国家自然科学基金(30270627)
- 作品数：10 被引量：28H指数：3
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- 脂肪分化相关蛋白真核表达载体的构建及其对H9c2心肌细胞增殖和凋亡的影响
- 2011年
- 目的:构建编码脂肪分化相关蛋白(adipose differentiation-related protein,ADRP)基因全长序列的真核表达载体,探讨ADRP过表达对软脂酸诱导的H9c2心肌细胞凋亡有何影响。方法:(1)RT-PCR扩增编码ADRP全长的DNA序列,重组入pEGFP-C1质粒表达载体中,酶切、测序鉴定后转化大肠埃希菌DH5α,挑取阳性克隆,扩增后提取质粒并进行鉴定;采用脂质体转染法将鉴定后的重组质粒稳定转染H9c2心肌细胞;荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白表达情况;RT-qPCR和Western blotting检测ADRP表达情况;(2)采用MTT比色法和流式细胞术检测不同浓度软脂酸对细胞增殖和凋亡的影响。结果:(1)成功构建了真核质粒表达载体pEGFP-C1-ADRP,转染H9c2细胞后,荧光显微镜下观察发现细胞内有绿色荧光蛋白表达;RT-qPCR和Western blotting显示重组质粒转染H9c2细胞ADRP mRNA和蛋白表达水平明显高于空质粒转染组和正常对照组(P<0.01);(2)经不同软脂酸刺激后,重组质粒转染H9c2细胞增殖抑制率和凋亡率均明显低于空质粒转染组和正常对照组(P<0.05)。结论:(1)成功获得了稳定表达ADRP的H9c2心肌细胞株;(2)软脂酸可抑制H9c2心肌细胞增殖并可诱导其凋亡,而ADRP高表达可对抗软脂酸的这一作用,表明ADRP对高脂环境中心肌细胞可能具有一定的保护作用。
- 鲍苑苑方舟周丽诺胡仁明丁薇
- 关键词：H9C2细胞棕榈酸细胞凋亡
- 磷脂酰肌醇3激酶调节亚基P85α在自发性糖尿病大鼠心肌中表达下降被引量：4
- 2009年
- 目的探讨糖尿病晚期心肌病变的细胞分子机制。方法分别选用Otsuka Long-EvansTokushima Fatty(OLETF)和Long-Evans Tokushima Otsuka(LETO)大鼠作为实验组和对照组。基因芯片、实时定量PCR、Western blot法比较两组大鼠心肌磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)调节亚基P85α的表达。结果与LETO大鼠相比,OLETF大鼠血浆Ins下降(6.0±2.9 vs 52.6±7.5 mU/L,P<0.01),TG和TC增加(1.73±0.34 vs 0.48±0.08 mmol/L,P<0.01;4.41±0.21 vs 2.25±0.75 mmol/L,P<0.01),左心室内压舒张期下降速率(—dp/dt)降低30%(P<0.05)。基因芯片检测显示,OLETF大鼠心肌组织中P85α基因表达量仅为LETO大鼠的1/8。实时定量PCR和Western blot证实OLETF大鼠P85α基因在转录和翻译水平分别较LETO大鼠下降了81.5%(P<0.05)和43.2%(P<0.01)。结论自发性糖尿病大鼠OLETF心肌组织P85α mRNA和蛋白表达水平显著下降与心肌收缩、舒张速率下降相关。
- 刘奎周丽诺王东张伟伟沈晓燕何岱琨吴晞董雪红杨叶虹鹿斌闻杰胡仁明
- 关键词：ALPHA自发性糖尿病大鼠
- 脂肪分化相关蛋白的生理功能及其与疾病的关系
- 2011年
- PAT家族蛋白是最主要的脂滴相关蛋白，与细胞内脂代谢密切相关。目前发现该家族包括5种蛋白，脂肪分化相关蛋白（ADRP）是其中的一员。与其他PAT家族蛋白相比，无论是在组织分布、分子结构还是生理功能上ADRP均有其独特之处，如它在脂肪细胞分化、肝脏甘油三酯蓄积、乳汁生成与分泌方面发挥重要的作用，ADRP的表达异常还可能与多种疾病的发生和发展有关，如脂肪肝、糖尿病、动脉粥样硬化、肿瘤等，可能为相关疾病提供新的诊断思路和治疗靶点。现就ADRP的结构、功能及其与疾病关系的研究进展作一综述。
