广东省科技计划工业攻关项目(20098030801230)
- 作品数：6 被引量：19H指数：2
- 相关作者：刘天助汪鑫郭洪波颜晓慧廖奕宏更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医科大学南方医院南昌大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 恶性胶质瘤耐药细胞通过Beclin1上调自噬抵抗替莫唑胺化疗被引量：8
- 2013年
- 目的 分析Beclin 1与临床胶质瘤病理等级和胶质瘤复发间的关系,探讨其在胶质瘤耐药中的作用和机制. 方法 收集南方医科大学珠江医院和南方医院神经外科自2012年4月至2013年4月手术切除的胶质瘤标本53例（WHO分级Ⅰ级7例,复发2例；Ⅱ级9例,复发4例；Ⅲ级11例,复发6例；Ⅳ级9例,复发5例）,免疫组化和Western blotting检测胶质瘤标本中Beclin1的表达；体外培养胶质瘤耐药细胞系U251AR和非耐药U251细胞,Western blotting检测细胞中Beclin 1和耐药蛋白P-gP的表达；Western blotting检测双链小分子Beclin 1干扰RNA（siBeclin l）转染U251AR细胞48h后Beclin 1蛋白的表达;CCK8法检测不同浓度替莫唑胺（TMZ）作用U251、U251AR和U251AR-siBeclin 1后细胞活性；Western blotting检测200μmol/L TMZ作用U251、U251AR和U251AR-siBeclin 1 48 h后Capase-3的表达；吖啶橙染色和Western blotting分别检测干扰Beclin 1表达和HCQ对U251AR细胞自噬小体数量和Capase-3表达的影响. 结果 免疫组化染色结果显示Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中Beclin 1阳性细胞数明显高于Ⅰ、Ⅱ级胶质瘤.Western blotting结果显示Ⅳ级、Ⅱ和Ⅲ级、Ⅰ级中Beclin 1的表达依次降低,Ⅲ、Ⅳ级复发肿瘤Beclin 1的表达量明显高于原发肿瘤,差异有统计学意义（P＜0.05）; U251AR中Beclin 1和耐药蛋白P-gP的表达量均高于U251细胞.与干扰对照组和空白对照组比较,转染siBeclin 1 48 h后干扰组Beclin 1蛋白的水平明显下降；在含TMZ（50,100,500和1000 μmol/L）培养基中培养24 h后,U251AR细胞存活率明显高于U251和si-Bec1-U251AR细胞,差异有统计学意义（P＜0.05）.200 μmol/L TMZ作用48 h后,U251细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达量明显高于U251AR和si-Bec l-U251AR细胞.吖啶橙染色显示在TMZ培养U251AR 48 h后,HCQ和Beclin 1干扰都导致自噬小体形成明显减少,Caspase-3的表达增高,差异有统计学意义（P＜0.05）. 结论 Beclin 1与胶质瘤恶性程度、复发和�
- 汪鑫刘天助郭洪波宁瑜廖奕宏钟文宏黄洁棱颜晓慧
- 关键词：BECLIN自噬耐药替莫唑胺
- P57对U87胶质母细胞瘤细胞系增殖的抑制作用及对替莫唑胺化疗损伤的抵抗作用被引量：1
- 2013年
- 目的探讨替莫唑胺（TMz）短期化疗下P57在胶质母细胞瘤细胞增殖抑制中的作用和机制。方法通过Western blotting检测P57和核增殖抗原（Ki-67）在TMZ短期化疗后U87细胞中的表达情况：通过Western blotting和免疫组化染色比较原发性和复发性（经TMZ治疗）胶质母细胞瘤临床标本中P57的表达差异；通过干扰P57的表达，检测TMZ短期化疗下和撤药后U87细胞凋亡、细胞周期和细胞活力的变化。结果TMZ短期化疗后，U87细胞中P57蛋白表达量明显升高．而Ki-67表达量明显下降；胶质母细胞瘤临床标本中复发性肿瘤的P57表达量高于原发性肿瘤；干扰P57表达后周期素依赖性激酶2（Cdk2）的表达量增加，表现为TMZ对U87细胞的增殖抑制作用减弱．但细胞凋亡率明显升高f未干扰细胞凋亡率为12．83％±1．40％，干扰组细胞凋亡率为31．00％±3．48％1；此外，撤药后，与对照组相比，P57干扰组U87细胞发生明显细胞周期阻滞和细胞活力下降。结论TMZ短期化疗下，U87细胞通过上调P57表达及下调Cdk2表达抑制肿瘤细胞增殖．同时通过抑制细胞周期进程以降低化疗损伤。
- 罗海洋刘天助孟伟尹明芳汪鑫郭洪波
- 关键词：胶质母细胞瘤替莫唑胺P57
- 自噬与肿瘤：细胞的自我保护机制被引量：7
