国家自然科学基金(30572010)
- 作品数：25 被引量：73H指数：6
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- rhEPO对光损伤诱导的RPE细胞Bcl-2表达影响
- 2011年
- 目的研究重组人促红细胞生成素（rhEPO）对光损伤诱导的人视网膜色素上皮（RPE）细胞Bcl-2表达的影响及其作用机制。方法取成人ARPE-19细胞株传代培养的2-5代细胞建立光损伤模型,采用酶联免疫吸附实验和免疫组织化学方法检测不同浓度rhEPO干预治疗前后RPE细胞Bcl-2表达的变化;并添加特异性Jak2激酶抑制剂AG490,检测RPE细胞Bcl-2表达的变化。结果 rhEPO可明显增强RPE细胞光损伤后Bcl-2的表达,与光损伤模型组相比较,rhEPO各药物干预组细胞Bcl-2表达均增强,差异有显著意义（F=18.756,q=36.028~44.285,P〈0.01）,以40 kU/L rhEPO组作用最明显。而加入AG490后,rhEPO对Bcl-2的上调作用被明显阻断（q=42.171,P〈0.01）。结论 rhEPO可能是通过增强Bcl-2的表达而抑制光损伤诱导的人RPE细胞的凋亡,rhEPO上调Bcl-2的表达可能是通过Jak2 PIK3/PKB途径实现的。
- 陈召利孟岩牛膺筠
- 关键词：红细胞生成素光刺激基因,BCL-2
- 光损伤后Caspase-3在RPE的表达及EPO对其的影响被引量：3
- 2012年
- 众所周知,适量的光线对视觉的形成是非常必要的。相反,如果光线的强度、光照的时间等超过了视网膜的承受力,那么将会造成视网膜的光损伤。光损伤后视网膜成分的丢失可能涉及凋亡,而Caspase-3是细胞凋亡的的必经之路。
- 姜文静牛膺筠
- 关键词：色素上皮光损伤CASPASE-3红细胞生成素
- 促红细胞生成素对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用被引量：9
- 2006年
- 目的探讨促红细胞生成素对过氧化氢氧化损伤人视网膜色素上皮细胞的保护作用及其机制。方法采用600μmol.L-1的过氧化氢造成体外培养的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤模型。实验设计分为5组:对照组,过氧化氢模型组,过氧化氢+10 kIU.L-1EPO组,过氧化氢+20 kIU.L-1EPO组和过氧化氢+40 kIU.L-1EPO组。MTT法检测细胞活性,测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞法测定细胞的凋亡率。结果过氧化氢模型组RPE细胞的活性明显降低,不同浓度的EPO药物干预组的细胞活性较模型组明显升高,并随着EPO浓度的升高而升高。过氧化氢模型组RPE细胞SOD活性降低,MDA的含量增加;而EPO药物干预组SOD活性较模型组明显升高,MDA含量减少,差异有显著性。过氧化氢模型组RPE细胞的凋亡率升高,而不同浓度的EPO药物干预组降低RPE的凋亡率,凋亡率随着EPO浓度的升高而降低。结论促红细胞生成素对过氧化氢诱导的人RPE细胞的氧化损伤有保护作用,其机制可能与抑制氧化反应、提高抗氧化酶活性、减少细胞凋亡有关。
- 赵颖牛膺筠周占宇袁春燕张蕾黄琰霞
- 关键词：促红细胞生成素视网膜色素上皮细胞凋亡
- 促红细胞生成素对光损伤后视网膜色素上皮层基质金属蛋白酶表达的影响被引量：1
- 2012年
