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Anti-HER2-ScFv-GFP融合蛋白靶向结合体外乳腺癌细胞表面受体的研究被引量：2: 2011年; 为了研究不同表达系统获得的携带绿色荧光抗HER2单链抗体(Anti-HER2-ScFv-GFP)是否既可靶向结合HER2阳性乳腺癌细胞表面,也可通过观察绿色荧光变化直接判断抗体结合乳腺癌细胞表面后细胞的动态变化,在前期成功构建两种表达系统的基础上,利用Ni^(2+)-NTA亲和层析法纯化来源于真核表达系统pFAST Bac to Bac HT A/Tn-5B1-4和原核表达系统pBAD His B/TOP10的融合蛋白Anti-HER2-ScFv-GFP,设置HER2阳性细胞SKBR3为实验组、HER2阴性细胞MCF7为对照组,分别与之混合24 h后,1×PBS洗脱细胞3次,激光共聚焦显微镜观察到两种不同表达系统获得的融合蛋白在HER2阳性细胞SKBR3表面分布均有绿色荧光,真核表达的蛋白结合效率明显高于原核表达的蛋白,SKBR3结合高浓度的融合蛋白后细胞表现出皱缩,绿色荧光明显增强,而两种不同来源的融合蛋白与HER2阴性MCF7混合后均易被洗脱。GFP标准品与SKBR3混合后也容易被洗脱。实验表明构建的携带绿色荧光抗HER2单链抗体同时具有靶向结合和报告作用两方面的功能。; 高国辉黄奇迪王金丹杨纪锋包兵兵胡孝渠

微RNA-21在乳腺浸润性导管癌中的表达及与磷酸酶张力蛋白基因的相关分析被引量：5: 2008年; 目的探讨微RNA-21（mir-21）和第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因（PTEN）在乳腺浸润性导管癌中的表达情况及临床意义。方法采用茎环实时荧光逆转录聚合酶链反应（realtime RT-PCR）检测40例乳腺浸润性导管癌及其对应的癌旁正常乳腺组织中mir-21表达，免疫组化Envision法检测相应癌组织中PTEN表达，分析mir-21表达和PTEN表达的相关性及其与临床病理特征的关系。结果茎环realtime RT-PCR检测mir-21表达的敏感性和特异性良好；mir-21在乳腺癌组织中的表达显著高于正常组织（P〈0．001）；PTEN在癌组织中的低表达率为45％（18／22）。PTEN低表达组mir-21的表达显著高于PTEN高表达组（P=0．013）。mir-21的高表达还和较高的TNM分期、淋巴结转移及高增殖指数有关（P值分别为0．021，0．010和0．030）。结论mir-21在乳腺浸润性导管癌中的表达升高，可能和乳腺癌的增殖、侵袭转移有关；在乳腺癌中PTEN可能为其靶基因之一。; 黄关立张筱骅郭贵龙黄卡特杨开颜胡孝渠; 关键词：乳腺肿瘤微RNA PTEN磷酸水解酶

乳腺癌组织中Crk蛋白的表达及其临床意义被引量：1: 2009年; 目的探讨Crk在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化方法检测Crk在125例乳腺癌和20例乳腺良性肿瘤组织中的表达,分析其与乳腺癌临床病理特征及预后的关系。结果Crk在乳腺癌组织中的阳性表达率为39.2%,明显高于在乳腺良性肿瘤中的表达(χ2=6.447,P=0.011),Crk表达与乳腺癌组织学分级(χ2=4.965,P=0.026)有关,与TNM分期(r=0.258,P=0.004)、淋巴结转移(r=0.261,P=0.004)和HER-2(r=0.287,P=0.021)呈正相关;Crk表达阳性组和阴性组的5年特异生存率分别为38.4%和63.4%,差异有统计学意义(P=0.018)。结论Crk蛋白在乳腺癌组织中表达上调,其高表达提示乳腺癌生物学恶性度较高,预后不良。对乳腺癌患者组织标本进行Crk检测,有助于指导乳腺癌患者的个体化治疗。; 朱进胡孝渠郭贵龙尤捷黄奇迪张筱骅; 关键词：乳腺肿瘤预后免疫组织化学

中性粒细胞相关载脂蛋白在乳腺癌的表达及意义被引量：3: 2008年; 目的探讨中性粒细胞相关载脂蛋白（NGAL）在乳腺癌的表达及其临床意义。方法乳腺癌手术切除标本47例，应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测NGAL mRNA相对表达量；应用免疫组织化学方法，分析NGAL蛋白表达情况。结果乳腺癌组织中NGAL在乳腺癌组织中NGAL mRNA的表达水平为0．42±0．19，显著高于癌旁组织（P〈0．01）；NGAL蛋白在癌组织大多表达为＋＋～＋＋＋水平，癌旁正常组织则大多表达在-～＋水平，NGAL蛋白在癌组织表达显著高于癌旁正常组织（P〈0．01）。NGAL mRNA和蛋白表达与淋巴结转移、病理类型、ER、HER-2状态明显相关（P〈0．05），而与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、TNM分期、PR状态无明显相关（P〉0．05）。结论NGAL的表达与乳腺癌淋巴结转移和内分泌治疗耐药等相关，NGAL可能是乳腺癌早期诊断、监测复发和判断预后的潜在生物学参考指标。; 张秀峰张筱骅周素梅万丽陈国荣郝儒田胡孝渠; 关键词：乳腺肿瘤基因表达 NGAL

