洛阳市科技攻关计划项目(0801048A)
- 作品数：12 被引量：38H指数：4
- 相关作者：张春杰李银聚程相朝吴庭才张明亮更多>>
- 相关机构：河南科技大学更多>>
- 发文基金：洛阳市科技攻关计划项目河南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪繁殖与呼吸障碍综合征疫苗的应用现状及研究进展被引量：4
- 2012年
- 简要介绍了猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)的病原特点,综述了PRRS常规疫苗的特性与应用现状、新型疫苗及其研究进展,并对其发展前景作了展望。
- 王小三张春杰赵星灿
- 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征常规疫苗新型疫苗
- 鸡IL-18复合免疫增强剂对鸡IFN-γ和IL-2表达的影响被引量：1
- 2013年
- 为探讨重组鸡白细胞介素-18 （Interleukin-18,IL-18）与细胞因子诱生剂联合使用对鸡γ-干扰素（Interferon-γ,IFN-γ）和白细胞介素-2（Interleukin-2,IL-2）表达的影响,应用不同浓度的鸡IL-18重组菌和IL-18蛋白与2-脱氧葡萄糖（2-D-G）和植物血凝素（PHA）组成复合制剂,分别经口服、肌肉注射途径免疫雏鸡,检测免疫后不同时间鸡血清中IFN-γ和IL-2含量.结果显示,肌肉注射含重组鸡IL-18蛋白的复合制剂能够明显提高鸡体内IFN-γ和IL-2含量,随IL-18蛋白量的增加,IFN-γ和IL-2含量有升高趋势,且以注射后第7～14天IFN-γ和IL-2含量最高,分别为43 ng/L和70 ng/L,至少在第28天仍能维持较高水平;经口服途径免疫,含鸡IL-18重组菌的复合制剂也能明显提高鸡体内IFN-γ和IL-2含量,免疫后第7天,IFN-γ和IL-2含量最高,分别为50 ng/L和62 ng/L,之后稍有下降,随IL-18重组菌量的增加,IFN-γ和IL-2表达含量变化不大.结果表明,重组鸡IL-18与细胞因子诱生剂组合,经口服或注射途径免疫,均能显著提高鸡IFN-γ和IL-2含量,为新型免疫增强剂和抗病毒制剂的研究和应用提供了参考.
- 余宁李银聚程相朝张春杰吴庭才陈慧敏
- 关键词：复合制剂
- 生物技术减毒沙门氏菌介导apo-t-PA-GFP融合基因在鸡体内表达和在卵黄中沉积的研究
- 2011年
- 目的探讨以减毒沙门氏菌为载体携带目的基因在家禽体内表达,并实现表达产物在卵黄中定向沉积的可行性。方法将人t-PA基因与鸡VLDLy组装前体apo基因融合,构建pApo-tPA-GFP表达质粒,电转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌△crpSL1344中,阳性重组菌静脉注射高产蛋鸡,收集不同时期鸡蛋,涂片荧光镜检和ELISA检测表达产物在卵黄中沉积情况和表达水平,平板溶圈法检测卵黄中表达产物的活性。结果注射表达质粒第8天开始卵黄中有荧光颗粒出现,第21天表达量最高,为10.4μg.mL-1,活性相当于50.2μg.mL-1标准品t-PA。结论研究表明,减毒沙门氏菌能够介导apo-t-PA-GFP融合基因在鸡体内表达,且apo载脂蛋白能够引导t-PA透过卵黄膜实现在卵黄中沉积,这一途径简捷、方便,为外源基因在动物体内的表达研究提供了理论和技术基础。
- 王晓利李银聚廖成水程相朝张春杰吴庭才
- 关键词：减毒鼠伤寒沙门氏菌卵黄
- 重组减毒沙门菌ΔcrpSL1344(pET28-tPA)在BHK细胞中的表达及活性检测
- 2012年