- 鲍苑苑尚西亮周丽诺
- 关键词：脂滴脂肪分化相关蛋白脂代谢
- PI3-K对自发性糖尿病大鼠心肌细胞膜GLUT4含量的影响被引量：3
- 2008年
- 目的:探讨PI3-K在自发性糖尿病大鼠心肌细胞胰岛素抵抗中的作用。方法:①从大鼠心肌组织中抽提纯化总RNA,逆转录合成两组动物的cDNA及cRNA探针,与基因表达谱芯片杂交,扫描并分析统计;②分离培养大鼠心肌细胞,分别加入胰岛素及PI3-K特异性抑制剂LY294002,提取细胞膜蛋白,应用western-blot方法检测心肌细胞膜GLUT4含量的差异。结果:①PI3-K调节亚基基因下调表达达8倍,②胰岛素组应用LY294002后,细胞膜GLUT4表达量仅为抑制前的11.16%。结论:自发性糖尿病大鼠心肌存在胰岛素利用障碍,其关键部位在于PI3-K。
- 王东周丽诺张伟伟任惠明胡仁明
- 关键词：PI3-K心肌细胞GLUT4糖尿病
- 自发性糖尿病大鼠心肌物质代谢及细胞增殖相关基因的表达谱研究被引量：1
- 2007年
- 目的研究自发性糖尿病(OLETF)大鼠发生心肌病变后基因表达谱的改变。方法①检测糖尿病大鼠与对照组大鼠的心室压,并比较两者的电镜标本;②从心肌组织中抽提纯化总RNA,逆转录合成两组动物的cDNA及cRNA探针,与基因表达谱芯片杂交,扫描并分析统计。结果①糖尿病大鼠的-dp/dtmax,左室内压峰值明显小于对照组,EDP明显高于对照组;电镜提示糖尿病大鼠存在心肌肌纤维扭曲断裂,线粒体变性,间质增生及血管基底膜增厚;②糖尿病大鼠心肌中调控细胞增殖分化基因上调表达;胰岛素信号通路PI3K调节亚基基因及部分参与糖、脂代谢基因的表达明显下调。结论糖尿病大鼠存在心肌超微结构改变和心肌舒张功能下降,表达谱中PI3K调节亚基及物质代谢、细胞增殖相关基因表达异常。
- 王东张伟伟周丽诺钟慈声胡仁明
- 关键词：糖尿病细胞增殖物质代谢
- 瘦素、胰岛素对OLETF大鼠心肌细胞GluT-4含量的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨瘦素、胰岛素与OLETF大鼠心肌胰岛素抵抗的关系。方法培养的12例大鼠心肌细胞分为11组,Western-blot方法检测不同浓度胰岛素、瘦素刺激不同时间葡萄糖转运子4(GLUT-4)转位效应的差异。结果瘦素和胰岛素促进GluT-4转位作用分别增加了2.28、3.14、3.07、9.06倍。胰岛素促GluT-4转位最佳时间为30min,瘦素最大效应浓度为100nmol/L,最佳刺激时间为30、60min。在OLETF大鼠,联合组GluT-4转位小于单纯胰岛素组,胰岛素组促进GluT-4转位作用也仅为对照组的69%。P均<0.05。结论胰岛素和瘦素均促进GluT-4转位,呈时间剂量依赖性;OLEFT大鼠心肌细胞存在胰岛素作用障碍,且瘦素与胰岛素联合应用可影响胰岛素的作用。
- 王东任惠明张伟伟周丽诺胡仁明
- 关键词：胰岛素瘦素心肌细胞葡萄糖转运子4
- STZ糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及葡萄糖、血管紧张素Ⅱ、瘦素对心肌细胞凋亡影响的观察被引量：13
- 2005年
- 目的 观察链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠心肌细胞凋亡情况及葡萄糖、血管紧张素Ⅱ、瘦素对正常SD大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法 主动脉插管逆行灌流分离培养STZ糖尿病大鼠和正常SD大鼠心肌细胞,通过Annexin V FITC +PI双染法,采用流式细胞术,检测细胞凋亡情况,并运用细胞免疫荧光染色法检测心肌细胞膜瘦素受体的表达。