国家教育部博士点基金(20060558002)
- 作品数：8 被引量：11H指数：2
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- 苯甲酸钠对PC12细胞的增殖抑制及MAPKs活化表达的影响
- 2014年
- 目的观察苯甲酸钠（sodium benzoate,SB）对PC12肾上腺嗜铬细胞瘤细胞增殖的抑制作用及在此条件下细胞MAPKs信号通路活化表达的特点,为进一步了解SB的神经毒性及相关的分子机制提供实验依据。方法大鼠PC12细胞在含0-50 mmol/L浓度SB的培养基中培养24 h后,噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性;Western blot检测JNK和ERK磷酸化水平的改变。结果 SB可呈一定的时间和浓度依赖性抑制PC12细胞增殖,其中40 mmol/L SB作用24 h对PC12细胞的抑制率为47.81%±5.23%;Western blot结果显示,SB处理可增加JNK的磷酸化水平并降低基础的ERK磷酸化水平;预孵SP600125 30 min后再加入SB,则能短暂降低JNK的磷酸化水平。结论 SB能够明显抑制PC12细胞的增殖,JNK和ERK信号转导通路可能参与了SB对PC12细胞的毒性作用机制。
- 陈倩黄锦桃李朝红谢富康
- 关键词：苯甲酸钠丝裂原活化蛋白激酶增殖抑制
- 虫源性IgE依赖组胺释放因子诱导致敏肥大细胞释放组胺的研究
- 2007年
- 目的制备日本血吸虫和华支睾吸虫IgE依赖组胺释放因子重组蛋白rSjHRF和rCsHRF,并观察两者诱导大鼠致敏肥大细胞释放组胺的功能。方法分别克隆SjHRF和CsHRF基因完整编码序列,将重组质粒分别转化大肠埃希菌BL21并诱导表达,亲和层析纯化可溶性表达的重组蛋白,将纯化的rSjHRF和rCsHRF分别与卵清蛋白变应原致敏的大鼠肺肥大细胞一起孵育,利用荧光分光光度法测定肥大细胞组胺释放量,并制备2种重组蛋白诱导肥大细胞释放组胺的剂量依赖曲线和动力学曲线。结果成功构建重组质粒pET-30-rSjHRF和pET-30-rCsHRF,并获得纯化的可溶性重组蛋白rSjHRF和rCsHRF;2种重组蛋白诱导大鼠致敏肥大细胞释放组胺均具有剂量依赖性,当浓度为150mg/L时,rSjHRF和rCsHRF诱导致敏肥大细胞组胺平均释放率为49.78%和32.63%;2种重组蛋白诱导致敏肥大细胞组胺释放率随时间延长而增加,在反应开始后约35min,组胺释放率达到最高。结论重组虫源性IgE依赖组胺释放因子可诱导大鼠致敏肥大细胞释放组胺,提示该蛋白可能与寄生性蠕虫感染诱导机体Ⅰ型超敏反应的发生相关。
- 陈晓湘胡旭初徐劲余新炳
- 关键词：日本血吸虫华支睾吸虫肥大细胞组胺
- β-巯基乙醇和bFGF分别诱导大鼠骨髓基质干细胞成神经元样细胞的生物学性状
- 2010年
- 比较β-巯基乙醇(BME)和bFGF分别诱导大鼠骨髓基质干细胞(MSC)所分化神经元样细胞的生物学性状。BME和bFGF分别作用于大鼠的MSC,分别于9h和5d后,进行神经元样细胞的细胞计数,然后用免疫荧光进行神经元特异性蛋白NF200的鉴定,RT-PCR的方法分析神经元特异性基因NF的表达;western blotting对检测神经元特异性蛋白NF200的表达。BME诱导的细胞在加入药物1h后形态发生改变,9h时有突起伸出,胞体变亮;bFGF诱导的细胞在诱导后第3天开始有突起伸出,呈神经元样,第5天突起之间相互连接,第7天胞体死亡;而2种药物所分化的神经元样细胞NF200的免疫荧光均成阳性,但bFGF诱导的神经元样细胞的阳性率要显著高于BME所诱导的神经元样细胞;在RT-PCR中,bFGF诱导的神经元样细胞神经元特异性基因NF200的表达要高于BME所诱导的细胞;western blotting中,bFGF诱导的神经元样细胞神经元特异性蛋白NF200的表达要高于BME所诱导的细胞。bFGF和BME均可诱导MSC分化为神经元样细胞。但bFGF所诱导的神经元样细胞在从形态上更接近于神经元,而神经元特异性基因NF200mRNA及神经元特异性蛋白NF200蛋白的表达,均高于BME所诱导的细胞。