- 背景近年来，随着眼科光学诊疗器械和显微手术应用的增多，各种器械的光源所导致的视网膜损伤等问题倍受关注，研究视网膜光损伤可为临床治疗相关疾病提供参考。目的研究小鼠光损伤后视网膜色素上皮（RPE）层基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9表达的变化，探讨促红细胞生成素（EPO）对小鼠视网膜光损伤的治疗作用及其相关机制。方法将52只SPF级BALB／c小鼠采用抽签法随机分为正常对照组4只、单纯光照组24只和EPO预处理组24只，后两组小鼠在自制光照箱内用6000lx弥散白光照射4h以建立光损伤动物模型。单纯光照组接受6000lx白光照射4h，EPO预处理组小鼠腹腔注射rhEPO5000U／kg（商品单位）后，接受6000lx白光照射4h。光照后6、12、36、72、96h和7d采用免疫组织化学法检测各组小鼠RPE中MMP-2和MMP-9的表达。结果单纯光照组小鼠视网膜组织病理学改变出现早且明显，光照后RPE细胞出现不同程度的水肿和结构紊乱，且随着光照后时间的延长，形态异常的细胞数增加，但EPO预处理组在光照后7d未发现类似改变。免疫组织化学法检测显示，正常BALB／c小鼠RPE层MMP-2低表达，单纯光照36h后，RPE层可观察到大量MMP-2阳性表达细胞，但同一时间点EPO预处理组阳性表达量（A值）明显下降。3个组和不同时间点MMP-2的表达量差异均有统计学意义（F分组=3．68，P=0．04；F时间=9．13，P=0．00）。MMP-9免疫组织化学法检测显示，正常RPE层中未见MMP-9的阳性表达，单纯光照6h后，MMP-9开始表达，12h时达高峰并维持高表达状态，96h后表达量开始下降；EPO预处理组MMP-9表达趋势同单纯光照组，但各时间点MMP-9的表达量均较单纯光照组减少。3个组和不同时间点MMP-9的表达差异均有统计学意义（F分组==3．61，P=0．04；F时间=16．91，P=0．00）。结论MMP-2、MMP-9在视网膜光损伤过程中发挥着�
- 姜文静赵颖牛膺筠
- 关键词：视网膜色素上皮光损伤基质金属蛋白酶促红细胞生成素
- 内质网应激对光照诱导的人视网膜色素上皮细胞损伤的促进作用被引量：6
- 2017年
- 背景视网膜色素上皮（RPE）细胞的光损伤模型是多种视网膜变性类疾病的研究工具，光诱导RPE细胞损伤的主要病理基础是凋亡及炎症反应，但是内质网应激（ERS）反应是否参与其病理机制的研究国内外少有报道。目的探讨ERS对光损伤诱导的人RPE细胞凋亡的作用及其机制。方法体外培养人RPE细胞株（ARPE-19），将培养的细胞分为正常对照组及光照3、6、12和24h组，各光照组在培养箱内以（2000±500）lx的白色荧光灯光照细胞建立光损伤模型，正常对照组细胞在暗环境中培养且不给予光照射，筛选实验最适光照时间。将细胞分为正常对照组、光照组（光照12h）和苯基丁酸（4-PBA）预处理＋光照组，4-PBA预处理＋光照组先用ERS抑制剂4-PBA培养细胞30min，然后光照细胞12h。采用流式细胞仪检测各组人RPE细胞的凋亡率和细胞内活性氧（ROS）的荧光强度；采用ELISA法检测各组细胞上清液中炎性因子白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）质量浓度；分别采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测人RPE细胞中ERS标志物活化转录因子-6（ATF-6）、C／增强结合蛋白同源蛋白（CHOP）和细胞凋亡标志物半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12（caspase-12）mRNA及其蛋白的表达。结果光照后细胞形态呈长梭形改变，边界不清，细胞质脱颗粒，细胞碎片增多，且随光照时间的延长而加重。流式细胞仪检测发现，随光照时间的延长，人RPE细胞内ROS含量逐渐增加，细胞凋亡率逐渐升高，差异均有统计学意义（F=763．00、119．30，均P〈0．01）。ELISA法检测发现，与正常对照组比较，光照后6h细胞上清液中IL-1β和TNF-α质量浓度均明显升高，12h达峰。实时荧光定量PCR和Westernblot检测显示，与正常对照组比较，光照后人RPE细胞中ATF-6、CHOP和caspase．12 mRNA及其蛋白的相对表达量均明显升高，均
