辽宁省教育厅基金(20060519)
- 作品数：2 被引量：9H指数：2
- 相关作者：尹波侯续伟任甫徐国昌更多>>
- 相关机构：辽宁医学院辽宁医学院附属第一医院建平县医院更多>>
- 发文基金：辽宁省教育厅基金辽宁省科技厅科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- SD大鼠胰岛的分离纯化及培养被引量：6
- 2011年
- 目的探讨分离纯化大鼠胰岛素分泌细胞的方法,并评价细胞的生物学特性。方法选用3～4周龄健康成年SD大鼠,常规外科手术显露SD大鼠胰腺和胆总管,在胆总管内插入4.5～5号头皮针后固定,逆行注入预冷的0.5mg/ml的胶原酶V溶液8～10ml,使胰腺膨胀后迅速取出胰腺放入6mlHanks液中38℃消化10min,用含10%胎牛血清的Hanks液终止消化,60目筛网过滤后用Ficoll400非连续梯度离心纯化胰岛。纯化后的细胞用DTZ染色和胰岛素释放试验来分析胰岛素的分泌情况。结果 DTZ染色后β细胞胞浆着色,为均一的猩红色。胰岛细胞分布于Ficoll400浓度为23%～20%和20%～11%的界面之间,纯度高达90%,并且细胞的胰岛素分泌情况良好。结论胶原酶V消化,Ficoll400纯化是一种简单高效的胰岛素分泌细胞分离纯化的方法,可以获取数量多,活性和纯度好的胰岛素分泌细胞。
- 侯续伟尹波任甫
- 关键词：Β细胞胰岛素SD大鼠
- 端粒酶转染大鼠胰岛素分泌细胞建立的永生化细胞系被引量：3
- 2009年
- 背景:在前期DNA重组技术构建端粒酶反转录酶基因真核表达的质粒、端粒酶反转录酶基因基因转染大鼠胰岛素分泌细胞的基础上,得到永生化的胰岛素分泌细胞系,建立了稳定一致的细胞模型。目的:端粒酶转染健康成年SD大鼠的胰岛素分泌细胞,建立均一稳定的胰岛素分泌细胞系,为临床胰岛素分泌细胞移植治疗糖尿病奠定实验基础。设计、时间及单位:动物实验观察,2007-02/05在辽宁医学院人类学研究所完成。材料:健康成年SD大鼠20只,取其胰岛细胞的分离、纯化、培养及鉴定。方法:原代培养健康成年SD大鼠的胰岛素分泌细胞,采用Ⅴ型胶原酶消化和Ficoll400纯化液纯化。经双硫腙染色和高效液相色谱分离及质谱分析的方法对分离得到的胰岛素分泌细胞进行检测。采用含有端粒酶反转录酶基因的载体转染大鼠胰岛素分泌细胞,经G418筛选后得到阳性细胞克隆,并在体外进行连续的传代培养。应用RT-PCR方法检测hTERT基因在细胞中的整合和表达情况,同时用高效液相色谱分离法对转染后的细胞分泌胰岛素的功能进行检测。主要观察指标:①胰岛细胞在经过端粒酶反转录酶基因转染前后的细胞生长情况。②转染后的细胞在体外的传代培养情况。③细胞的胰岛素分泌情况。结果:端粒酶反转录酶基因转染后细胞与未转染的细胞对比活力良好并且仍有分泌胰岛素的功能,可在体外连续的进行传代培养(目前已传至第15代,仍在进一步传代培养中),同时外源性的hTERT基因在转染后的胰岛素分泌细胞中有稳定的整合并表达。结论:转染后的细胞具有分泌胰岛素的功能并可以在体外连续传代培养,端粒酶反转录酶基因在胰岛素分泌细胞中稳定的整合并表达,胰岛素分泌细胞的永生化细胞系基本建立。
- 任甫侯续伟徐国昌尹波
- 关键词：端粒酶转染胰岛细胞永生化
