北京市科委科技计划项目(D0906003040591)
- 作品数：8 被引量：16H指数：2
- 相关作者：吴昊陈德喜石英代丽丽吴亚松更多>>
- 相关机构：首都医科大学附属北京佑安医院更多>>
- 发文基金：北京市科委科技计划项目国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人类CC3配体样蛋白1在果蝇Schneicier-2细胞的表达和活性分析
- 2007年
- 目的对HIV-1辅助受体趋化因子受体5(CCR5)配体人类CC3配体样蛋白1 (CCL3L1)进行果蝇Schneider-2细胞融合蛋白表达,纯化后活性分析。方法克隆人类CCL3L1 cDNA,构建CCL3L1表达载体pMT/BiP/His,获得Schneider-2果蝇细胞表达的His-CCL3L1融合蛋白,同时克隆pCDNA3.1-flag-CCR5表达载体,培养稳定表达flag-CCR5的细胞株,检测表达人趋化因子CCL3L1活性。结果成功构建人趋化因子CCL3L1融合蛋白真核表达载体pMT/BiP/His,表达并纯化出融合蛋白His-CCL3L1。免疫沉淀法和Western印迹法分析发现,纯化的His-CCL3L1蛋白能特异性结合CCR5受体,His-CCL3L1蛋白在浓度1～50 nmol/L存在剂量依赖性,50～100 nmol/L无剂量依赖性。结论果蝇Schneider-2细胞表达的His-CCL3L1蛋白具有与天然CCL3L1相同的生物学活性,为进一步探讨CCL3L1影响HIV-1感染的机制奠定了基础。
- 徐斌石英李俊红张薇吴昊陈德喜
- 关键词：CCL3L1HIV-1趋化因子类果蝇属
- 1型HIV感染多重PCR检测方法的建立及临床应用被引量：3
- 2010年
- 目的建立检测人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的多重巢式PCR(nPCR)和多重反转录PCR(RT-PCR)方法。将其与已经上市的NASBA法试剂盒进行检测敏感性比较;探讨血浆RNA水平对PCR检测敏感性的影响;评价该方法用于我国HIV-1感染者诊断的价值。方法针对HIV-1的gag、pol和gp41区设计3套引物,建立检测HIV DNA的多重nPCR和检测HIVRNA的多重RT-PCR方法;分别以建立的PCR方法和NASBA法对119例HIV阳性患者进行检测,比较2者的检测敏感性;将患者分为不同的病毒载量组,比较PCR方法在各组患者中的检测敏感性差异;使用建立的PCR方法对10例可疑急性感染者进行检测;扩增HIV-1膜区C2-C3段,对nPCR检测阳性的43例DNA样本进行亚型鉴定。结果多重nPCR的检测敏感度为97.5%(116/119),多重RT-PCR的敏感度为78.2%(93/119),2者的特异度均为100%(50/50),多重nPCR和多重RT-PCR的阳性预测值分别为97.5%(116/119)和78.2%(93/119),阴性预测值均为100%(50/50),准确性分别为98.2%和84.6%。经比较,多重nPCR和多重RT-PCR的检测敏感度都高于NASBA法。在病毒载量<103copy/mL的患者,nPCR的检测敏感性高于RT-PCR,在病毒载量在(103～104)copy/mL的患者及病毒载量≥104copy/mL的患者,2者的敏感性比较相近,均接近100%;检测的10例可疑急性感染者中,有5例患者的nPCR和RT-PCR检测结果阳性,抗体在随访过程中阳转,证实为HIV急性感染者;检测的43例DNA样本分属于B’亚型(37例),AE亚型(5例)和BC亚型(1例)。结论本课题组建立的PCR检测方法可以对我国主要流行的B’、AE和BC亚型病毒株得到很好的扩增效果;nPCR的检测敏感性受血浆RNA水平的影响相对较小,RT-PCR的检测敏感性受血浆RNA水平的影响相对较大;PCR方法可以用于HIV急性感染者的早期诊断。
- 代丽丽陈德喜石英魏飞力刘志英张洪海吴亚松梁连春吴昊张彤
- 关键词：人类免疫缺陷病毒核酸检测聚合酶链式反应
