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国家教育部博士点基金(20110093110008): 作品数：24 被引量：86H指数：6; 相关作者：陈敬华邓超陈荆晓程咏梅付海田更多>>; 相关机构：江南大学无锡贝迪生物工程有限公司南通大学更多>>; 发文基金：国家教育部博士点基金江苏省自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>; 相关领域：医药卫生生物学化学工程轻工技术与工程更多>>

GST-His-Heparinase Ⅰ双标签融合蛋白的原核表达与纯化被引量：3: 2014年; 以pET15b-HepⅠ为模板,通过PCR技术扩增出上游合有6×His标签的HepⅠ基因序列,克隆至表达载体pGEX-4T-1。测序鉴定后,将重组表达质粒pGEX-His-HepⅠ转入E.coli BL21(DE3)感受态细菌,经IPTG诱导表达。表达产物可溶部分用GSTrap FF和HisTrap HP柱两步亲和纯化,所得产物经SDS-PAGE检测,在66 kDa和43 kDa处显示特异条带,分别与GST-His-HepⅠ和His-HepⅠ融合蛋白预期分子量相符;最终His-HepⅠ融合蛋白的比酶活为86.45 IU/mg,纯度高达99%,与仅一步亲和纯化得到的GST-His-HepⅠ融合蛋白相比,进一步提高了纯化后重组肝素酶的纯度。本研究为制备高纯度的HepⅠ提供了一种方法,对制备高安全性的LMwH和解析HepⅠ晶体结构具有重要意义。; 刘卫超程咏梅邓超丁建文宋志新陈敬华

透明质酸/胶原蛋白/聚乙二醇复合水凝胶的研究被引量：6: 2015年; 针对透明质酸、胶原蛋白水凝胶力学性能差的问题,采用两步交联法将透明质酸、胶原蛋白与聚乙二醇双丙烯酸酯制备成一种兼具生物相容性和高强度的复合水凝胶.研究制备了具有相同胶原蛋白和聚乙二醇双丙烯酸酯质量分数,不同透明质酸质量分数的水凝胶,从微观结构和力学强度调控了复合水凝胶的理化性能,并用LG赖氨酸对复合凝胶进行改性.SEM结果表明,三元复合水凝胶具有蜂窝状的内部结构,孔径范围在80~180μm,赖氨酸浓度达40mmol/L时,水凝胶的压缩模量达414kPa,是改性前模量的19倍.细胞毒性和体内植入实验表明该水凝胶浸提环境对细胞生长无明显抑制作用,产生较低的免疫排斥反应,有望用于软骨等组织的修复.; 袁静邱立朋陈敬华; 关键词：透明质酸胶原蛋白水凝胶

具有双层结构和负电荷屏障载体的构建及其基因转染被引量：1: 2015年; 用组氨酸分别修饰聚乙烯亚胺（PEI）和透明质酸,得到了聚乙烯亚胺-组氨酸（PEI-His）和透明质酸-组氨酸（HA-His）。然后将PEI-His与增强型绿色荧光蛋白质粒DNA（p EGFP-N1）复合形成PEI-His/DNA复合物（PD复合物）,并进一步在其表面吸附HA-His形成具有双层结构和负电屏障的（PEI-His/DNA）/HA-His复合物（HPD复合物）,用于基因传递研究。透射电镜观察到HPD复合物为球形纳米粒子,水化后平均粒径约为142 nm,ζ电位为-28.9 m V。HPD复合物中加入10%胎牛血清后平均粒径为135 nm,ζ电位为-25.8 m V,提示其具有良好的血清稳定性。HPD复合物对p EGFP-N1的包载效率为（91.9±1.15）%,并可有效保护DNA不被DNase I降解。在PEI浓度5~20μg/ml范围内,HPD复合物的细胞毒性明显低于PEI/DNA复合物,前者细胞存活率可维持在80%以上;同时,它可介导DNA进入细胞实现基因转染,转染效率为2.88%。; 王敏田慧慧陈荆晓陈敬华; 关键词：基因载体组氨酸基因转染

