广东省自然科学基金(04020419)
- 作品数：15 被引量：57H指数：4
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- 骨髓衍生肝干细胞亚群Thy-1.2^+lin^-细胞的免疫磁珠分选被引量：2
- 2008年
- 张春兴廖彩仙张守华苏俊周杰
- 关键词：免疫磁珠纯化
- 骨髓单个核细胞移植对小鼠酒精性肝纤维化的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨骨髓源性肝干细胞移植对小鼠肝纤维化的影响。方法 16只酒精性肝纤维化雌性小鼠随机分为移植组和对照组,移植组小鼠(n=8)接受同基因型雄性小鼠的骨髓单个核细胞移植,对照组小鼠(n=8)接受等体积的含10%小牛血清IMDM培养液输注。术后30天活杀小鼠取血行肝功能测定、取肝行常规组织病理学观察和肝组织中胶原含量测定。结果移植组小鼠的肝功能和肝结构恢复显著优于对照组,肝组织中的胶原含量显著少于对照组。结论骨髓源性肝干细胞移植可以使小鼠肝纤维化病变的结构和功能得到显著改善,可以显著减少纤维化肝组织中的胶原含量。
- 廖彩佶廖彩仙廖欣鑫赖勇强龚祖元
- 关键词：骨髓肝干细胞小鼠肝纤维化
- 小鼠c-Kit^+lin-骨髓细胞移植生成肝细胞的实验研究被引量：26
- 2006年
- 目的评价小鼠c-Kit+Lin-骨髓细胞的肝干细胞潜能,为骨髓源性肝干细胞的临床运用提供可行性实验依据。方法供体为纯系BALB/C雄性小鼠,c-Kit+Lin-骨髓细胞采用免疫磁珠分选法分离细胞。受体为行35Gy全肝照射处理后的同龄同系BALB/C雌性小鼠,立即移植供体c-Kit+lin-骨髓细胞。接受c-Kit+lin-骨髓细胞移植1月后,活杀取肝做常规病理学检查、Y染色体的原位杂交检查、甲胎蛋白与白蛋白的免疫组化检测。结果移植1月后小鼠肝脏的组织结构已恢复正常,肝组织细胞中存在原位杂交和免疫组化均呈阳性反应的双阳性细胞。结论小鼠c-Kit+Lin-骨髓细胞具有肝干细胞潜能,移植后可以在肝内定居并分化形成肝细胞。可做为肝病细胞移植疗法的种子细胞。
- 唐浩廖彩仙周杰金浩生谭远飞苏俊张春兴张守华
- 关键词：小鼠骨髓细胞
- 小鼠骨髓CD90+、CD34+、CD117+和Sca-1+细胞的肝干细胞潜能比较被引量：3
- 2006年
- 目的比较的小鼠CD90+Lin-、C34+Lin-、CD117+Lin-和Sca-1+Lin-骨髓细胞的肝干细胞潜能。方法供体为纯系BALB/C雄性小鼠,应用免疫磁珠分选法获取CD90+Lin-、CD34+Lin-、CD117+Lin-和Sca-1+Lin-骨髓细胞。受体为35Gy全肝照射处理后的同龄同系BALB/C雌性小鼠,A、B、C、D组小鼠分别接受CD90+Lin-、CD34+Lin-、CD117+Lin-、Sca-1+Lin-骨髓细胞移植。移植后30天活杀小鼠,取肝进行Y染色体原位分子杂交与白蛋白免疫组织化学联合检测。结果各组小鼠肝组织中都可以检测到Y染色体和白蛋白均呈阳性的双阳性细胞,C组的双阳性细胞数量显著多于其它各组。结论CD90+Lin-、CD34+Lin-、CD117+Lin-、Sca-1+Lin-骨髓细胞都具有肝干细胞潜能,其中CD117+Lin-骨髓细胞的肝干细胞潜能最大、形成肝细胞的能力量强。
- 廖彩仙唐浩周杰苏俊张春兴张守华
- 关键词：小鼠骨髓细胞骨髓源性肝干细胞
- 构建适合骨髓衍生肝干细胞移植的小鼠酒精性肝纤维化模型被引量：2
- 2007年
- 目的:建立适合骨髓衍生肝干细胞移植的小鼠酒精性肝纤维化模型,为移植骨髓衍生肝干细胞对酒精性肝损伤修复的研究提供进一步探讨的价值。方法:实验于2006-02/06在南方医科大学实验动物中心完成。取Balb/c雌性小鼠100只,SPF级,5～6周龄,体质量15～18g,随机区组法分为造模组92只,对照组8只。用白酒灌胃法建立小鼠酒精性肝纤维化模型。造模组于灌胃的第4,8,12,16周末分别随机选取6只小鼠,眼球采血后,颈椎脱臼处死,取出肝脏,以100g/L的甲醛固定,石蜡包埋切片,苏木精-伊红染色和苦味酸-酸性复红染色,光镜观察病理变化。血标本用于测定生化及肝纤维化指标。对照组以等量的蒸馏水灌胃,于实验的第16周末处死,处理同造模组。