- 为了探讨原核表达质粒中的真核基因在减毒沙门菌中表达的多肽是否能在真核细胞中加工修饰成具有生物活性的蛋白,试验根据人t-PA的编码序列设计1对引物,扩增t-PA目的基因片段,构建pET28-tPA原核表达质粒,将表达质粒电转化导入减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpSL1344中并转染BHK细胞,应用SDS-PAGE技术检测t-PA表达情况,ELISA法检测其表达水平,琼脂糖平板溶圈法检测纤溶活性。结果表明:重组菌ΔcrpSL1344(pET28-tPA)在BHK细胞中有66.0 ku的蛋白表达,转染96 h的表达量为108μg/L,细胞裂解液和转染表达质粒的细胞培养上清液均有促纤溶活性。说明携带t-PA原核表达质粒的减毒沙门菌具有较强的促纤溶活性。
- 杨宁宁李银聚程相朝张春杰吴庭才
- 关键词：减毒鼠伤寒沙门菌表达质粒BHK细胞活性检测
- 猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒混合感染的检测分析被引量：16
- 2012年
- 本研究采用RT-PCR方法对2010年12月至2011年11月采集于豫西地区的170份疑似PRRSV感染猪病料进行病原检测,得到102份高致病性PRRSV阳性样本,在此基础上应用PCR方法检测PCV2和PRV的感染情况,并计算混合感染率。试验结果显示,豫西地区PRRS发病猪主要疫病的总混合感染率为58.52%,二重混合感染率为39.21%,三重混合感染率为19.61%,其中PRRSV/PCV2型二重混合感染最严重,混合感染率达33.33%;春夏和秋冬总混合感染率分别为48.57%、81.25%,而且不管是二重还是三重混合感染,秋冬均比春夏更严重,尤其是PRRSV/PCV2/PRV型三重混合感染,秋冬与春夏季节的混合感染率相差较大,分别为37.50%、11.43%;PRRS发病猪从哺乳期到育肥期都有混合感染,混合感染率分别为42.10%、50.00%、100.00%,混合感染程度逐渐加重,主要集中在育肥期;不同发病时期的最高混合感染型也有所不同,其中哺乳期最高混合感染型为PRRSV/PCV2,混合感染率为42.10%,保育期最高混合感染型为PRRSV/PCV2、PRRSV/PCV2/PRV,混合感染率均为22.73%,育肥期最高混合感染型为PRRSV/PCV2/PRV,混合感染率为50.00%。本研究反映了豫西地区PRRS发病猪群与猪圆环2型及猪伪狂犬病的混合感染情况和规律,为该地区PRRS及其混合感染的临床诊治和区域性防控工作的进行提供了理论依据和指导。
- 王慧宋宏晓师丽刚王伟杰赵星灿张明亮马蓓蓓崔淹鸽张春杰
- 关键词：PRRSVPCV2PRV
- 减毒沙门氏菌介导的apo-tPA融合基因在鸡体组织的分布与表达
- 探讨以减毒沙门氏菌为载体,介导外源基因在动物体内的组织分布和表达的可行性。将编码人t-PA功能区的基因片段与鸡VLDLy组装前体apo-B100基因融合,定向克隆到荧光蛋白表达载体SV40启动子下游,构建apo-tPA-...
- 王晓利李银聚程相朝张春杰吴庭才廖成水胡阿勇
- 关键词：减毒沙门氏菌
- 文献传递
- 豫西地区PRRSV新近流行株ORF5基因变异及Nsp2基因特征分析被引量：4
- 2012年
- 为研究豫西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)新近流行株ORF5基因的变异情况及Nsp2基因的结构特征,采用RT-PCR方法扩增了26份近期采自豫西地区猪场疑似PRRS猪肺脏样品中的ORF5全序列和Nsp2部分序列,并对其生物信息学和结构进行了分析。结果表明:成功扩增出的21株PRRSV流行株间ORF5全基因同源性为96.6%～100%,氨基酸同源性为97.5%～100%;与参考毒株JXA1、MLV、VR-2332和LV的核苷酸同源性分别为96.6%～98.9%、88.4%～89.2%、88.0%～89.5%和66.8%～67.3%;对阳性病料进行了部分Nsp2基因的扩增,测序结果显示,所有流行株的Nsp 2基因与已报道的美洲株VR-2332相比,不存在核苷酸的插入或突变,但存在2个位点共90个碱基的缺失;遗传衍化分析表明,流行毒株属于美洲型。研究结果揭示了豫西地区新近流行的PRRSV ORF5基因的变异情况及Nsp 2基因的特征,为该地区的PRRS防控工作提供了理论依据。