- 姜文静张丽娜于晓牛膺筠
- 关键词：细胞系
- 湿性老年性黄斑变性患者玻璃体腔注射康柏西普治疗后1年内复发的影响因素被引量：4
- 2022年
- 目的分析湿性老年性黄斑变性(wAMD)患者玻璃体腔注射康柏西普治疗后1年内复发的影响因素。方法回顾性分析126例wAMD患者的临床资料,均行玻璃体腔注射康柏西普治疗,记录患者治疗后1年内病情复发情况,经单因素及多因素分析影响患者病情复发的风险因子。结果126例wAMD患者中,65例治疗后1年内复发;初步比较两组基线资料后,经单项及多项Logistic回归分析显示,年龄高、有吸烟史、户外工作、初次积液吸收时最佳矫正视力(BCVA)高、高密度脂蛋白(HDL)低是wAMD患者玻璃体腔注射康柏西普治疗后1年内复发的危险因素(OR>1,P<0.05)。结论wAMD患者玻璃体腔注射康柏西普治疗后1年内复发率高,受年龄、吸烟史、工作类型、初次积液吸收时BCVA、HDL影响。
- 王瑜金栋栋吕亚丽牛膺筠姜文静
- 关键词：黄斑变性复发吸烟史最佳矫正视力
- EPO治疗干预对RPE细胞氧化损伤的保护作用被引量：3
- 2011年
- 目的研究EPO治疗干预过氧化氢诱导人RPE细胞氧化损伤的作用机制。方法 ARPE-19细胞株随机分为正常对照组、过氧化氢诱导组(模型组)和EPO治疗干预组。MTT法检测细胞活力变化,免疫组织化学法检测各组细胞Caspase-9蛋白的表达变化。结果 MTT法检测结果显示,过氧化氢可以显著降低细胞的活性,与对照组相比较,t=11.8692,P<0.01。EPO干预组与模型组比较,10IU/mLEPO干预组、20IU/mLEPO干预组、40IU/mLEPO干预组细胞活力逐渐升高,t值分别为5.6569、5.7056、9.4299(P<0.01)。模型组Caspases-9呈强阳性表达,与正常组比较,表达升高,t=147.5805,P<0.01。经不同浓度的EPO干预,Caspase-9的表达不同程度的减弱,与模型组比较,10IU/mLEPO干预组、20IU/mLEPO干预组、40IU/mLEPO干预组表达逐渐下降,t值分别为18.7409、61.8718、54.9153,P<0.01。结论过氧化氢诱导RPE细胞氧化损伤细胞活力下降,EPO可以保护过氧化氢诱导的RPE细胞氧化损伤,其机制可能与抑制凋亡,减弱凋亡诱导因子Caspase-9的表达有关。
- 赵颖姜文静牛膺筠
- 关键词：促红细胞生成素视网膜色素上皮细胞CASPASE-9
- 促红细胞生成素对人视网膜色素上皮细胞光化学损伤的保护作用被引量：3
- 2007年
- 目的观察重组人促红细胞生成素（EP0）在人视网膜色素上皮（RPE）细胞光化学损伤中的保护作用并探讨其作用机制。方法取成人RPE（ARPE）-19细胞株传代培养的2～5代细胞建立光损伤模型，光照12h后再培养24h终止培养，采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）法和流式细胞双染色法检测不同浓度的EP0干预治疗前后RPE细胞活性的变化及细胞凋亡的变化，并添加酪氨酸激酶／信号转导和转录活化因子Jak／STAT的阻断剂（AG490）探讨人重组EP0对人RPE细胞光化学损伤的保护性作用及其保护性机制。结果EPO可明显增强RPE细胞的细胞活性，各组中以40IU／mlEP0组细胞活性的增强结果最明显；明显减少光化学损伤诱导的人RPE细胞的凋亡，以40IU／mlEP0组结果最明显。在加入AG490（Jak2激酶抑制剂）组，EPO对细胞活性的增强作用和抑制凋亡作用均被阻止。结论EPO对人RPE细胞的光化学损伤有保护治疗作用，其保护作用机制主要通过EP0与其受体结合后保护作用机制起作用。
