上海市科技兴农重点攻关项目([2003]14-1)
- 作品数：12 被引量：30H指数：4
- 相关作者：戴建军芮荣武彩红张德福谢冰更多>>
- 相关机构：南京农业大学上海市农业科学院江苏农牧科技职业学院更多>>
- 发文基金：上海市科技兴农重点攻关项目国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程更多>>
- 应用生物技术保存地方猪种种质资源研究被引量：5
- 2008年
- 我国地方猪种资源十分丰富,拥有许多突出特性的品种,受到国内外养猪业者的重视。由于种种原因,有些猪种濒临绝种。生物技术的发展给地方猪种种质资源长期保存带来了希望。结合课题组近年来来的相关工作,概述了我国地方猪种资源概况及保种的迫切性,冷冻保种研究现状及地方猪种种质资源长期保存的主要技术,包括猪种配子和胚胎冷冻技术、基因组DNA库、猪体细胞克隆技术及其在长期保存种的作用。
- 张德福戴建军吴彩凤杨山亭王磊殷方芝
- 关键词：地方猪种
- 已糖对猪卵母细胞体外成熟及体外受精后囊胚发育能力的影响
- 2006年
- 以NCSU-37为基础培养基,观察了葡萄糖、果糖和乳糖3种已糖对猪卵母细胞体外成熟和体外受精能力的影响,结果:①与浓度2.51、0.0 mmol/L比较,葡萄糖或果糖浓度为5.5 mmol/L时,猪卵母细胞MII期成熟率较高(P<0.05);而不同浓度的半乳糖对MII期成熟率无明显影响。②猪成熟卵母细胞体外受精后,葡萄糖或果糖组囊胚率分别为8.6%和8.2%,显著高于对照组及半乳糖组2.9%和9.2%(P<0.05);但对囊胚进行地衣红压片显示,果糖组囊胚质量达到A级率为43.2%(10/23),显著高于葡萄糖组24.3%(6/25)。研究表明,果糖对于猪卵母细胞的体外成熟及体外生产高质量囊胚效果较好。
- 项智锋张德福张金洲刘东张似青苏建民
- 关键词：卵母细胞体外受精
- OPS法与细管法冷冻小鼠胚胎的研究被引量：1
- 2006年
- 用0.25 mL细管和OPS(open pu lled straw)管,对小鼠囊胚进行玻璃化冷冻,以比较2种方法的冷冻效果。结果表明,冷冻-解冻胚胎体外培养24 h后,2组的发育率分别为63.3%(31/49)和71.4%(55/77);OPS法在冻胚发育率上稍优于细管法,但无统计学差异(P>0.05);2组冷冻胚胎的培养发育率均显著低于鲜胚培养组94.3%的发育率(P<0.05)。采用OPS法冷冻小鼠8-细胞胚,其冻后培养发育率为55.6%,似乎要低于囊胚冷冻后的培养发育率,但差异不显著(P>0.05)。
- 戴建军梁阳秋吴悦婷李宁武彩红谢冰芮荣
- 关键词：胚胎玻璃化冷冻OPS法细管法
- 细胞骨架在猪GV期与M Ⅱ期卵母细胞的分布规律
- 2006年
- 采用免疫荧光技术,在激光扫描共聚焦显微镜下观察并分析猪GV期和MⅡ期卵母细胞的细胞骨架分布。结果发现,猪新鲜GV期与MⅡ期卵母细胞的微管、微丝和染色体结构与分布,具有不同的特点和规律。在GV期卵母细胞,结构完整的微管尚未形成;染色体未发生致密化,仍存在于生发泡内;而微丝则分布于质膜下及整个胞质中。MⅡ期卵母细胞的微管,主要存在于纺锤体上,少量微管出现在第一极体周围;染色体排列于纺锤体赤道板上;微丝均匀分布于质膜下。本研究表明,微管、微丝和染色体三者间密切联系、相互作用,共同参与卵母细胞成熟与发育进程的调控。