- 1型HIV感染多重PCR检测方法的建立被引量：1
- 2009年
- 目的建立检测人免疫缺陷病毒1型（HIV-1）的多重巢式PCR（nPCR）和多重逆转录PCR（RT-PCR）方法。方法针对HIV-1的gag、pol和gp41区设计3套引物，分别建立检测HIV DNA的多重nPCR和检测HIV RNA的多重RT—PCR方法；以建立的PCR方法对150例HIV抗体阳性患者及50例阴性患者进行检测，以ELISA／免疫印迹实验（Westen blot，WB）相结合的抗体检测结果（ELISA／WB）为金标准，计算所建立的PCR方法的检测敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确性、可重复性；分别用建立的多重nPCR和多重RT-PCR检测73份阳性标本，并与HIV-1核酸序列扩增技术（NASBA法）进行检测敏感度的比较；对43份检测阳性的DNA标本进行亚型鉴定。结果多重nPCR的检测敏感度为98．0％（147／150），多重RT—PCR的敏感度为91．3％（137／150），2种方法的特异度均为100％（50／50），多重nPCR和多重RT—PCR的阳性预测值分别为98．0％（147／150）和91．3％（137／150），阴性预测值均为100％（50／50），准确性分别为98．5％和93．5％。可重复性分别为96．7％（87／90）和93．3％（84／90）；多重nPCR的检测敏感度（97．3％）高于NASBA法（72．6％），差异有统计学意义（X^2=17．34，P〈0．01），多重RT—PCR的检测敏感度（79．5％）与NASBA法相比，差异无统计学意Y-（X。=0．94，P=0．332）；检测的43份HIV DNA阳性标本分别为37份B’亚型、5份AE亚型和1份BC亚型。结论成功地建立了多重nPCR和多重RT—PCR方法，操作简便、价格低廉，具有较高的敏感度和特异度和可重复性，能覆盖我国最主要的流行病毒株。
- 代丽丽陈德喜石英魏飞力绳波吴亚松柳雅立张洪海梁连春张彤吴昊
- 关键词：HIV感染HIV-1聚合酶链反应逆转录聚合酶链反应
- bDNA和NASBA法定量检测HIV-1病毒载量的比较研究被引量：8
- 2007年
- 目的比较分支DNA杂交实验(branched DNA,bDNA)和核酸序列扩增实验(Nucleic acid sequence-based am-plification,NASBA)两种方法检测人类免疫缺陷病毒1型病毒(HIV-1)病毒载量间的一致性。方法对25例HIV感染者/艾滋病(Acquired immune deficiency syndrome,AIDS)患者血浆标本同时用bDNA法和NASBA法检测HIV-1病毒载量,并用流式细胞术检测患者外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞。结果bDNA法及NASBA法测得HIV-1病毒载量平均值分别为(4.398±0.580)log拷贝数/ml和(4.488±0.602)log拷贝数/ml,差异无统计学意义(t=1.210,P>0.05);两种方法检测出的病毒载量呈显著直线相关(r=0.8004,P<0.001),且与患者的CD4+T细胞数及CD4+/CD8+比值均呈显著直线负相关。结论bDNA法和NASBA法检测HIV-1病毒载量具有高度一致性,在实际工作中均可选用。
- 郭秋艳黄晓婕代丽丽汪习成魏飞力计云霞石英夏伟郭彩萍吴亚松张彤陈德喜吴昊
- 关键词：HIV病毒载量
- 人趋化因子CCL3L1融合蛋白表达和活性分析
- 2007年