组间比较采用单因素方差分析。结果:纳入Balb/c雌性小鼠100只,实验中造模组共23只小鼠死亡,多为急性和亚急性死亡。对照组全部成活。①灌胃初期,造模组小鼠出现精神萎靡等现象,实验开始4周后上述症状减轻,对照组小鼠则食欲正常,无嗜睡现象。②在实验刚开始1周时小鼠体质量(15.67±0.98)g,与实验开始时(16.38±0.58)g相比呈明显负增长(P<0.05)。第4,8,12,16周称质量时,造模组小鼠体质量[(16.17±0.91),(17.23±1.39),(18.27±0.85),(19.31±0.95)g]均明显低于对照组[(18.31±0.57),(19.52±0.85),(20.56±0.86),(21.41±0.95)g],(P<0.05)。③对照组小鼠肝脏表面光滑细润、色红等。造模组小鼠肝脏色泽较正常肝脏暗淡,表面充血,肝脏呈增大趋势。造模组小鼠的肝重比(肝脏湿重/小鼠体质量×100%)均大于对照组。④造模组4周时可见轻度酒精性脂肪肝病理改变,12周时酒精性肝炎改变加重并出现了纤维组织增生,16周时肝纤维化已明显形成。⑤不同时间点与对照组相比,血清中天冬氨酸氨基转氨酶、丙氨酸氨基转氨酶、天冬氨酸氨基转氨酶/丙氨酸氨基转氨酶、三酰甘油均呈升高的
- 苏俊廖彩仙周杰唐浩张守华张春兴
- 关键词：肝纤维化病理学
- 肝纤维化和肝硬化患者肝内基质细胞衍生因子-1α水平的变化被引量：9
- 2009年
- 目的观察肝纤维化和肝硬化患者肝内基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)表达情况。方法用ELISA法分别检测8例正常、10例肝纤维化、12例肝硬化病人肝组织内SDF-1α表达水平。结果正常对照组、肝纤维化组、肝硬化组的SDF-1α水平分别为(5.18±1.90)、(18.94±7.05)和(4.79±1.86)pg/mg。肝纤维化组的SDF-1α水平显著高于正常对照组和肝硬化组,而正常对照组和肝硬化组的SDF-1α水平无显著性差异。结论在肝纤维化阶段,肝脏仍具有较强的修复与再生能力,肝内表达SDF-1α增多,趋化肝干细胞向肝内定植并诱导其分化而修复肝损伤。肝硬化时,肝内SDF-1α表达水平低下,这或许是硬化肝再生与修复能力低下的重要因素,但SDF-1α水平低下的确切原因与意义还有待研究。
- 赖勇强廖彩仙廖欣鑫秦安成袁杰黄勇平王宇
- 关键词：肝纤维化肝硬化基质细胞衍生因子-1Α
- 肝内趋化因子CCL21和CCL25在不同肝组织中的表达变化被引量：4
- 2010年
- 目的观察正常肝、肝纤维化和肝硬化患者肝组织内趋化因子CCL21和CCL25的表达变化。方法ELISA方法检测9例正常肝、10例肝纤维化、11例肝硬化患者肝组织中CCL21和CCL25的含量。结果正常组、肝纤维化组、肝硬化组的CCL21含量分别为(0.14±0.21)、(0.92±0.69)和(3.22±1.45)pg/mg;肝硬化组的含量高于正常组和肝纤维化组,肝纤维化组和正常组CCL21的含量差异无统计学意义。正常组、肝纤维化组、肝硬化组的CCL25含量分别为(4.06±2.23)、(14.46±4.10)和(21.97±2.98)pg/mg;肝硬化组的含量高于正常组和肝纤维化组,肝纤维化组的含量高于正常组。结论肝脏发生纤维增生性损伤时,肝内CCL21和CCL25的含量显著增加,随着病变由肝纤维化向肝硬化阶段发展,肝内CCL21和CCL25含量也进一步升高,提示CCL21和CCL25很可能是肝纤维化和肝硬化状态下趋化骨髓源性肝干细胞迁移到肝脏修复损伤的重要因素。
- 黄勇平廖彩仙廖欣鑫秦安成袁杰赖勇强龚祖元
- 关键词：肝纤维化肝硬化趋化因子CCL21
- 免疫磁珠分选骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit^+lin^-被引量：4
- 2007年
