北京市科技新星计划(2006A63)
- 作品数：5 被引量：44H指数：4
- 相关作者：朱汝南钱渊邓洁赵林清王芳更多>>
- 相关机构：首都儿科研究所中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：北京市科技新星计划国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 北京地区2002—2006年急性呼吸道感染儿童中鼻病毒感染的研究被引量：22
- 2007年
- 目的对北京地区急性呼吸道感染患儿的鼻病毒(HRV)感染状况进行分析,以初步了解近年来鼻病毒感染在儿科患者中的流行规律。方法收集2002年11月至2006年11月来自首都儿科研究所附属儿童医院门诊及病房急性呼吸道感染患儿标本共3292份,应用针对HRV14 5′端非编码区(5′-NCR)保守区基因序列设计的引物进行巢式PCR检测标本中HRV。结果3292份标本中HRV总阳性检出为507份,占本组检测标本的15.4%(507/3292),其中门诊患儿中阳性检出率为16.7%,住院患儿为14.5%;HRV阳性检出率在咽炎患儿中达到50.0%(8/16),在急性支气管炎的喘息性支气管炎患儿中为17.5%(14/80),其他如急性支气管肺炎、毛细支气管炎等患儿中也有较高的HRV阳性检出率;在以血液系统疾病等为第一诊断,合并有呼吸道病毒感染的患儿中HRV检测阳性率为26.4%(14/53)。HRV感染的季节性分布中,2003年的检出高峰在9月份,阳性检出率达32.6%;2004年检出率最高的是2月份(阳性检出率为24.2%),但与其他年度相比,阳性率略低;2005年的检出高峰在2月份,阳性检出率达35.3%;2006年的检出高峰在3月份,阳性检出率为31.3%。在HRV检测阳性的患儿中,年龄≤1岁的占44.8%,其次为～2岁(15.4%)、～3岁(12.4%)年龄组的患儿。结论HRV不仅可引起急性上呼吸道感染,在下呼吸道感染患儿中也有较高的感染率,在患其他疾病导致抵抗力低下时易于并发呼吸道鼻病毒感染。HRV感染存在于各年龄组并全年均可发生。随年龄增长,HRV阳性检出率逐渐降低。婴幼儿,尤其是1岁以下的婴儿是HRV的易感人群。
- 赵林清钱渊朱汝南邓洁王芳
- 关键词：鼻病毒急性呼吸道感染婴幼儿
- 北京地区人群中人Boca病毒血清抗体的分析被引量：8
- 2008年
- 目的通过对血清中人Boca病毒（HBoV）主要衣壳蛋白VP2特异性IgG抗体进行检测，初步了解北京地区人群中这种新发现的病毒的感染状况。方法以大肠杆菌表达的HBoV主要衣壳蛋白VP2为抗原，应用Western—blot方法，对1996年4月至1997年3月取自首都儿科研究所附属儿童医院健康查体者及北京宣武医院非呼吸道感染患者的血清标本共677份进行HBoV VP2蛋白特异性IgG抗体检测。设抗组氨酸抗体及兔抗HBoV-VP2多肽特异性免疫血清为阳性血清对照。结果（1）677份血清标本中，抗HBoV VP2蛋白的IgG抗体阳性400份，总检出率为59．1％。（2）被检对象中，〈1个月的婴儿抗体阳性率为45．3％，1个月～的婴儿抗体阳性率为41．4％，2个月～的婴儿抗体阳性率最低（31．3％），6个月～至7岁龄抗体阳性检出率在45．6％～69．7％，7岁后直至40岁，抗体阳性检出率维持在70％左右；50岁后则为61．8％～62．8％。结论早在1996年北京地区的人群中就有59．1％曾经感染过HBoV，说明这种病毒是一种新发现的病毒而不是新出现的病毒，北京地区人群中该病毒的感染较常见。6个月龄以前的婴儿为易感人群。
- 赵林清钱渊朱汝南邓洁王芳董慧瑾Li Yan
- 关键词：免疫球蛋白G
- 人Boca病毒外壳蛋白VP2在杆状病毒中的表达及病毒样颗粒的构建被引量：2
- 2009年