基于巨噬细胞模型的竹荪多糖的免疫功能被引量：12: 2016年; 为探索竹荪多糖（DI）对巨噬细胞RAW264.7免疫功能的影响,分别采用四唑氮蓝（MTT）法、中性红法、Griess法、ELISA法,检测DI对巨噬细胞增殖、吞噬活性、一氧化氮（NO）和白细胞介素1（IL-1）、白细胞介素6（IL-6）、α肿瘤坏死因子（TNF-α）分泌量的影响;运用反转录PCR（RT-PCR）检测i NOS和IL-1、IL-6、TNF-α的m RNA表达量的变化。结果表明,在25-200μg/m L质量浓度范围内,DI能够明显促进巨噬细胞增殖,增强其吞噬活性。同时,DI能够增强巨噬细胞分泌NO、IL-1、IL-6、TNF-α的能力,且明显提高i NOS、IL-1、IL-6、TNF-αm RNA的表达水平。因此,竹荪多糖对巨噬细胞RAW264.7具有免疫刺激作用。; 尚京迎付海田邓超张斯秀陈敬华; 关键词：多糖竹荪巨噬细胞免疫功能

还原响应型K5多糖胶束药物载体的研究被引量：4: 2015年; 为了解决传统抗肿瘤药物阿霉素水溶性不佳,对机体选择性差的情况,设计了一种还原敏感的K5胶束药物载体。将脱氧胆酸(DOCA)通过双硫键与K5多糖连接,制备两亲性K5PSSS-DOCA(KSD)缀合物。该缀合物在水溶液中可自组装形成胶束并包载模型药物阿霉素(DOX)。胶束形貌通过透射电镜进行观测,并进一步通过动态光散射测定其水合粒径及ζ-电位。胶束为球形,其水合粒径和ζ电位在载药前分别为225nm与-31mV,载药后为241nm与-31mV,具有较好的稳定性。该胶束在谷胱甘肽(GSH)存在条件下,可表现出明显的还原响应药物释放行为。细胞实验结果证实,载体材料有良好的生物相容性,含药胶束对肿瘤细胞的半数抑制浓度(IC50)低于正常细胞,对肿瘤细胞有明显选择性。; 张苗刘文陈荆晓陈敬华; 关键词：胶束药物传递阿霉素

重组肝素酶Ⅰ热失活动力学模型的建立与应用: 2014年; 对组氨酸标签肝素酶I(His-Hep I,EC 4.2.2.7)的热失活机制进行了研究。针对短暂低温处理可以使热失活His-Hep I酶活部分恢复及添加二硫苏糖醇(DTr)使其热稳定性提高的现象,利用荧光探针法研究了失活过程His-Hep I构象变化,证明了该酶构象存在可逆转变行为。为进一步明晰His-Hep I的热失活机制,假设该酶热失活的主要途径包括去折叠及形成聚集体,并以此为基础建立模型进行拟合,模型与实验值吻合良好,表明假设的合理性。根据模型计算的活化能为E_r=100.217 kJ/mol、E_(ir)=7.857 kJ/mol和E_d=77.062 kJ/mol,此数据从一定程度上解释了冷处理为何能使His—Hep I部分恢复活性。进一步研究表明,任何能够抑制这两种途径发生的措施对于提高His-Hep I热稳定性都是有效的。; 程咏梅陈潮梁陈敬华刘卫超周斌宋志新; 关键词：热稳定性动力学数学模型

