浙江省重大科技专项基金(2010C03005)
- 作品数：2 被引量：3H指数：2
- 相关作者：唐彩华李剑波罗永能朱赟毛子旭更多>>
- 相关机构：浙江省医学科学院更多>>
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- 肠道病毒71疫苗候选株H3-TY的遗传稳定性研究被引量：2
- 2011年
- 目的了解肠道病毒71（E、，71）疫苗候选株H3-TY的遗传稳定性。方法选取EV71疫苗候选株H3-TY种子库中的6个子代病毒，提取RNA，对其VPl基因进行RT-PCR扩增、克隆、序列测定，然后对所获基因序列进行同源性分析并计算同源率。结果H3．TY的6个子代病毒VPl基因之间核苷酸同源性介于99．6％～99．8％，氨基酸同源性为100．0％，主要抗原决定簇的氨基酸序列完全一致。结论H3．rIIY种子库中6代病毒的VP1基因之间高度同源，主要抗原决定簇稳定遗传。
- 唐彩华周康凤高丽美朱莲毛子旭毛江森
- 关键词：疫苗
- 肠道病毒71型衣壳蛋白VP1的原核表达和纯化及其抗原性和免疫原性的验证被引量：2
- 2013年
- 目的 探究利用大肠埃希菌原核表达系统表达的肠道病毒71型（EV71）衣壳蛋白VP1的抗原性和免疫原性.方法 将EV71 H3-TY株的VP1基因通过PCR扩增,并引入Nde Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点,定向克隆至pET44a-EV71 VP1表达载体,转化大肠埃希菌BL21（DE3）,并用IPTG诱导VP1的表达.然后将表达的重组VP1 （rVP1）经超声、离心和Ni-NTA亲和层析柱纯化并透析复性,用Western免疫印迹法和先前建立的夹心ELISA等方法检测其抗原活性,同时用rVP1免疫兔子并通过测定其诱导的特异性抗体水平来确定其免疫原性.结果 rVP1在大肠埃希菌中主要表达于包涵体中,但能被顺利且有效地纯化和复性.SDS-PAGE显示表达的rVP1相对分子质量约为34 000,与预期大小相符.纯化的rVP1可分别与兔抗EV71多克隆抗体、大鼠抗EV71 VP1单克隆抗体（单抗）和小鼠抗EV71 VP1单抗进行特异性免疫应答.rVP1免疫兔诱导产生的特异性抗体效价高达729 000,高于本底效价,且差异有统计学意义（t=2.646,P＜0.01）.结论 EV71 VP1在大肠埃希菌原核表达系统中得以成功表达,纯化的rVP1具有良好的抗原活性和免疫原性.
- 朱赟李剑波高孟唐彩华罗永能
- 关键词：肠道病毒感染衣壳蛋白原核表达