肝再生磷酸酶-3对乳腺癌淋巴结转移和预后的影响被引量：2: 2008年; 肝再生磷酸酶-3（PRL-3）是近年来发现的一个与肿瘤转移相关的新基因，已发现它在很多恶性肿瘤中呈现高表达，如结直肠癌、胃癌，并且其表达与肿瘤的的发展和患者的存活率相关，极具临床研究价值。我们用免疫组织化学的方法检测82乳腺癌原发灶和63例转移灶中PRL-3的表达情况，分析其表达与临床病理学特征和患者预后之间的关系。并探讨它作为乳腺癌的有效预后因素和预测指标的可行性。; 郝儒田万丽张筱骅潘贻飞胡孝渠吴秀玲; 关键词：肝再生磷酸酶-3 预后因素乳腺癌淋巴结转移临床病理学特征肿瘤转移

HER-2 RNA干扰对乳腺癌细胞及其种植肿瘤化疗敏感性的影响: 2009年; 目的:观察RNA干扰(RNAi)下调HER-2受体后乳腺癌细胞及其移植肿瘤对化疗药物表柔比星(epirubicin,EPI)敏感性的变化。方法:构建能够表达HER-2siRNA的质粒载体HER-2shRNApU6,转染HER-2阳性的乳腺癌细胞SK-BR-3,RT-PCR与Western blotting检测SKBR-3细胞HER-2mRNA与蛋白的表达。受转染细胞与不同浓度的化疗药物表柔比星共培养,MTT法检测细胞增殖活性及药物IC50;构建裸鼠乳腺癌模型,观察经HER-2shRNApU6治疗后,肿瘤对化疗的敏感性。结果:SKBR-3细胞转染HER-2shRNApU6后,HER-2mRNA及蛋白表达出现明显下调,细胞增殖活性出现明显下降(P<0.05),治疗组肿瘤细胞对表柔比星的化疗敏感性IC50为0.25μg/μl,而阴性对照及空白对照分别为3.46μg/μl和3.69μg/μl。裸鼠移植肿瘤模型中,治疗组肿瘤重量明显低于空白对照和阴性对照[(2.17±0.58)vs(3.13±0.38)、(3.21±0.89)g]。结论:HER-2的RNA干扰显著抑制乳腺癌SKBR-3细胞mRNA和蛋白表达,从而明显提高肿瘤细胞及其种植瘤对表柔比星的敏感性。; 胡孝渠叶志强郭贵龙尤捷; 关键词：RNA干扰表柔比星化疗敏感性

Anti-HER2 ScFv-GFP融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其靶向结合乳腺癌细胞的初步分析被引量：2: 2011年; 目的:构建原核表达系统诱导获得携带绿色荧光的抗人表皮生长因子受体2(human epidermalgrowth factor receptor 2,HER2)单链抗体,分析其靶向结合HER2阳性肿瘤细胞的功能,探讨其应用于HER2阳性肿瘤分子诊断与靶向治疗的可能性。方法:将绿色荧光蛋白基因与鼠源性人抗HER2单链抗体基因拼接成融合基因anti-HER2 ScFv-GFP,构建原核表达载体重组子pBAD His B/anti-HER2-ScFv-GFP,转入大肠杆菌E.coli TOP10诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot法鉴定,Ni2+-NTA亲和层析法纯化获得目的融合蛋白。将不同浓度的融合蛋白anti-HER2 ScFv-GFP分别与HER2阳性的乳腺癌细胞SKBR3、HER2阴性的MCF7混合,观察绿色荧光在不同癌细胞表面的分布。结果:成功获得长度为1 539 bp的融合基因,原核表达系统pBAD His B/anti-HER2-ScFv-GFP/TOP10成功构建并表达携带绿色荧光的抗HER2单链抗体,融合蛋白相对分子量大小约60 kDa。HER2阳性的SKBR3细胞表面有明显绿色荧光,细胞有皱缩现象,而HER2阴性MCF7被洗脱后无荧光。结论:携带绿色荧光的抗HER2单链抗体能牢固结合在HER2阳性的乳腺癌细胞SKBR3表面,绿色荧光可以起到报告作用。; 高国辉黄奇迪王金丹杨水兵杨娟张凤立胡孝渠; 关键词：绿色荧光蛋白融合蛋白

