10 被引量：6H指数：2
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- 水稻OsVDAC4诱饵蛋白载体的构建及鉴定
- 2018年
- [目的]获得可用于筛选膜蛋白酵母双杂交文库的诱饵蛋白载体。[方法]在对Os VDAC4进行生物信息学分析的基础上,将Os VDAC4全长ORF分别与p BT3-N和p BT3-SUC连接,构建2个诱饵蛋白载体p BT3-Os VDAC4-N-Cub和p BT3-SUC-Os VDAC4-C-Cub,利用膜蛋白酵母双杂交技术鉴定出可用于筛库的诱饵蛋白载体。[结果]p BT3-Os VDAC4-N-Cub和p BT3-SUC-Os VDAC4-C-Cub都可以与目标蛋白互作,但由于Os VDAC4的N端有约50个可自由伸展的氨基酸残基导致p BT3-Os VDAC4-N-Cub本底反应非常强,Os VDAC4的C端存在于膜中而没有可自由伸展的氨基酸残基,p BT3-SUC-Os VDAC4-C-Cub的本底反应很弱。[结论]p BT3-SUC-Os VDAC4-CCub可用于文库筛选,这为获取Os VDAC4的互作蛋白提供了基础。
- 白雪琪谭艳平覃永华王亚楠杨武龚秋涵刘学群王春台
- 水稻vdac3基因超表达载体的构建和遗传转化
- 2013年
- 以构建水稻osvdac3基因超表达载体并获得超表达的转基因水稻植株为目标,通过PCR扩增将水稻osvdac3基因的全长片段克隆到植物表达载体,构建CaMV35S∷osvdac3∷rfp植物超表达载体。并以水稻YTB品种作为其遗传转化的受体,通过农杆菌介导的愈伤组织侵染法进行水稻遗传转化。结果表明,利用该方法成功构建了水稻osvdac3基因超表达载体,在此基础上获得了多个osvdac3基因超表达的水稻植株,并使用RT-PCR技术分析了阳性植株中osvdac3基因的表达水平。该研究结果为进一步研究水稻osvdac3基因蛋白的功能奠定了基础。
- 李林鹏王春台周杰刘学群程钢
- 关键词：水稻
- 水稻OsVDAC6的表达及亚细胞定位
- 2020年
- VDAC(Voltage-dependent anion channel)是位于线粒体外膜上参与细胞质和线粒体膜间物质及能量交换的主要通道,在细胞程序性死亡、能量代谢、物质运输以及信号转导过程中起着重要的作用。前期实验室在水稻基因组中鉴定出8个OsVDAC基因。为研究OsVDAC6的功能,本研究根据水稻OsVDAC6的ORF序列设计引物,将相应编码区克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,通过IPTG诱导Os VDAC6融合蛋白表达,利用Western Blot检测目的蛋白。构建了pM999-OsVDAC6-GFP瞬时表达载体,转化水稻原生质体后用激光共聚焦显微镜观察荧光信号。结果表明OsVDAC6被成功克隆到pET-32a(+)和pM999-GFP载体,0.5mmoL/L IPTG 16℃诱导8 h可大量表达49 kD可溶性目的蛋白,并且Os VDAC6定位于线粒体。本试验结果为进一步研究OsVDAC6的功能提供了科学依据。
- 龚秋涵覃永华刘学群刘新琼李开王春台
- 关键词：水稻克隆亚细胞定位
- 水稻线粒体基因atp6超表达载体的构建及遗传转化
- 2012年
- [目的]克隆水稻线粒体基因atp6,构建转基因表达载体,获得35S∷Rf1b5'∷atp6转基因水稻植株。[方法]设计目的基因的特异引物,采用TRIzol法提取水稻叶片总RNA,借助Toyobo反转录试剂盒反转录为cDNA,通过PCR扩增得到atp6全序列;将atp6连接到含线粒体信号肽(Rf1b5')的pCAMBIA1302双元表达载体上,采用农杆菌介导的愈伤组织侵染法进行水稻的遗传转化。[结果]利用目的基因atp6成功构建了35S∷Rf1b5'∷atp6植物表达载体,并获得了转atp6基因的阳性植株。[结论]为探讨水稻中超表达atp6对水稻生长的影响奠定基础。
- 熊磊谭艳平王春台刘学群
- 关键词：水稻ATP6
- 水稻VDAC3蛋白的可溶性外源表达及纯化被引量：2
- 2014年
- [目的]获得外源表达的可溶性水稻VDAC3蛋白。[方法]将osvdac3基因克隆到含有GST标签的pGEX-4T-1原核表达载体中,转化入BL21表达菌株,经IPTG诱导,并使用SDS-PAGE和Western Blot检测分析表达产物,通过Glutathione Resin亲和层析系统纯化获得较纯的目的蛋白。[结果]试验成功构建了pGEX-4T-1-osvdac3原核表达载体并转化大肠杆菌。通过SDS-PAGE和Western Blot试验证实56 kD处的蛋白条带是具有可溶性表达的VDAC3蛋白。[结论]经Glutathione Resin亲和层析系统纯化得到可溶性带GST标签的VDAC3蛋白。该研究结果为水稻VDAC蛋白的功能研究进一步奠定了基础。