结果 (1)STZ糖尿病大鼠心肌细胞凋亡较对照组明显增高(P <0 .0 1) ;(2 )在体外培养条件下,血管紧张素Ⅱ、瘦素使心肌细胞凋亡明显增加,且与浓度相关,差异均有显著性(P <0 .0 1) ,在葡萄糖5 .6、2 5mmol/L的培养环境中,心肌细胞凋亡变化不明显(P >0 .0 5 ) ;(3)细胞免疫荧光染色检测瘦素受体表达,在荧光显微镜下可见到心肌细胞膜呈现绿色荧光。结论 STZ糖尿病大鼠的心肌细胞凋亡增高;在体外培养条件下,血管紧张素Ⅱ、瘦素可促进SD大鼠心肌细胞凋亡,且与浓度相关,增加培养环境中的葡萄糖浓度,对SD大鼠心肌细胞的凋亡无明显影响,而瘦素可能通过与心肌细胞膜上瘦素受体结合而发挥作用。
- 翟迎九董雪红周丽诺胡仁明
- 关键词：心肌细胞凋亡瘦素糖尿病
- 脂肪分化相关蛋白对软脂酸诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:构建编码脂肪分化相关蛋白(ADRP)基因全长序列的真核表达载体,探讨ADRP过表达对软脂酸诱导的H9 c2心肌细胞凋亡有何影响。方法:(1)采用PCR的方法,以成年SD大鼠心肌cDNA为模板扩增编码ADRP全长的DNA序列,重组入pEGFP-C1质粒表达载体中,酶切、测序鉴定后转化大肠埃希菌DH5α,挑取阳性克隆,扩增后提取质粒,进行酶切和测序鉴定;(2)采用脂质体转染法将鉴定后的重组质粒转染H9 c2心肌细胞株,经G418筛选获得抗性细胞克隆后扩大培养;荧光显微镜观察细胞内绿色荧光蛋白报告基因表达情况;RT-qPCR和Western blot检测转染细胞与正常细胞ADRP mRNA和蛋白表达水平;(3)采用流式细胞术检测不同浓度软脂酸对上述细胞细胞凋亡率的影响。结果:(1)酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入表达质粒pEGFP-C1;(2)荧光显微镜观察细胞内有绿色荧光蛋白表达且传20代以上无消失;RT-qPCR和Western blot证明重组质粒转染H9 c2细胞ADRP mRNA和蛋白表达水平明显高于空质粒转染组和正常对照组(P<0.01);(3)经不同软脂酸刺激后,重组质粒转染H9 c2细胞凋亡率明显低于空质粒转染组和正常H9 c2细胞组(P<0.05)。结论:(1)成功构建了H9 c2细胞真核质粒表达载体pEGFP-C1-ADRP,获得了稳定表达ADRP基因的H9 c2心肌细胞株;(2)ADRP能够抑制软脂酸诱导的H9 c2心肌细胞凋亡,表明ADRP对高脂环境中心肌细胞可能具有一定的保护作用。
- 鲍苑苑方舟周丽诺胡仁明丁薇
- 关键词：脂肪分化相关蛋白H9C2心肌细胞软脂酸凋亡
- 氧化应激与糖尿病心肌细胞凋亡被引量：4
- 2009年
- 氧化应激是糖尿病重要的病理生理过程。氧化应激所导致的心肌细胞凋亡是糖尿病患者非缺血性心力衰竭发生的重要原因。线粒体功能障碍、NADH氧化酶异常以及晚期糖基化终末产物增加是心肌细胞活性氧簇的主要来源。产生的活性氧簇通过直接激活线粒体凋亡途径、肿瘤坏死因子（TNF）α激活死亡受体途径、P53凋亡途径以及p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）途径，促进心肌细胞凋亡。但是目前针对糖尿病心脏病的抗氧化治疗效果并不理想，因此有必要进一步研究氧化应激导致心肌细胞凋亡的机制，以发现治疗糖尿病心脏病的新方法。
- 刘奎周丽诺
- 关键词：氧化应激糖尿病心肌病心肌细胞细胞凋亡
- 成年SD大鼠心肌细胞的培养被引量：1
- 2005年
- 目的: 建立稳定的成年SD大鼠心肌细胞分离和培养的方法.方法: 主动脉插管逆行灌流分离成年SD大鼠心肌细胞,进行体外培养,并观察其形态的变化.结果: 刚分离的心肌细胞呈长杆状,表面有明显横纹,非同步博动,在含血清的培养环境中,细胞形态很快发生变化,出现去分化表现,在无血清的培养环境中,细胞保持刚分离时的在体形状, 2wk后细胞均明显萎缩.结论: 主动脉插管逆行灌流的方法是较为理想的成年SD大鼠心肌细胞分离与培养方法.
- 翟迎九董雪红周丽诺胡仁明