CC3／TIP30蛋白在乳腺癌中的表达及其与HER-2／neu基因的相关性研究被引量：12: 2012年; 目的分析CC3／TIP30蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义，并探讨CC3／TIP30与HER-2／neu的mRNA相关性。方法采用免疫组化EnVision二步法检测2004年1月至2005年1月手术治疗并病理证实的112例乳腺癌标本中CC3／TIP30、HER-2／neu蛋白的表达，分析其表达与临床病理特征及预后的相关性，同时应用化学合成靶向敲除CC3／TIP30mRNA的siRNA，并转染SK—BR-3细胞株48h后，应用real—timePCR法测定CC3／TIP30、HER-2／neu基因mRNA的表达水平。结果免疫组化显示CC3／TIP30蛋白在乳腺癌组织中表达与TNM分期、淋巴结转移、HER-2和分子分型相关（P=0．048、0．019、0．027、0．011），而与患者年龄、肿瘤大小，以及雌激素受体和孕激素受体表达状态无关。实时定量PCR结果示CC3／TIP30siRNA转染导致CC3／TIP30mRNA的表达下降，同时伴随着HER-2／neu基因mRNA水平的下降，差异有统计学意义（F=56．797，F=165．101；P均=0．000）。分子分型为HER-2阳性型的乳腺癌患者中CC3／TIP30蛋白表达阳性、阴性组患者5年总生存率差异有统计学意义（X^2=10．732，P=0．001）。结论CC3／TIP30蛋白表达缺失与乳腺癌的发生、发展有关，提示乳腺癌患者早期发生转移复发可能，可作为HER-2阳性型乳腺癌亚组分型的指标之一。; 黄奇迪胡孝渠万丽高国辉郑书荣尤捷郭贵龙; 关键词：乳腺肿瘤免疫组织化学聚合酶链反应

CD44^＋／CD24^-/low在乳腺癌中表达及其临床意义被引量：3: 2009年; 目的观察乳腺癌中CD44^＋／CD24^_/low的表达与临床病理特征的关系及其对预后的影响。方法应用双染免疫组织化学检测144例乳腺癌与30例乳腺良性肿瘤或正常乳腺组织中CD44^＋／CD24^_/low的表达，收集并分析患者的临床病理和随访资料。结果CD44^＋／CD24^_/low在乳腺良性肿瘤或正常乳腺中表达率为0％～8％，乳腺癌中表达率为0％～75％。67例（46．5％）乳腺癌患者CD44^＋／CD24^_/low表型的细胞〉10％，余77例（53．5％）≤10％。CD44^＋CD24^_/low的表达高低在淋巴结转移（P〈0．01）、病理分期（P〈0．01）、HER-2表达（P〈0．01）以及复发（P〈0．01）上差异有统计学意义。CD44^＋／CD24^_/low高表达的肿瘤复发时主要表现为远处转移，尤其是骨转移。CD44^＋／CD24^_/low高表达和低表达的5年无病生存率为65％和82％（P〈0．01），5年总生存率为68％和86％（P〈0．05），差异有统计学意义。结论CD44^＋／CD24^_/low的表达可能与乳腺癌的转移有关，有可能作为评估乳腺癌患者预后的参考指标。; 叶志强胡孝渠黄卡特万丽谷甸娜张筱骅; 关键词：乳腺癌 CD44 免疫组织化学

融合蛋白anti-HER2-ScFv-GFP在昆虫细胞中的表达及其靶向结合乳腺癌细胞的功能分析被引量：3: 2011年; 目的:利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达获得携带绿色荧光蛋白(GFP)的抗人表皮生长因子受体2(HER2)的单链抗体可变区片段(ScFv),分析其靶向结合乳腺癌细胞表面受体HER2的功能。方法:构建融合基因anti-HER2-ScFv-GFP,重组获得真核表达载体重组子pFAST Bac-to-Bac HT A/anti-HER2-ScFv-GFP,转化DH10Bac,收集重组病毒bacmid,分别转染、感染粉纹夜蛾细胞Tn-5B1-4,SDS-PAGE及Westernblotting分析融合蛋白表达产物。Ni2+-NTA亲和层析法纯化anti-HER2-ScFv-GFP融合蛋白后分别滴入乳腺癌细胞HER2阳性的SKBR3和HER2阴性的MCF7,对比携带绿色荧光的抗HER2单链抗体靶向结合乳腺癌细胞表面HER2受体情况。结果:获得长度约1 539 bp的融合基因anti-HER2-ScFv-GFP,感染重组病毒的Tn-5B1-4细胞膜附近有明显绿色荧光,SDS-PAGE、Western blotting法检测到60 kD的特异性条带。结合实验显示HER2阳性的SKBR3细胞表面有明显绿色荧光,而HER2阴性的MCF7细胞表面荧光易被洗脱。结论:在Tn-5B1-4中成功表达携带绿色荧光的融合蛋白anti-HER2-ScFv-GFP,该携带绿色荧光的抗HER2单链抗体具有靶向结合乳腺癌细胞表面HER2受体的效能。; 高国辉王金丹黄奇迪杨纪峰杨水兵包兵兵张羽胡孝渠; 关键词：融合基因表达

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