- 武彩红芮荣戴建军剧世强卢晓郑筱峰
- 关键词：卵母细胞细胞骨架激光扫描共聚焦显微镜
- 卵母细胞扫描电镜和透射电镜样本的制作被引量：4
- 2010年
- [目的]探讨卵母细胞扫描电镜和透射电镜的制作方法,为相关研究提供技术支持。[方法]以猪GV期和体外成熟MII期卵母细胞为研究对象,分别制作扫描电镜样本和透射样本,并观察其超微结构变化。[结果]所用方法需样本量少,电镜下细胞形态结构完好,超微结构清晰。[结论]证实该方法适用于卵母细胞超微结构观察的制样。
- 武彩红朱达文胡新岗芮荣戴建军郑筱峰张斌
- 关键词：卵母细胞扫描电镜透射电镜超微结构
- 猪卵母细胞中细胞骨架的激光共聚焦显微技术被引量：1
- 2008年
- 为了探讨卵母细胞中细胞骨架的激光共聚集显微技术,为相关研究提供技术平台,以猪新鲜GV期和体外成熟MⅡ期卵母细胞为研究对象,通过对其进行固定、穿透、封闭、免疫荧光染色、压片和封片等处理,于激光扫描共聚集显微镜下观察微管、微丝和染色体形态分布,摸索出一套适合于猪卵母细胞中细胞骨架的显微方法,可准确定位卵母细胞相应细胞骨架的形态。卵母细胞染色前处理、染色过程及压片均为该方法的关键性步骤,其中保证所有操作在37℃条件下进行尤为重要。
- 武彩红张斌芮荣戴建军吴敏秋苏治国
- 关键词：卵母细胞细胞骨架
- 猪卵母细胞玻璃化冷冻后的超微结构变化被引量：5
- 2007年
- 为研究猪未成熟期(GV期)和体外成熟期(MⅡ期)卵母细胞玻璃化冷冻后的超微结构变化,随机取新鲜与冷冻-解冻后的GV期和MⅡ期卵母细胞制备电镜标本。GV期和MⅡ卵母细胞分3组进行处理:Ⅰ组为对照组,Ⅱ组为GV期卵母细胞冷冻组,Ⅲ组为MⅡ期卵母细胞冷冻组。结果表明,所用玻璃化冷冻程序更适用于猪GV期卵母细胞的冷冻保存,GV期冷冻组卵母细胞的二乙酸荧光素(FDA)染色存活率、卵裂率均明显高于MⅡ期卵母细胞冷冻组。透射电镜观察结果发现,猪GV期卵母细胞经玻璃化冷冻后,主要表现为部分卵丘-卵母细胞复合体(COC)发生卵丘细胞脱落,透明带破损,卵丘细胞碎裂,卵丘细胞与卵母细胞间的连接受到破坏,卵母细胞微绒毛断裂、消失、数量减少,卵母细胞内脂滴多呈均质状。而MⅡ期卵母细胞冷冻后,皮质颗粒仍呈单层排列于质膜下,仅可见形态不规则的不均质脂滴,其周围常严重空泡化。试验表明,采用适当的冷冻方案,可以获得少量源于冷冻保存的猪GV期卵母细胞的胚胎。而猪MⅡ期卵母细胞冷冻后,经体外受精未见卵裂,脂滴严重空泡化是其最为明显的变化。
- 武彩红芮荣戴建军谢冰剧世强卢晓侯加法
- 关键词：卵母细胞玻璃化冷冻体外成熟体外发育超微结构
- 猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存技术研究被引量：3
- 2007年