- 目的人趋化因子CCL3L1进行融合蛋白原核表达和真核表达,纯化后活性分析。方法克隆人类CCL3L1 cDNA,构建两种CCL3L1表达载体,获得两个CCL3L1融合蛋白,一个在BL21大肠杆菌表达的GST-CCL3L1融合蛋白,另一个在S2果蝇细胞表达的His-CCL3L1融合蛋白。同时克隆了pcDNA3.1-flag-CCR5表达载体,培养了稳定表达flag-CCR5的细胞株,进行人趋化因子CCL3L1活性分析。结果成功构建人趋化因子CCL3L1融合蛋白原核表达载体pGEX-4T和真核表达载体pMT/ BiP/V5-His,免疫沉淀法检测和Western blot法分析His-CCL3L1蛋白在浓度1nmol/L到50 nmol/L存在剂量依赖性,浓度50 nmol/L到100 nmol/L没有剂量依赖性。纯化的His-CCL3L1蛋白能特异性结合CCR5受体。结论成功表达了融合蛋白GST-CCL3L1和His-CCL3L1,果蝇细胞表达的His-CCL3L1蛋白具有与天然CCL3L1相同的生物学活性,为进一步制备CCL3L1单克隆和多克隆抗体及研究CCL3L1影响HIV-1感染的机制提供基础资料。
- 徐斌石英李俊红张薇赵国庆陈德喜吴昊
- 关键词：CCL3L1HIVCCR5趋化因子
- 慢性HIV／AIDS患者T淋巴细胞凋亡与疾病进展关系的研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨慢性未经抗病毒治疗的HIV／AIDS患者T淋巴细胞及各亚群凋亡与疾病进展的相关性。方法以36例慢性未经抗病毒治疗的HIV／AIDS患者为研究对象，根据CIM细胞计数分为3组：〈200个／μl组，200～350个／μl组，〉350个／μl组，同时选取16例健康志愿者作对照，分离外周血单核细胞（PBMC）后，采用C1M5RO及CD27标记T细胞亚群，AnnexinV标记细胞凋产，用流式细胞仪检测各项指标。其中4例患者及4例健康志愿者的PBMC在体外培养，比较分析体外培养0、3、6、12、24h不同时间点T细胞凋亡的变化情况。结果（1）HIV／AIDS患者CD4^＋、CD8^＋T细胞及各亚群上AnnexinV表达百分比均显著高于健康人（P〈0．05），但3组患者之间比较差异无统计学意义（P〉0．05）；（2）HIV／AIDS患者CD4^＋、CD8^＋T细胞及各亚群上AnnexinV表达百分比与CD4^＋T细胞计数及病毒载量均无显著相关性（P〉0．05）；（3）随着体外细胞培养时间的延长，HIV／AIDS患者CD4^＋T细胞的凋亡及死亡细胞百分比均显著高于健康人（P〈0．05），并且HIV／A1DS患者CD4^＋T细胞较CD8^＋T细胞更易发生凋亡和死亡。结论HIV／AIDS患者的T细胞凋亡水平显著高于健康人，并且CD4^＋T细胞较CD8^＋T细胞更易发生凋亡和死亡，但是T细胞凋亡水平与HIV的疾病进展程度并没有相关性。
- 彭巧丽李海英田亚坤曹振环张彤陈新月吴昊
- 关键词：HIV-1T淋巴细胞细胞凋亡
- 北京市男男性接触HIV-1感染者膜蛋白基因序列测定及亚型分析被引量：2
- 2009年
- 目的了解北京市男男性接触人群（MSM）中HIV-1的最新流行趋势及膜蛋白v3环序列特征。方法巢式聚合酶链式反应（n．PCR）扩增2007年提取的北京市男男性接触HIV感染者基因组DNA样品，对膜蛋白基因c2-v3区测序，进行病毒亚型及v3环序列特点分析。结果11例样本中，4例是欧美B亚型，5例是AE重组亚型，1例是Bc重组亚型，1例是01B重组亚型。v3环顶端四肽以GPGQ和GPGR为主。结论北京市男男性接触HIV-1感染者中重组亚型呈蔓延流行趋势。
- 张洪海孙玉柳雅立吴亚松代丽丽吴昊陈德喜
- 关键词：HIV-1性传播性疾病
- 32例有偿献血感染者HIV-1膜区序列测定及V3环氨基酸变异特点分析被引量：1
- 2008年
- 目的了解我国有偿献血人群中HIV-1B’亚型流行株的膜蛋白v3环序列特征。方法巢式PCR扩增前病毒DNAc2-c3区后测序，进行病毒亚型鉴定和V3环序列特点分析。结果所检的32个HIV-1B’亚型株v3环顶端四肽有五种形式。AIDS组与无症状感染组相比前者呈现更多的T/SI型毒株V3环变异特点。结论我国有偿献血人群中HIV-1B’亚型流行株V3环顶端四肽有多种形式。处于病程不同时期的患者体内病毒V3区呈现不同的氨基酸变异特点和电荷积累趋势，提示可能具有不同的生物学表型特征。
- 代丽丽鲁俊峰黄晓婕石英陈德喜吴昊
- 关键词：HIV-1基因型生物学表型
