国家重点基础研究发展计划(2004CB719604)
- 作品数：51 被引量：334H指数：10
- 相关作者：秦广雍李宗伟李宗义陈林海李培睿更多>>
- 相关机构：郑州大学河南师范大学浙江大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学环境科学与工程轻工技术与工程化学工程更多>>
- 脉冲场凝胶电泳技术及应用被引量：8
- 2008年
- 脉冲场凝胶电泳(PFGE)是一种重要的用于分离大分子量线状DNA的电泳技术。介绍了PFGE的基本原理、方法、影响因素,并对其在微生物分子分型、DNA辐射损伤修复、细胞凋亡和转基因技术等研究方面的应用作了简要的综述。
- 邵化常胜合田双起王雁萍李宗伟秦广雍
- 关键词：脉冲电泳分子分型细胞凋亡转基因
- 利用遗传算法优化透明质酸发酵培养基被引量：2
- 2006年
- 运用遗传算法对透明质酸（HA）产生菌——马链球菌兽瘟亚种ATCC39920发酵培养基的6种组份进行了优化研究。每个长度为36位的染色体编码一种培养基配方，以HA产量为适应度函数值对其进行评价。经过4代的进化，各参数的取值范围收敛于最优区域。最终以40个实验样本完成了6种培养基成分、64个浓度水平的优化选择。优化后的培养基的构成为：葡萄糖44．0g／L，酵母膏5．2g／L，蛋白胨8．4g／L，牛肉膏9．8g／L，KH2PO4 1．45g／L，MgSO4 2．8g／L。采用优化培养基的HA产量达0．395g／L，较原培养基提高了31．2％，生产成本也大幅度降低。
- 刘屹然陈林海刘瑞娟李宗义秦广雍
- 关键词：透明质酸遗传算法培养基优化
- 耐辐射球菌基因DRB0099缺失突变株的构建及逆境分析被引量：3
- 2008年
- 耐辐射球菌(Deinococcus radiodurans R1)有着极强的辐射抗性。研究其抗辐射的机理对于处理放射性废料有着潜在的应用价值。在耐辐射球菌的基因组中,许多序列的功能未知。其中DRB0099尤为引人注意。将DRB0099缺失突变构建该基因的突变株。对野生型和突变体进行比较后发现,在正常生长条件下的前期阶段(0～16h),突变体生长速度比野生型慢。16h以后,野生型逐渐进入稳定生长期。这时,突变株的生长速度高于野生型。但是,野生型的浓度一直高于突变株。表明在DRB0099被删除后,耐辐射球菌的生长可能受到了阻滞。在紫外线照射的条件下,尽管野生型随着照射剂量的增加,存活率越来越低,但是要比突变体高许多。野生型具有比突变体更强的修复DNA双链断裂的能力。DRB0099可能直接参与了对DNA的修复。突变体对H2O2的敏感程度高于野生型,表明野生型耐辐射球菌在对抗活性氧保护其蛋白质、DNA或者DNA修复方面具有比突变体更强的功能。在低浓度H2O2处理条件下,尽管野生型和突变体的存活率都出现下降趋势,但二者的差值并不大。随着H2O2剂量的增加,二者的差值越来越大。表明随着活性氧浓度的增加,蛋白质和DNA损伤的数量增加,失去DRB0099基因功能的突变体比野生型更容易受到损伤。在紫外线照射处理或者H2O2处理条件下,DRB0099能够保护蛋白质和DNA。
- 常胜合舒海燕陆辉明华跃进李宗伟田双起王雁萍陈林海谈重芳秦广雍
- 关键词：突变株
- 泉古菌Sulfolobus tokodaii RadA同系物stRad55B与RadA的共表达及其对RadA重组活性的抑制
- 2008年
- ST0838(定义为stRad55B)是超嗜热古菌(Sulfolobus tokodaii)编码的4个RadA的同系物(或Rad55同源蛋白)之一.研究发现,它能够被紫外线(UV)辐射损伤诱导,可能参与了细胞内的DNA损伤修复过程,然而利用常规方法,该蛋白不能体外可溶性地表达.通过和RadA共表达,得到了具有热稳定性的可溶stRad55B蛋白,并对其活性进行了初步检测.stRad55B优先结合单链DNA,并且具有不依赖DNA的ATP酶活性.另外,DNA链交换实验发现stRad55B能够明显抑制RadA催化的链重组活性,表现出一个重组修复系统抑制蛋白的特征.实验结果为进一步研究古菌中RadA同系蛋白的功能以及相互作用机制,揭示古菌DNA同源重组修复机理提供了依据.
