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不同常规培养液对人肾小管上皮细胞的影响: 2009年; 目的:通过4种常规培养液对人肾小管上皮细胞株(HKC)的培养及其细胞表型特征的观察,探讨目前肾小管上皮细胞体外培养存在的有关问题。方法:采用DMEM(含10%新生牛血清)、DMEM/F12(含5%新生牛血清)、DMEM/F12(含5%胎牛血清)和keratinocyte-SFM(含rEGF和BPE)完全培养液分别进行HKC细胞的体外培养。应用细胞免疫荧光或Western blotting法分别检测传6代细胞cytoketatin-18、E-cadherin、α-SMA和vimentin的表达。结果:HKC细胞经过DMEM(10%新生牛血清)和DMEM/F12(含5%新生牛血清)完全培养液培养3代后,α-SMA和vimentin分别转为强阳性表达,而cytoketatin-18、E-cadherin则分别转为阴性或弱阳性;keratinocyte-SFM完全培养液则具有逆转HKC细胞的cytoketatin-18、E-cadherin阴性转化作用,与此相反,DMEM/F12(含5%胎牛血清)可使这种cytoketatin-18、E-cadherin阳性的HKC细胞发生cytoketatin-18阴性转化。结论:不论是含血清还是无血清培养液培养的肾小管上皮细胞,均具有体外研究的局限性。; 沈青沈钰新林君儒朱军徐虹; 关键词：培养基细胞表型肾小管上皮细胞

肾小管上皮细胞S期细胞凋亡过度与G_1/S细胞低氧暴露的关系被引量：1: 2005年; 目的:探讨肾上管上皮细胞(RTEs)S期细胞凋亡过度与G1/S界面细胞低氧直接暴露的关系。方法:采用NaCN体外细胞化学性低氧法进行G1/S新生猪RTEs低氧干预研究,分别应用反相高效液相法、流式细胞术细胞DNA含量PI染色分析法和流式细胞术间接细胞免疫化学法进行低氧/再给氧各观察点细胞内ATP含量、细胞周期时相和凋亡细胞分布率以及热休克蛋白(HSP27和HSP70)表达量的检测。并采用磷蛋白磷酸酶(PP2A)抑制剂斑蝥素进行NaCN介导的细胞蛋白质脱磷酸化抑制研究,比较HSP27和HSP70在磷酸化与脱磷酸化状态下细胞凋亡的发生率。结果:受低氧直接暴露的G1/S新生猪RTEs在S期细胞凋亡比率显著高于PP2A抑制组和空白对照组(P<0·01),此时细胞内ATP含量显著低于后两组(P<0·05),而细胞内HSP27和HSP70的表达量则均高于后两组(P<0·01)。结论:新生猪RTEs发生S期细胞凋亡过度与其G1/S低氧直接暴露密切相关,其可能机制与NaCN化学性低氧介导的S期HSP27和HSP70的脱磷酸化有关。; 沈青杨欣伟汪清陈威王汉民孙世仁刘宏宝; 关键词：细胞凋亡肾小管上皮细胞低氧暴露细胞凋亡肾小管上皮细胞 S期 ATP含量反相高效液相法

人肾小管上皮细胞血清饥饿法同步化方法的研究被引量：12: 2007年; 目的:探讨采用血清饥饿法建立将人肾小管上皮细胞(HKC)的同步化方法。方法:将HKC分为6个不同低血清浓度组及对照组,分别采用胎牛血清浓度为0、1、2、3、4、5和100 mL/L的DMEM培养液培养24 h。根据流式细胞术结果选择的最佳同步化HKC的胎牛血清浓度。将HKC的同步化处理时间分别延长为24 h、48 h和72 h,选择最佳同步化时间。用MTT法绘制生长曲线观察血清饥饿处理对HKC生长的影响。采用免疫细胞化学方法验证血清饥饿同步化处理HKC的效果。结果:选择无血清(0 mL/L)和1 mL/L为HKC最佳同步化的胎牛血清浓度,选择48 h为HKC同步化最佳时间。细胞生长曲线表明采用1 mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养48 h后恢复正常培养的HKC细胞,其生长曲线更接近于正常培养的细胞。Brdu进一步证明,用1 mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养48 h可以使90%以上的HKC细胞处于G0/G1期。结论:用1 mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养48 h可获得90%以上的G0/G1期HKC。; 何丽洁王汉民杨桂涛陈光磊陈威杨东刘宏宝白淑蓉沈青; 关键词：肾小管上皮细胞同步化

多脏器功能衰竭并急性肾衰竭的若干临床问题被引量：2: 2009年; 急性肾衰竭是危重疾病常见并发症，约占危重病监护病房（ICU）疾病的25％，常常是多脏器功能衰竭的一部分。多脏器功能衰竭居高不下的病死率，促使人们不得不重新审视急性肾衰竭与多脏器功能衰竭之间关系的问题，多脏器功能衰竭并急性肾衰竭的诊疗策略以及ICU的合理模式和发展方向。; 沈青徐虹; 关键词：多器官功能障碍综合征急性肾损伤危重病监护病房

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国家自然科学基金(30470802)