重庆市科技攻关计划(CSTC2011AC5039)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：王甜甜赵树铭孟强陆华林放更多>>
- 相关机构：第三军医大学西南医院第三军医大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：重庆市科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 3种血小板生成的关键因子共转染人骨髓基质细胞的研究被引量：1
- 2012年
- 目的构建TPO-pEGFP-N1、IL-6-pcDNA3.1(+)、IL-11-pcDNA3.1(-)3个真核表达载体,并观察其在共转染的人骨髓基质细胞中的表达情况。方法应用基因重组技术,构建TPO-pEGFP-N1、IL-6-pcDNA3.1(+)、IL-11-pcDNA3.1(-)3个真核表达载体,在脂质体介导下将其导入体外培养的人骨髓基质细胞内,24 h后观察TPO、IL-6、IL-11瞬时表达情况、蛋白含量及表达,并与未转染组、空载体转染组做对比。结果 1)酶切及测序结果均可证实TPO-pEGFP-N1、IL-6-pcDNA3.1(+)、IL-11-pcDNA3.1(-)3个真核表达载体的正确性。2)细胞转染24 h后,荧光显微镜下可观察到pEGFP-N1的表达,25%细胞发出绿色荧光;免疫细胞化学染色检测出IL-6及IL-11转染后能在细胞内表达。3)转染48 h后,Western blot检测出骨髓基质细胞内TPO、IL-6及IL-11的蛋白表达量。结论 TPO、IL-6、IL-11这3个基因可共转染人骨髓基质细胞,并在细胞内有效表达。
- 林放王甜甜王世春孟强尹智平陆华蒋天伦赵树铭
- 关键词：TPOIL-11骨髓基质细胞共转染
- 构建三维培养体系诱导脐血干细胞向血小板分化的体外实验研究
- 2013年
- 目的探讨利用壳聚糖-明胶支架和旋转培养系统(RCCS)构建三维培养体系(3D)培养脐血干细胞向血小板分化效果。方法支架构建:冷冻干燥法制备壳聚糖-明胶支架,扫描电镜观察支架表面特征;细胞培养:免疫磁珠分选脐血CD34+细胞并在自制支架结合RCCS的培养系统中培养,观察细胞的生长状况,对分化所得血小板作形态及功能鉴定,并与二维培养体系(2D)的培养结果比较。结果成功构建壳聚糖-明胶支架:浓度为0.5%,预冻温度为-30℃,孔径为(86±21)μm、吸水率为(87.62±10.19)%、孔隙率为(92.56±1.12)%,生物相容性好,无毒副作用;该系统诱导培养CD34+d5增殖(87.02±4.35)倍,而2D培养增值(20.78±5.03)倍(P<0.05);培养至21 d收集的类血小板颗粒在镜下观察具有正常的血小板形态特征,黏附功能良好,黏附率为(43.05±1.93)%,2D为(41.37±1.06)%(P>0.05);经凝血酶诱导后可发生聚集;细胞膜CD62p表达的阳性率为(73.82±1.01)%,2D为(75.26±2.57)%(P>0.05)。结论壳聚糖-明胶支架和RCCS系统构建的3D培养有利于脐血干细胞的体外增殖和向血小板的诱导分化。
- 王甜甜王世春林放孟强陈艺心赵树铭
- 关键词：脐血三维培养体系CD34+细胞体外实验
- 干细胞体外三维培养的研究进展被引量：1
- 2012年
- 胚胎干细胞（ESCs）、造血干细胞（HSCs）和间充质干细胞（MSCs）等属于全能或多能干细胞,具有自我更新、无限增殖和多向分化潜能,可在特定条件下诱导分化为巨核细胞、骨细胞、生殖细胞等[1-2]。
- 王甜甜赵树铭
- 关键词：干细胞生物支架生物反应器