- 旨在探讨提高猪GV期卵母细胞冷冻保存效率的可能途径。将EDS、EFS40和ES冷冻保护液用作卵母细胞冻前、冻后程序的处理,但不冷冻,比较3种冷冻保护剂对猪GV期卵母细胞的毒性作用;采用ES液作玻璃化液,比较常规细管法、OPS法和电镜铜网法3种冷冻载体对猪GV期卵母细胞的冷冻效果;并以ES液作玻璃化液,OPS管为冷冻载体,将猪GV期卵母细胞分5组,即对照组、CB+离心处理组、直接冷冻组、CB+冷冻组、CB+离心+冷冻组进行对比处理,比较各处理卵母细胞的冻后存活率与发育率。结果表明,在不同冷冻保护液中,以ES液组合作为玻璃化冷冻液时的毒性作用最低,与对照组间无明显差异(P>0.05);在3种冷冻载体中,用OPS法冷冻猪GV期卵母细胞,所获冻后存活率明显高于电镜铜网法和细管法(65.4%对45.0%和38.6%,P<0.05),并可获得最佳的冻后成熟率(43.3%);猪GV期卵母细胞单纯经细胞松弛素B和离心极化处理,不会严重影响卵母细胞的存活,但卵裂率显著低于对照组(39.0%对52.1%,P<0.05);细胞松弛素B处理或细胞松弛素B+离心极化处理后再进行玻璃化冷冻,并不能提高卵母细胞的冻后存活率与发育率。采用OPS法直接进行GV期卵母细胞的玻璃化冷冻,可获得7.8%的冻后卵裂率,并能获得桑椹胚发育,是一种有效的猪卵母细胞冷冻保存技术。
- 戴建军芮荣武彩红葛立军卢庆
- 关键词：卵母细胞玻璃化冷冻
- 猪卵母细胞玻璃化冷冻后细胞骨架的变化被引量：5
- 2006年
- 为研究玻璃化冷冻后猪卵母细胞纺锤体、染色体和微丝的变化,从屠宰猪卵巢表面直径2—5mm卵泡中采集未成熟(GV)期卵母细胞,由GV期卵母细胞经成熟培养获得体外成熟(MⅡ)期卵母细胞。GV期和MⅡ期卵母细胞各分为3组对照组、冷冻保护剂处理组和玻璃化冷冻组。MⅡ期卵母细胞经分组处理后直接用于激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察样本;而GV期卵母细胞处理后先经44h成熟培养,再用作LSCM观察样本。供试卵母细胞经固定、免疫荧光染色后,于LSCM下观察。结果表明,冷冻保护剂处理组GV期卵母细胞经成熟培养后,其纺锤体结构、染色体排列与微丝分布正常率分别为42.9%、89.6%和28.6%;玻璃化冷冻组此3项指标的正常率分别为10.1%、36.4%和16.9%,两组间差异显著(P<0.05);除冷冻保护剂处理组染色体正常率与对照组无较大差异外,两试验组的其他指标均明显低于对照组(分别为79.5%、93.1%和72.3%,P<0.05)。MⅡ期卵母细胞冷冻保护剂处理组的纺锤体结构、染色体排列与微丝分布正常率分别为34.4%、61.3%和47.9%,而冷冻组分别为12.9%、56.7%和37.2%,两组均显著低于对照组(分别为78.3%、90.1%和72.8%,P<0.05)。结果表明,猪GV期和MⅡ期卵母细胞经冷冻保护剂处理或玻璃化冷冻保存后,均造成了纺锤体、染色体和微丝不可逆的损伤,这可能是影响卵母细胞成熟、受精与发育的重要原因。
- 武彩红芮荣戴建军谢冰剧世强卢晓
- 关键词：玻璃化冷冻细胞骨架激光扫描共聚焦显微镜
- 猪卵母细胞玻璃化冷冻保存技术的研究进展
- 2007年
- 卵母细胞冷冻保存技术在动物种质资源保存、濒危动物保护等方面具有独特的作用,猪卵母细胞的冷冻保存仍是一项世界性难题,尚处于摸索阶段。现就猪卵母细胞冷冻保存的现状、冷冻原理与方法及冷冻损伤等问题进行综述。
- 戴建军芮荣
- 关键词：卵母细胞玻璃化冷冻
