江苏省医学重点人才培养基金(RC2007057)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：张勇邓蕾王学浩席力森孙倍成更多>>
- 相关机构：江苏省人民医院更多>>
- 发文基金：江苏省医学重点人才培养基金江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目卫生部科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢病毒载体介导的针对端粒酶的RNA干扰技术对HepG2细胞的体外效应
- 2009年
- 目的观察针对hTERT的siRNA对肝癌HepG2细胞的体外抑制效应。方法将逆转录表达载体中的针对hTERT的siRNA序列亚克隆至慢病毒表达载体pWPT-GFP中,经293T细胞包装,收集病毒上清,感染肝癌细胞株HepG2。采用半定量RT-PCR法、TRAP法及MTT法,分别检测hTERT基因表达、端粒酶活性、肿瘤细胞生长抑制情况等。结果限制性内切酶酶切分析表明成功构建了靶向人端粒酶逆转录酶的干扰RNA的慢病毒表达载体;以293T包装的重组慢病毒能够高效感染肝癌细胞,感染效率可达99%以上;在稳定表达pWPT-hTERT-siRNA的肝癌细胞中,hTERT mRNA表达水平、肿瘤细胞的体外增殖受到抑制。结论慢病毒介导的siRNA转染能明显抑制恶性肝癌细胞的生长。
- 张勇高云邓蕾席力森殷爱红王学浩孙倍成
- 关键词：RNA干扰逆转录病毒载体人端粒酶逆转录酶
- 慢病毒载体携带siRNAs对乙型肝炎病毒抑制作用的体内研究被引量：1
- 2009年
- 目的:建立小鼠急性乙型肝炎病毒感染动物模型,在此基础上观察慢病毒载体携带小干扰RNA(small interfering RNAs,siRNAs)对乙型肝炎病毒(HBV)复制和表达的影响。方法:36只Balb/c小鼠随机等分为3组(n=12):①空白对照组(NC组):通过尾静脉注射pTHBV2(包含HBV全基因组真核表达质粒),建立小鼠急性HBV感染模型;②干扰组(E组):将pTHBV2与pWPT-HBV-siRNA1(携带靶向HBVS区的siRNA1的慢病毒)通过尾静脉共注射小鼠;③无关干扰组(I组):pTHBV2和pWPT-HBV-siRNA2(携带非靶向HBV的无关siRNA2的慢病毒)通过尾静脉共注射小鼠。于注射后第4天和第7天取小鼠血清和肝脏组织。采用ELISA法检测血清中HBsAg(HBV表面抗原);选择逆转录聚合酶链反应方法(RT-PCR)检测肝组织HBVS-mRNA水平;用免疫组织化学法检测肝组织HBcAg(HBV核心抗原)和HBsAg。结果:与NC组比较,E组小鼠血清中HBsAg水平在第4和第7天分别下降89.76%和94.81%(P<0.01);RT-PCR结果提示E组肝组织HBVS-mRNA水平明显降低(P<0.05);免疫组织化学法检测结果显示E组肝组织HBcAg﹑HBsAg阳性细胞数明显减少(P<0.05)。I组与NC组比较,上述检测指标无统计学差异(P>0.05)。结论:慢病毒载体携带siRNAs能够显著抑制小鼠体内HBV的复制和表达,并且抑制作用在第7天较第4天更强,没有减弱的趋势。
- 席力森邓蕾张勇高云王学浩孙倍成
- 关键词：小干扰RNA慢病毒载体肝炎病毒乙型