- 冯英黄锦涛谢富康
- 关键词：骨髓基质干细胞神经元
- 苯甲酸钠诱导PC12细胞凋亡及对TH表达的影响被引量：2
- 2014年
- 【目的】观察苯甲酸钠(SB)对PC12肾上腺嗜铬细胞瘤细胞凋亡的诱导作用及对酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响。【方法】以大鼠PC12细胞为多巴胺能神经元细胞模型,以10～50 mmol/L不同浓度的SB加入PC12细胞,培养24 h后,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;DAPI染色观察细胞凋亡形态;流式细胞术检测细胞凋亡状况以及用Western blot检测TH蛋白表达。【结果】SB可呈浓度依赖性抑制PC12细胞活性,并诱导PC12细胞核形态呈凋亡改变;流式细胞术检测显示随着SB浓度增加,细胞凋亡率显著增加;低浓度(10 mmol/L)SB作用下PC12细胞中TH表达增强,而高浓度(40～50 mmol/L)SB作用下TH表达减弱,同时,高浓度(40 mmol/L)SB作用下TH的表达减弱可呈时间依赖性。【结论】SB能够诱导PC12细胞凋亡,并伴随TH的表达改变。
- 陈倩黄锦桃谢富康李朝红
- 关键词：苯甲酸钠PC12细胞凋亡酪氨酸羟化酶
- 大鼠IgE依赖组胺释放因子重组蛋白纯化效果的优化
- 2008年
- 目的提高大鼠IgE依赖组胺释放因子(rHRF)的可溶性表达水平,改善其亲和层析纯化效果,为深入研究该重组蛋白的生物学功能奠定基础。方法选择多克隆酶切位点BamHⅠ和XhoⅠ,将rHRF完整编码区基因从原有的pET-30a-rHRF重组质粒亚克隆至pET-28a载体,构建重组质粒pET-28a-rHRF;转化大肠杆菌BL21(DE3)后,通过改变IPTG浓度(0.1～1.0mmol/L),调节诱导表达温度(25～37℃)和时间(1～5h),筛选能够提高rHRF可溶性表达水平的条件;同时改进亲和层析纯化的条件,提高纯化效果。结果成功构建重组质粒pET-28a-rHRF,不同IPTG浓度、诱导温度和时间对重组蛋白的可溶性表达水平无明显影响。但是,与pET-30a-rHRF转化菌相比,pET-28a-rHRF转化菌所表达的重组蛋白因其N端和C端均带有6×his标签,增强了目的蛋白与树脂的结合力,而使亲和层析纯化效果(重组蛋白的浓度和纯度)显著提高。结论rHRF重组蛋白的可溶性表达水平不受IPTG浓度、诱导表达温度和时间的影响,但是可溶性重组蛋白两端均携带6×his标签可使亲和层析纯化效果显著提高,从而有利于获得足量rHRF用于进一步的生物学功能研究。
- 陈晓湘胡旭初徐劲余新炳
- 关键词：原核表达载体蛋白质纯化
- β-巯基乙醇和bFGF分别诱导大鼠骨髓基质干细胞成神经元样细胞的生物学性状被引量：5
- 2010年