肝素化单壁碳纳米管的制备、表征及生物相容性: 2014年; 背景:碳纳米管具有独特的结构和理化性质,在药物载体、生物传感器及生物材料等领域应用前景广阔,但其疏水性强,易缠绕聚集,并且具有一定的细胞毒性,致生物相容性差。目的:制备肝素化单壁碳纳米管,探讨表面肝素化对碳纳米管水溶性及生物相容性的影响。方法:采用共价接枝的方法制备肝素化单壁碳纳米管,通过红外光谱进行表征;考察肝素化单壁碳纳米管在水溶液中的分散情况和稳定性;硫酸咔唑显色测定单壁碳纳米管表面的肝素多糖接枝量;测定抗Ⅹa因子活性和活化部分凝血酶时间研究肝素化单壁碳纳米管的血液相容性,用MTT法研究10,20,40 mg/L肝素化单壁碳纳米管浸提液与小鼠骨髓干细胞的相容性。结果与结论:肝素被成功接枝到单壁碳纳米管表面,肝素接枝量为257.53 mg/g;肝素化单壁碳纳米管在水溶液中分散良好,具有很好的悬浮稳定性;肝素化单壁碳纳米管抗Ⅹa因子活性为36.53 U/mg,具有明显的抗栓活性,能显著延长绵羊血浆活化部分凝血活酶时间,表现出显著的抗凝活性;肝素化单壁碳纳米管细胞毒性低,并对细胞增殖具有一定的促进作用。表明肝素化不仅能提高碳纳米管在水溶液中的分散性和稳定性,而且赋予其良好的血液相容性和细胞相容性。; 彭一清陈荆晓滕丽萍赵善成程咏梅邓超陈敬华; 关键词：碳纳米管抗凝血血液相容性细胞相容性活化部分凝血酶时间

两亲性K5多糖胶束的构建及其药物靶向传递性能研究: <正>本研究通过高密度发酵获得天然来源的K5多糖,连接疏水性脱氧胆酸构建两亲性药物载体,用于疏水性药物阿霉素的包载及传递。这种两亲性材料可在水溶液中自组装形成尺寸均一,分散良好的纳米胶束,DLS测试其平均粒径为152.9...; 张苗陈荆晓陈敬华; 关键词：胶束阿霉素药物传递; 文献传递

透明质酸-葡聚糖超分子水凝胶的制备及其细胞包载性能研究被引量：2: 2014年; 分别制备了经β-环糊精(β-CD)修饰的透明质酸主体大分子(HA-CD),用2-萘乙酸(2-NAA)修饰的葡聚糖客体大分子(Dex-NAA),其结构均经核磁共振氢谱进行确认,接枝率分别为15.53%和7.38%。利用β-环糊精和2-萘乙酸间的主客体识别作用,制备得到超分子水凝胶。扫描电镜观测表明水凝胶内部为多孔结构,并且排列规整;水凝胶经流变学测试其储存模量大于损耗模量,具有较好的机械强度;同时,水凝胶具有良好的细胞相容性,可有效包裹细胞并促进细胞增殖生长。这种由天然多糖构建的超分子水凝胶有望作为细胞支架应用于组织工程领域。; 曹璐娟施瑜陈荆晓陈敬华; 关键词：透明质酸 Β-环糊精主客体作用

长裙竹荪子实体乙醚和乙酸乙酯提取物的化学组成分析及抑菌活性研究被引量：7: 2014年; 依次用乙醚和乙酸乙酯为溶剂,对正己烷提取后的长竹荪子实体粉末进行索氏提取。乙醚和乙酸乙酯的提取率分别为1.57%和1.85%,然后采用GC-MS对乙醚和乙酸乙酯提取物的化学成分进行分析,图谱解析结果显示乙醚提取物中含有43种成分,占总含量的99.98%;乙酸乙酯提取物中含有73种成分,占总含量的99.56%。两种提取物对金黄色葡萄球菌、变形杆菌、枯草芽孢杆菌、伤寒杆菌等均有明显的抑制作用,而乙酸乙酯提取物的抑菌效果优于乙醚。; 邓超付海田谷鹏胡准陈敬华; 关键词：长裙竹荪乙醚乙酸乙酯抑菌活性

国家教育部博士点基金(20110093110008)

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