国家自然科学基金(39670806)
- 作品数：5 被引量：0H指数：0
- 相关作者：童坦君姜琨王秀琴任庆虎王文恭更多>>
- 相关机构：北京医科大学中国医学科学院北京协和医学院中国科学院发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生自然科学总论生物学更多>>
- 小鼠成纤维细胞凋亡与bcl-2结合蛋白
- 1999年
- 为检测细胞凋亡过程中ｂｃｌ２ 基因的结合蛋白， 用ＰＣＲ 技术扩增小鼠ｂｃｌ２ 基因（ｍｂｃｌ２） 调控区， 经亚克隆后的序列分析证实其准确性． 用５氟尿嘧啶（５Ｆｕ） 诱导小鼠成纤维细胞（Ｃ３Ｈ１０ Ｔ１／２ Ｃｌ ８） 凋亡， 以此ＰＣＲ产物作探针， 对上述细胞的核蛋白质粗提物进行迁移位移法（ＥＭＳＡ） 与ＤＮＡ蛋白质印迹分析． 结果表明， 细胞核内一分子质量为５３ ｋｕ的结合蛋白与ｍｂｃｌ２ 调控区的结合信号在５Ｆｕ 刺激１２ ｈ 后明显增强， 而一种１００ ｋｕ的ＤＮＡ 结合蛋白与该区的结合信号在５Ｆｕ 刺激１２ ｈ 后明显减弱． 因而， ｐ５３ 蛋白有可能是ｂｃｌ２ 的负转录因子， １００ ｋｕ的ＤＮＡ 结合蛋白有可能是ｂｃｌ２ 的正转录因子．
- 王文恭童坦君
- 关键词：细胞凋亡BCL-2转录因子P53结合蛋白
- HER-2基因打靶对HeLa细胞生长的抑制
- 1999年
- 构建具有正、负筛选特性的HER-2基因打靶载体,promoter pPNT 1305。用电穿孔法把线性promoter pPNT 1305导入HeLa细胞,经G418正筛选及丙氧鸟苷负筛选,选出敲除了HER-2单等位基因的打靶命中细胞(HER-2^(-1)细胞)。Northern杂交表明,HER-2^(-1)细胞的HER-2 mRNA水平低于HeLa细胞;Western blot结果显示其HER-2蛋白水平下降,亦低于HeLa细胞。流式细胞计分析表明,HER-2单等位基因敲除后,细胞周期时相左移,G1期比例上升,G2+M期比例下降。可见敲除HER-2基因对HeLa细胞生长具有抑制作用。
- 王向东汪维任庆虎陈培利姜琨童坦君高建刚
- 关键词：基因打靶原癌基因HELA细胞HER-2细胞增殖
- erbB-2表达下调抑制人胃癌细胞增殖与EGF反应性的机制探讨
- 1999年
- 应用DNA重组、基因转染、分子杂交、生长测定、裸鼠成瘤、凝胶迁移率改变分析等方法观察了人胃癌细胞中原癌基因erbB-2的表达被其反义RNA特异抑制后胃癌细胞恶性增殖、EGF反应性及相关基因表达的变化.erbB-2表达下调显著抑制了胃癌细胞的恶性增殖能力、EGF的细胞增殖促进效应及对增殖相关基因c-myc,EGFR的促进效应.与此同时,细胞周期蛋白激酶抑制物p21基因的表达显著增强.对其转录激活机制分析结果表明,转录激活分子STAT1特异性地与p21基因启动子结合促进了p21基因的表达.
- 姜琨童坦君Yue E Chin王秀琴吴旻
- 关键词：ERBB-2EGF胃癌细胞癌细胞增殖