- 张明亮张春杰程相朝赵星灿李银聚吴庭才李正杨宁宁
- 关键词：流行株ORF5基因NSP2基因
- 河南省部分地区猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒和猪瘟病毒核酸检测分析被引量：7
- 2013年
- 为了解河南省部分地区猪群中猪伪狂犬病(PR)、猪圆环病毒病(PCVD)和猪瘟(CSF)3种伴有神经症状的免疫抑制性疫病的感染情况,本研究应用RT-PCR、PCR方法对近期采集的豫西地区84份伴有神经症状的病料进行猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型和猪瘟病毒检测分析。结果显示,PRV、PCV-2和CSFV的阳性率分别为75%、60.71%和32.14%;总单感率为32.14%,各自单感率分别为25.00%、3.57%、3.57%;总混感率为60.71%,PRV/PCV-2、PRV/CSFV、PCV-2/CSFV和PRV/PCV-2/CSFV 4种混感型的混感率分别为32.14%、3.57%、10.71%和14.29%。结果表明,河南省部分地区存在这3种伴有神经症状的猪免疫缺陷性疫病的流行,包括单感流行和混感流行;单感中以PRV流行为主,混感中以PRV/PCV-2这种混感型流行为主;混感复杂,具有PRV/PCV-2、PRV/CSFV、PCV-2/CSFV和PRV/PCV-2/CSFV四种混感型;总混感率比总单感率高,而PRV的单感率比PRV/CSFV、PCV-2/CSFV和PRV/PCV-2/CSFV 3种混感型的混感率却都要高。以上结果为该地区猪群神经症状疫病的诊断和防控积累了资料。
- 宋宏晓李葱晓王慧张明亮张春杰
- 关键词：神经症状猪伪狂犬病病毒猪圆环病毒猪瘟病毒
- Apo-tPA融合蛋白在鸡胚肝细胞中的分泌表达及其活性检测被引量：2
- 2009年
- 为了探讨apo—B100介导的t—PA融合蛋白在鸡胚肝细胞中分泌表达的可行性和生物学活性，将编码人组织型纤溶酶原激活剂功能区的基因片段△t—PA与鸡VLDLy组装前体apo—B100进行融合，定向克隆到pCDNA3表达载体CMV启动子下游，构建pCDNA3-apo—△tPA表达载体。将pCDNA3-apo-△tPA用脂质体包裹后转染体外培养的鸡胚肝细胞，ELISA检测融合蛋白表达水平，发色底物法检测表达产物的生物学活性。结果显示，融合基因在鸡胚肝细胞中能够表达并分泌到细胞外，48h表达水平最高达575．3ng／10^5（cells·24h），表达产物活性为135．8IU／10^6（cells·24h）。apo—B100介导的t—PA在鸡胚肝细胞中成功表达，为外源基因在鸡体内表达并实现在卵黄中沉积奠定了坚实的基础。
- 冯运巩李银聚程相朝张春杰吴庭才郁川王学强张旭
- 关键词：人组织型纤溶酶原激活剂活性检测
- 人组织型纤溶酶原激活剂转基因功能鸡蛋的研究及其活性分析
- 2010年
- 为探索人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)在鸡卵黄中积淀的可行性,开发具有抗心血管疾病的功能性鸡蛋,应用分子生物学技术分别构建含有人t-PA基因和t-PA与鸡卵黄高磷蛋白融合基因的真核表达质粒pcDNA3-tPA和pPhosvitin-tPA,脂质体包裹后分别注射于初产蛋鸡的肝脏,Western blotting和ELISA检测t-PA基因在鸡肝脏中的表达和在卵黄中的积淀情况,琼脂糖平板溶圈法检测期其活性。结果显示,注射重组质粒后7d,卵黄中有分子质量为63kD的t-PA积淀,表达可持续5周,高峰表达量分别为39.16mg/L和53.92mg/L;琼脂糖平板溶圈法检测其活性表明,卵黄中的t-PA具有激活组织纤溶酶的活性。实验证明了外源基因表达产物在卵黄中积淀这一途径的可行性。
- 李银聚程相朝张春杰吴庭才杜瑞玲余祖华
- 关键词：人组织型纤溶酶原激活剂卵黄高磷蛋白功能性食品卵黄转基因