- 【目的】比较β-巯基乙醇(BME)和bFGF分别诱导大鼠骨髓基质干细胞(MSC)所分化神经元样细胞的生物学性状。【方法】BME和bFGF分别作用于大鼠的MSC,分别于9h和5d后,进行神经元样细胞的细胞计数,然后用免疫荧光进行神经元特异性蛋白NF200的鉴定,RT-PCR的方法分析神经元特异性基因NF的表达;Western blotting对检测神经元特异性蛋白NF200的表达。【结果】BME诱导的细胞在加入药物1h后形态发生改变,9h时有突起伸出,胞体变亮;bFGF诱导的细胞在诱导后第3天开始有突起伸出,呈神经元样,第5天突起之间相互连接,第7天胞体死亡;而两种药物所分化的神经元样细胞NF200的免疫荧光均成阳性,但bFGF诱导的神经元样细胞的阳性率要显著高于BME所诱导的神经元样细胞;在RT-PCR中,bFGF诱导的神经元样细胞神经元特异性基因NF200的表达要高于BME所诱导的细胞;western blotting中,bFGF诱导的神经元样细胞神经元特异性蛋白NF200的表达要高于BME所诱导的细胞。【结论】bFGF和BME均可诱导MSC分化为神经元样细胞。但bFGF所诱导的神经元样细胞在从形态上更接近于神经元,而神经元特异性基因NF200mRNA及神经元特异性蛋白NF200蛋白的表达,均高于BME所诱导的细胞。
- 冯英王会军黄锦涛谢富康
- 关键词：骨髓基质干细胞神经元
- 寄生虫IgE依赖组胺释放因子抗体抑制致敏肥大细胞释放组胺作用的研究被引量：2
- 2008年
- 目的观察抗寄生虫IgE依赖组胺释放因子(HRF)抗体对重组大鼠IgE依赖组胺释放因子(rRHRF)诱导致敏肥大细胞释放组胺功能的影响。方法用纯化的日本血吸虫和华支睾吸虫IgE依赖组胺释放因子重组蛋白rSjHRF和rCsHRF分别免疫大鼠,分离免疫血清并通过亲和层析纯化出总IgG。将rRHRF(终浓度为75μg/mL)分别与2种纯化抗体(浓度梯度为3/5,2/5,1/5,0)37℃预先反应30min后,再加入卵清蛋白变应原致敏的大鼠肺肥大细胞,利用荧光分光光度法测定rRHRF诱导肥大细胞组胺释放量。实验中采用未致敏大鼠血清纯化所得总IgG作为对照。结果得到了纯化的抗rSjHRF IgG和抗rC-sHRFIgG,抗rCsHRF IgG和抗rSjHRF IgG可明显抑制大鼠内源性IgE依赖HRF诱导致敏肥大细胞释放组胺的功能,但抗体抑制作用的强弱与抗体浓度之间的剂量依赖关系还需进一步实验验证。结论抗寄生虫IgE依赖组胺释放因子抗体具有抑制大鼠IgE依赖组胺释放因子诱导致敏肥大细胞释放组胺的作用,可能是参与寄生虫感染抑制宿主Ⅰ型超敏反应发生的免疫学机制之一,为预防和控制Ⅰ型超敏反应提供了新的思路。
- 陈晓湘胡旭初徐劲余新炳
- 关键词：日本血吸虫华支睾吸虫肥大细胞
- 大鼠IgE依赖组胺释放因子基因的克隆表达及其功能研究被引量：2
- 2008年
- 目的:获得原核表达的可溶性大鼠IgE依赖组胺释放因子(rHRF),并检测其诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺的功能。方法:克隆Wistar大鼠rHRF基因完整编码区序列并在BL21细胞中进行原核表达,纯化的可溶性重组rHRF刺激卵清蛋白变应原致敏的大鼠肺肥大细胞,利用荧光分光光度法测定组胺释放量。结果:测序证实克隆基因与GenBank中大鼠IgE依赖组胺释放因子(又称翻译控制肿瘤蛋白)mRNA序列的一致性为97%,推测的氨基酸序列一致性为95%。SDS-PAGE显示重组rHRF相对分子质量(Mr)约为24000;重组rHRF诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺不依赖变应原,且呈剂量依赖关系。结论:rHRF具有不依赖变应原诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺的功能,可能在Ⅰ型超敏反应过程中发挥重要作用,为进一步研究rHRF的免疫学功能打下基础。
- 陈晓湘胡旭初徐劲郑南才余新炳
- 关键词：基因克隆原核表达肥大细胞组胺