- 盛多红李铭峰焦建东倪金凤申玉龙
- 关键词：古菌RADA共表达
- 改良纸层析法测定发酶液中异亮氨酸的含量被引量：6
- 2009年
- 传统的氨基酸纸层析法是以特制的滤纸为支持物,用特殊配方的溶剂混合液作展层剂,然后喷刷显色剂茚三酮,烘烤显色,展层与显色分开操作,给实验带来不便。本文对把显色剂直接加到展层剂中进行了研究,用该方法定量测定了发酵液中的异亮氨酸含量。实验表明:改良后的纸层析法简化了操作,节约试剂,测定L-异亮氨酸含量具有较高的准确度和精密度,适合在L-异亮氨酸生产中应用。
- 丁晓兵李宗伟杨转琴丁爱珍秦广雍
- 关键词：异亮氨酸精密度
- 耐辐射球菌DNA修复开关基因pprI缺陷性突变和功能补偿性突变株的建立被引量：5
- 2005年
- PprI是近来在耐辐射球菌Deinococcus,radiodurans中发现的一个极其重要的DNA修复开关基因.以已测序的野生型菌株R1为材料,运用PCR突变法将克隆具有自身GroEL启动子和卡那霉素抗性基因的DNA片段反向重组到pprI基因中去,首次获得了卡那霉素抗性的、pprI功能完全破坏的突变株YR1.辐射细胞生存率结果表明,YR1对辐射异常敏感.另外,将含有GroEL启动子和卡那霉素抗性基因的DNA片段重组到质粒pRADZ3中,获得了具有卡那霉素抗性的表达质粒pRADK;再将体外克隆的具有pprI完整基因和C-末端结构域截短的PprI蛋白基因片段分别重组到pRADK中.研究结果表明,含有pprI完整基因的表达质粒在YR1中能够正常表达,并完全恢复到野生型的极端抗性;而C-末端结构域截短的PprI蛋白基因片段虽能在YR1中正常表达,但对辐射异常敏感,不能恢复其极端抗性.上述pprI基因功能缺陷性和功能补偿性突变株的建立,为深入研究细胞体内PprI蛋白质的定位、结构域与功能的关系,以及原位研究PprI蛋白质的理化特性提供了十分有效的方法.
- 高冠军陆辉明黄丽芬华跃进
- 关键词：性基因DNA修复卡那霉素抗性耐辐射球菌
- 琼脂扩散法测定乳链菌肽效价的优化被引量：38
- 2007年
- 对影响琼脂扩散法测定乳链菌肽效价的四个主要因素:琼脂浓度、Tween20、培养温度、预培养进行了研究。结果表明,0.75%琼脂的效价检测培养基、0.5% Tween20的添加以及30℃培养条件,可提高乳链菌肽效价测定的灵敏度和精确性;4℃预培养有利于乳链菌肽在琼脂中的扩散。
- 张国只陈林海杨天佑陈洪卫王利敏段宇珩秦广雍
- 关键词：乳链菌肽琼脂扩散预培养
- 餐饮废水蛋白降解菌株的紫外诱变选育被引量：1
- 2010年
- 以巨大芽孢杆菌D-4作为出发菌株,通过紫外线诱变和突变菌株性能测定,选育出1株高效降解蛋白的优良菌株。与出发菌株相比,突变株明显缩短了生长周期和发酵周期,提高了降解蛋白水平。
- 杨转琴李宗伟刘伟丁晓兵秦广雍
- 关键词：餐饮废水紫外线诱变突变株
- 凝胶电泳蛋白质染色方法研究进展被引量：10
- 2006年
- 蛋白质条带染色是蛋白质凝胶电泳中一个重要的步骤。目前的方法主要有考马斯亮兰染色、银染、荧光染色、负染等。将考马斯亮兰与BBR相结合进行染色,可以减少染色/脱色的次数,能够提高考马斯亮兰在蛋白质条带上的染色效果。Gallyas Intensifying方法与银染相结合,能提高用银染已经检测到的蛋白质条带的亮度,使蛋白质点之间及其与背景之间更容易区分。将银染与考马斯亮兰结合起来进行染色可以提高同一块胶上微量蛋白质检测灵敏度。目前,对染色方法改进主要集中在如何提高蛋白质染色的灵敏度,操作方便与否,费用是否昂贵等方面。如何在保持银染方法高灵敏度的同时,又能够有效地降低染色背景,用无毒的化学物质去替换现在凝胶电泳中常用的有毒物质,克服荧光染色使蛋白质化学性质改变的缺点,在保持负染不修饰蛋白质条带化学性质优势的同时,对蛋白质条带染色结果加以改善等,可能代表了蛋白质条带染色的未来发展方向。
- 常胜合舒海燕秦广雍李宗伟李宗义王雁萍杨天佑陈林海
- 关键词：SDS-PAGE染色
- 生物絮凝剂产生菌的N^＋注入诱变选育及其培养条件研究
- 2008年
- 为获得高絮凝活性菌株,采用低能氮离子诱变方法,对生物絮凝剂产生菌FJ-7进行诱变选育,筛选得到一株絮凝活性高、遗传稳定性良好的突变株 NIM-192。发酵产絮凝剂曲线表明,其菌体生长速度稍慢于原始菌株,但絮凝活性一直高于原始菌株,絮凝率比原始菌株提高了34.26%。进一步研究表明,蔗糖、葡萄糖、半乳糖是NIM.192产生絮凝剂的适宜碳源,酵母膏:尿素为1:1的混合氮源为最佳氮源,培养基起始 pH 为7～9时,发酵液的絮凝效果最好。
- 李培睿张东辉李宗伟李宗义秦广雍霍裕平
- 关键词：N^+注入生物絮凝剂生物絮凝剂产生菌诱变选育絮凝活性