- 2013年
- 自噬是一个细胞自我消化的过程，是细胞自我清除受损蛋白和细胞器，降解细胞毒性物质，并为其提供能量的有效方式．是一种单纯应对各种生存压力的细胞自我保护机制。自噬与肿瘤关系非常密切，当前大多国内外文献支持自噬是既抑制肿瘤。又促进肿瘤的双刃剑。本文按肿瘤的发生、发展、治疗和预后的顺序，从细胞学角度对自噬的功能综述如下。
- 刘天助颜晓慧汪鑫宁瑜廖奕宏钟文宏黄洁棱周芳芳郭洪波
- 关键词：自噬肿瘤化学疗法放射疗法预后
- 一种新的肿瘤干细胞球囊研究技术——蛋清包埋技术被引量：2
- 2012年
- 目的探索一种新的能长期、高效保存并研究肿瘤于细胞球囊的技术。方法从恶性胶质瘤原代肿瘤细胞中培养出肿瘤干细胞。将第5代肿瘤干细胞球囊经蛋清石蜡两次包埋、切片后，行HE染色、免疫组织化学染色和免疫组织荧光染色，并与传统的肿瘤干细胞球囊包埋技术及球囊免疫组织荧光染色实验进行比较。结果应用蛋清石蜡两次包埋处理的球囊切片经HE染色后，球囊分布均匀、结构完整，胞核、胞浆颜色鲜艳、对比度高。球囊切片的免疫组织化学染色和免疫组织荧光染色能准确定位球囊中阳性细胞和阳性蛋白表达位点，可进行阳性细胞及蛋白的半定量分析。结论肿瘤干细胞球囊蛋清石蜡两次包埋切片技术能提高实验效率，减少实验误差，节省成本，优于传统球囊包埋技术及传统球囊免疫荧光技术。
- 刘天助颜晓慧汪鑫白义凤廖红展苑召虎吴炳义邱胜聪
- 关键词：肿瘤干细胞球囊
- 一种功能性分离和纯化胶质瘤干细胞的方法
- 2014年
- 目的 探索一种简单、高效、稳定、可靠、经济的胶质瘤干细胞分离和纯化方法. 方法 取对数生长期U87细胞,应用无血清干细胞培养基,置含1％O2的缺氧培养箱中培养,10d后传代培养并离心收集第一代肿瘤球（G1）,连续传代培养获得第5代肿瘤球（G5）.免疫组化染色检测G5肿瘤球中巢蛋白（nestin）、CD133和缺氧诱导因子2α （HIF2α）的表达;Western blotting检测G1～G5肿瘤球中HIF2α蛋白的表达;免疫细胞化学染色检测G5分化细胞中胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、O1及βⅢ微管蛋白（βⅢ-Tublin）的表达.6只裸鼠按随机数字表法均分为实验组和对照组（每组3只）,于左侧背部皮下分别注射105个/5 μL G5、U87细胞,25 d后处死裸鼠,取出肿瘤,免疫组织化学染色检测肿瘤中nestin的表达. 结果 G5肿瘤球中nestin、CD133、HIF2α阳性细胞率分别为91％±5％、95％±4％和98％±2％; Western blotting检测显示G1～G5肿瘤球中HIF2α蛋白的表达逐渐增加;G5细胞能分化为表达βⅢ-Tublin、GFAP、O1的子细胞;6只裸鼠均长出肿瘤,实验组的肿瘤体积较大,且肿瘤组织nestin阳性细胞率（47％±11％）明显高于对照组（5％±2％）. 结论 使用功能性分离和纯化方法获得的G5肿瘤球细胞,表达胶质瘤干细胞的特异性标记物、具有三系分化能力和较强的体内成瘤能力,符合胶质瘤干细胞的特征.
- 刘天助宁瑜廖红展汪鑫邱胜聪刘彦廷徐宁波钟文宏廖奕宏黄洁棱郭洪波
- 关键词：胶质瘤干细胞缺氧纯化
- 人脑胶质瘤多药耐药细胞株的构建及生物学特性鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的体外构建胶质瘤耐甲磺酸伊玛替尼多药耐药细胞株，并研究其生物学特性。方法采用逐渐增加培养基中伊玛替尼药物浓度的方法诱导构建耐甲磺酸伊玛替尼的人脑胶质瘤U251细胞株（命名为U251AR）；CCK8法检测U25IAR、U251对多种化疗药物的IC50和耐药指数；QRT-PCR法检测耐药相关基因ABCC1、ABCB1、ABCB4、ABCG2mRNA的表达，流式细胞术检测ABCG2蛋白的表达。结果体外培养12个月后建立了稳定耐药的细胞株U251AR，与亲代细胞相比异形性不显著。U251和U251AR对化疗药物的IC50相比较差异均有统计学意义（P〈0．05），U251AR对甲磺酸伊玛替尼、阿霉素、顺铂的耐药指数分别为20．41、5．06、10．28，表现出多药耐药特征。QRT-PCR检测结果显示耐药细胞株U251AR中ABCC1、ABCB1、ABCB4、ABCG2mRNA的表达明显高于亲代U251细胞，流式细胞术检测结果显示U251AR中ABCG2蛋白的表达强于亲代U251细胞，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论成功建立多药耐药的胶质瘤细胞株U251AR，其多药耐药与ABCCl、ABCB1、ABCB4、ABCG2mRNA及ABCG2蛋白的表达上调相关。
- 白义凤廖红展刘天助郭洪波
- 关键词：神经胶质瘤多药耐药性细胞株