- 为了得到结构与功能更接近于天然病毒的人Boca病毒（HBoV）主要外壳蛋白VP2,将来源于北京急性呼吸道感染患儿标本（BJ3722）的HBoV VP2基因编码区克隆至杆状病毒表达转移载体（pFastBac1）,通过转座反应获得重组Bacmid DNA,以这种DNA转染昆虫细胞Sf9。收获重组病毒及其昆虫细胞培养物,经SDS-PAGE并应用兔抗HBoV VP2高价免疫血清进行Western blot,以检测所表达的VP2蛋白。昆虫细胞经重组病毒感染后7~10d细胞完全裂解时,收获培养上清（VLPs-A）,或在感染后4~5d细胞裂解前收获细胞并将其裂解（VLPs-B）,经两次40%的蔗糖垫超速离心,所得的样品经Western blot和间接免疫荧光方法（IFA）检测,以确定VLPs的组分,然后应用免疫电镜观察病毒样颗粒的形态结构。通过考马斯亮蓝染色和Western blot检测,均可检测到分子量约61kD的目的蛋白;通过IFA在重组杆状病毒感染的Sf9细胞中检测到特异性荧光,表明HBoV VP2蛋白得到了表达并具有抗原特异性。纯化后的样品在电镜下可见类似于天然细小病毒B19的直径20nm左右的具有空壳结构的球形颗粒。本研究成功构建了HBoV VP2重组杆状病毒,得到了具有抗原特异性的HBoV VP2蛋白表达并形成了HBoV的VLPs。
- 赵林清钱渊丁雅馨朱汝南邓洁王芳孙宇LiYan
- 关键词：重组杆状病毒
- 急性呼吸道感染儿童中WU多瘤病毒基因组序列特征分析被引量：8
- 2010年
- 为了解从北京地区急性呼吸道感染儿童中发现的WU多瘤病毒的基因组编码特征,并对其进行基因序列多样性分析,应用针对基因组5'端非编码区、衣壳蛋白VP1、VP2编码基因以及LTAg编码基因的引物对,从已确证为WU病毒阳性的来自北京地区急性呼吸道感染儿童的编号为BJF5276的临床标本中经聚合酶链反应扩增得到预期的基因片段,直接测序后将序列拼接得到全基因组序列,进而推导其基因组编码特征;随后从其它21例已确证为WU多瘤病毒阳性的急性呼吸道感染儿童标本中扩增得到衣壳蛋白VP2编码区基因,进行基因序列测定以及基因序列多样性分析。得到了WU病毒BJF5276全基因组序列。序列分析结果显示WU病毒BJF5276基因组序列全长为5229bp,共有5个主要的CDS(Coding domain sequences),分别编码衣壳蛋白VP2、VP3、VP1,并以其互补序列为模板,编码STAg和LTAg;所得到的22例VP2蛋白编码区基因序列同源性比较结果显示病毒VP2基因编码区序列与GenBank中已有的64个序列之间同源性很高;Mega4.0NJ进化树(Neighbor-joiningtree)分析显示这22个VP2基因序列分属于不同的基因进化簇,其中20个序列属于进化簇I中的Ia,另外2个序列属于进化簇III,其中的一个序列在IIIb基因进化簇中,另外一个序列独立成簇,不属于现有的IIIa或IIIb,暂时将其命名为IIIc。本研究结果提示北京地区的WU病毒具有多瘤病毒科的基因组编码特性;序列非常保守,有分属于不同基因进化簇的WU病毒在北京地区流行,与文献报道的以Ib流行为主所不同的是北京地区的WU病毒以Ia为主,且有新的基因进化簇出现。
- 赵林清钱渊朱汝南邓洁王芳孙宇丁雅馨张尼娜
- 关键词：基因序列分析急性呼吸道感染儿童
- 北京地区人Boca病毒外壳蛋白VP2的原核表达及抗原性初步分析被引量：6
- 2008年
- 目的获得新发现的北京地区人Boca病毒（HBoV）主要外壳蛋白VP2，为对该病毒病原学的深入研究打下基础。方法从已证明为HBoV阳性的临床标本BJ3722中经PCR扩增得到HBoV VP2蛋白编码区基因片段，将其克隆至pUCm-T载体中，然后再亚克隆至原核表达载体pET-30b（＋），经双酶切、PCR、序列测定等方法挑选、鉴定阳性克隆，得到重组表达质粒pET-30b-VP2，转化大肠杆菌B121（DE3），在不同的温度下利用IPTG诱导蛋白表达；对得到的蛋白表达产物粗提物经NP亲和层析纯化后，利用抗组氨酸抗体、兔抗HBoV-VP2多肽免疫血清及人血清进行抗原性初步分析。结果BJ3722 VP2基因正确插入pET-30b中，开放阅读框架正确，表明得到了预期的pET-30b-VP2重组原核表达质粒。比较25℃、30℃、37℃ 3个不同温度下的蛋白表达产物，以25℃ 1mmol／L IPTG诱导培养过夜后产生的带6×His标记的重组VP2蛋白量最大，主要以包涵体形式存在。VP2蛋白粗提物经NP亲和层析，在pH4．5时获得较理想的纯化结果。Western blot显示所表达的蛋白质能够与抗组氨酸特异性抗体、兔抗HBoV-VP2蛋白多肽免疫血清以及人血清发生反应。结论本研究成功构建了重组pET-30b-VP2原核表达质粒，改善了表达及纯化条件，得到了较大量的HBoV-VP2蛋白表达，并初步证明表达产物具有抗原特异性，可用于对这一新发现病毒的进一步深入研究。
- 赵林清钱渊董慧瑾朱汝南邓洁王芳LI Yan
- 关键词：原核表达抗原特异性