- 孟岩牛膺筠
- 关键词：色素上皮光刺激红细胞生成素
- 过氧化氢诱导人视网膜色素上皮细胞衰老及其机制探讨被引量：9
- 2011年
- 目的研究过氧化氢诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞氧化损伤中的细胞衰老现象并探讨其机制。方法培养的人RPE细胞随机分为正常对照组和过氧化氢处理组,过氧化氢处理组根据用600μmol·L-1过氧化氢处理的不同时段分为1h、6h、12h、24h及72h组。流式细胞术分析各组细胞周期,计算G0/G1期细胞所占比率;流式细胞术检测各组细胞线粒体膜电位的变化;免疫组织化学法检测各组细胞Caspase-9的变化。结果与正常对照组相比,过氧化氢作用6h组G0/G1期细胞所占比率增高(P<0.05),且随作用时间的延长而增加,72h组最高(P<0.01),达到(89.12±0.21)%;过氧化氢损伤导致RPE细胞膜电位降低,且随时间延长逐渐降低,72h组最低(62.48±0.59);Caspase-9蛋白在过氧化氢作用1h时表达开始增高,且随时间延长逐渐增加,在24h时达到高峰(36·2±0.4),72h时略有回落(26.4±0.8),但仍较正常组(3.2±0.2)高。结论过氧化氢作用下,人RPE细胞生长停滞于G/G期,呈现衰老现象。线粒体膜电位的降低和线粒体凋亡途径上游因子Caspase-9的活化可能是细胞衰老的机制之一。
- 赵颖牛膺筠周占宇
- 关键词：视网膜色素上皮细胞细胞衰老线粒体膜电位CASPASE-9
- 人胚胎视网膜色素上皮细胞在传代中的衰老及其机制被引量：1
- 2012年
- 背景视网膜色素上皮（RPE）细胞的衰老直接影响视网膜光感受器细胞的代谢功能，导致视网膜功能的异常和视力丧失。深入研究RPE细胞的衰老机制将有助于研究年龄相关性黄斑变性（AMD）的预防和治疗。目的研究人胚胎RPE细胞在传代过程中的衰老并探讨其机制。方法收集胎龄16～28周的人胎儿眼球6个，对人胚胎RPE细胞进行分离、培养和传代以制作RPE细胞复制性衰老模型，选择3～12代的RPE细胞用于实验。对培养和传代的RPE细胞用免疫组织化学法以人角蛋白对细胞进行鉴定。应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测各代细胞的增生活力，以RPE细胞的吸光度（A490）表示。采用流式细胞仪检测传代细胞周期和细胞线粒体跨膜电位（△ψm）的变化。结果培养和传代的细胞呈六角形，人角蛋白检测呈棕色，第3代以后的细胞色素消失，3～6代的细胞形态正常，生长活跃，之后生长能力和增生活力下降。培养第3～12代RPE细胞随着传代的增加，处于G0／G1期的细胞百分比逐渐增加，差异有统计学意义（F=180．430，P=0．000），由第3代细胞的68．40％增加到第12代细胞的87．33％，细胞生长趋于停滞。各代间处于G0／G1期细胞的百分比比较，第6代细胞明显高于第3代，第9代明显高于第6代，第12代则明显高于第9代，差异均有统计学意义（t=4．002，P〈0．05；t=12．885，P〈0．01；t=16．387，P〈0．01）。MTT法对RPE细胞活力的检测结果表明，随着传代次数的增多，反映RPE细胞活力的A490值逐渐下降，总体比较差异有统计学意义（F=38．770，P=0．000），第9代、第12代RPE细胞的A490值分别明显低于第6代和第9代，差异均有统计学意义（t=5．991、11．983，P〈0．01）。同时，3—12代PRE细胞随着传代的增加，罗丹明123染色荧光强度逐渐降低，差异有统计学意义（F=121．680，P=0．000），�
- 赵颖牛膺筠
- 关键词：细胞衰老细胞周期膜电位