- 刘洋王春台刘学群程钢
- 关键词：原核表达
- 水稻基因OsVDAC3的逆境功能分析被引量：3
- 2015年
- 水稻OsVDAC3是编码一个可能12次跨膜的线粒体基因,芯片数据显示该基因在水稻根和花器官中表达最强,并受干旱、盐及多种激素显著诱导。以T1代OsVDAC3超表达转基因植株为材料,实时荧光定量PCR技术检测植株中基因OsVDAC3的表达水平,筛选超表达家系进行盐胁迫和甘露醇胁迫试验,结果显示超表达OsVDAC3能显著增强水稻的抗逆性,表明OsVDAC3是水稻逆境胁迫中的正调控因子。
- 胡颖王春台覃永华
- 关键词：水稻实时荧光定量PCR逆境胁迫
- 水稻可溶性OsVDAC5蛋白的外源表达及鉴定被引量：1
- 2016年
- 通过生物信息学分析确定水稻(Oryza sativa L.)Os VDAC5的可溶性肽段,将相应的编码区克隆于p GEX-4T-1原核表达载体中,进行IPTG诱导表达和GST亲和层析纯化,利用SDS-PAGE和Western Blot检测目的蛋白。结果表明,成功构建的p GEX-4T-1-Os VDAC5(1-75aa)原核表达载体,经过体外IPTG诱导,在35 k Da处可检测到可溶性目的蛋白,并获得外源蛋白表达的最适温度为15℃和最佳诱导时间为8 h;经过GST亲和层析,SDS-PAGE可检测到较为单一的蛋白条带,得到纯化的GST-Os VDAC5(1-75aa)融合蛋白。
- 李双红谌鑫程钢覃永华王春台
- 关键词：SATIVAOS可溶性表达
- 不同水稻品种OsVDAC3及3个互作蛋白基因OsV3IP1-3表达模式分析
- 2019年
- 为研究OsVDAC3及互作蛋白基因OsV3IP1-3的表达模式,用生物信息学和定量PCR方法分析了水稻不育系‘粤泰A’(YTA)、保持系‘粤泰B’(YTB)和‘日本晴’(NIP)不同发育时期幼穗,四叶期根、鞘和叶中OsVDAC3和OsV3IP1-3的表达量。生物信息学分析表明在ATG上游含有21个与水稻生长发育及胁迫应答相关的顺式作用元件;RiceXPro和MSU Rice Genome Annotation Project水稻基因表达数据库分析结果表明在NIP中OsV3IP1只在幼苗表达,而OsVDAC3、OsV3IP2和OsV3IP3在整个生活周期都表达,但OsVDAC3在花药表达水平最高,OsV3IP2在生殖器官表达水平最高,OsV3IP3在嫩芽中表达量最高。定量PCR结果表明OsVDAC3和OsV3IP1-3基因在NIP、YTA和YTB 3个水稻品种中表达模式不同。OsVDAC3在YTB的1.5～4.0 cm幼穗表达水平非常高,OsV3IP1在3个品种的四叶期地上部都有非常高的表达,OsV3IP2和OsV3IP3在YTB和NIP中表达模式相似,而与YTA中差异明显。这些基因的表达模式与功能的关系有待进一步研究。
- 王亚楠程钢覃永华谭艳平刘学群徐鑫刘新琼王春台
- 关键词：水稻
- 水稻OsV3IP2和OsV3IP3原核表达与鉴定
- 2017年
- 通过生物信息学分析确定OsV3IP2和OsV3IP3的可溶性肽段,获得可溶性的OsV3IP2和OsV3IP3外源表达蛋白质,将相应的编码区克隆于原核表达载体p ET32a中,进行IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白质。结果表明,利用生物信息学软件对蛋白质的二级结构进行预测,将OsV3IP2、OsV3IP3分别分为2个和4个部分。将其分别克隆到p ET32a后,采用0.2 mol/L IPTG在10、20、30℃诱导表达。经SDS-PAGE和Western Blot分析,证明OsV3IP2-1、OsV3IP 2-2、OsV3IP 3-1表达的融合蛋白存在于上清液中,而OsV3IP 3-2、OsV3IP 3-3表达的融合蛋白存在于沉淀中,获得了OsV3IP2-1、OsV3IP 2-2、OsV3IP 3-1可溶性目的蛋白,为进一步体外验证OsVDAC3与OsV3IP2、OsV3IP3的互作奠定了基础。
- 程英胡颖覃永华程钢王春台
- 关键词：水稻OSSDSPAGEWESTERNBLOT
- 水稻OsVDAC5基因干涉载体的构建和遗传转化
- 2015年
- [目的]构建水稻基因Os VDAC5的RNAi表达载体,遗传转化获得Os VDAC5转基因植株以研究该基因的生物学功能。[方法]通过PCR扩增Os VDAC5特异片段并克隆到RNA干涉载体p MCG161,以水稻日本晴为受体,将Os VDAC5 RNAi表达载体进行了农杆菌介导的遗传转化,利用PCR和RT-PCR技术检测T0代转基因植株中Os VDAC5的表达水平。[结果]Os VDAC5在绝大多数RNAi转基因植株中的表达量显著降低。[结论]为进一步研究水稻Os VDAC5基因功能提供了重要材料。
- 谌鑫王春台覃永华
- 关键词：水稻