- 目的:利用免疫磁性细胞分选系统分离纯化骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-。方法:实验于2006-07/08在南方医科大学实验动物中心完成。6～8周龄的SPF级纯系BALB/C雄性小鼠10只,体质量18～20g。收集小鼠股骨骨髓细胞,利用免疫磁性细胞分选系统,通过两步法分选纯化c-Kit+lin-:将获取的lin-细胞悬液8℃条件下1500r/min离心10min,弃上清,按80μL/107加入Buffer重悬细胞。按20μL/107加生物素抗体磁珠,混匀,4℃冰箱孵育15min,按1mL/107加入Buffer洗细胞1次,8℃条件下1500r/min离心10min,弃上清,按500μL/108加入Buffer重悬细胞。Buffer500μL润MS柱,悬液过柱后,Buffer500μL/次洗柱3次,柱子脱离磁场,加1mLBuffer,用配套柱塞推出柱中的c-Kit+lin-细胞,收集到c-kit+lin-细胞,细胞计数。取2.0×106个细胞分成10等份,流式细胞仪分析c-Kit+lin-细胞纯度,计算回收率,评估纯化效率,苔盼兰染色检测纯化前后的细胞活力。计算活细胞的百分率。细胞纯度和细胞回收率的计算:细胞纯度=分离产物中的阳性细胞数/分离细胞的总细胞数×100%,细胞回收率=分离产物中的阳性细胞数/起始标本阳性细胞总数×100%。结果:10只小鼠均进入结果分析。利用免疫磁性细胞分选系统分选出的骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-细胞纯度和回收率分别为(77.98±2.34)%,75.40%,纯化前后细胞活力不受影响。结论:免疫磁性细胞分选系统能有效分选骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-,纯度和回收率高,且不影响细胞活力。
- 张春兴廖彩仙张守华苏俊周杰朱槿肖菊花
- 关键词：骨髓免疫磁珠
- 白细胞介素3对c-kit^+Lin^-细胞的增殖作用被引量：2
- 2008年
- 目的探讨在无血清无基质的条件下,白细胞介素3(IL-3)和因子组合的不同浓度对扩增c-kit+Lin-细胞的影响。方法采用免疫磁珠法分离小鼠骨髓c-kit+Lin-细胞,在干细胞因子(SCF)、肝细胞生长因子(HGF)、FLt-3配基(FL)、促血小板生成素(TPO)和白血病抑制因子(LIF)组合中添加不同浓度的IL-3培养7d,检测细胞总数、c-kit+Lin-细胞扩增倍数及细胞凋亡率。结果未加IL-3(A组),10ng/mlIL-3(B组),20ng/mlIL-3(C组)和40ng/mlIL-3组(D组)均可显著扩增c-kit+Lin-细胞,扩增倍数7～19倍不等。随剂量加大,虽然细胞总数上升,但是超过一定浓度后c-kit+Lin--细胞扩增反而不明显。D组细胞总数扩增245.41倍,但c-kit+Lin-细胞扩增仅为15.80倍,明显低于C组(扩增c-kit+Lin-细胞为18.75倍)(P<0.05)。但D组细胞凋亡率最低,仅为4.66%。结论IL-3能协同SCF+HGF+FL+TPO+LIF有效的扩增c-kit+Lin-细胞,其表型并不受影响;但过高剂量反而促使干细胞分化。
- 张春兴廖彩仙张守华苏俊赖勇强周杰
- 关键词：肝细胞生长因子干细胞因子
- 肝细胞生长因子对c-kit^+Lin^-细胞的增殖作用被引量：1
- 2007年
- 目的探讨在无血清无基质的条件下,肝细胞生长因子(HGF)和因子组合对扩增c-kit+Lin-细胞的影响。方法采用免疫磁珠法分离小鼠骨髓c-kit+Lin-细胞,研究在干细胞因子(SCF),FLt-3配基(FL),促血小板生成素(TPO)和白血病抑制因子(LIF)组合中添加不同浓度的HGF培养7d,检测细胞总数,c-kit+Lin-细胞扩增倍数及细胞凋亡率。结果各因子组均可显著扩增c-kit+Lin-细胞,扩增倍数2￣8倍不等。其中,10ng/mlHGF组扩增c-kit+Lin-细胞效果最为显著,为8.00倍,细胞总数扩增45.43倍,细胞凋亡率为17.42%。但随剂量加大,虽然细胞总数上升,c-kit+Lin-细胞扩增反而下降。40ng/ml组细胞总数扩增80.50倍,c-kit+Lin-细胞扩增效果不明显,仅为2.87倍,细胞凋亡率最低,为5.91%。结论10ng/ml的HGF能协同SCF+FL+TPO+LIF扩增c-kit+Lin-细胞,使细胞凋亡率降低,其表型并不受影响,但过高剂量会诱导其分化。
- 张守华廖彩仙张春兴苏俊赖勇强周杰
- 关键词：肝细胞生长因子肝干细胞细胞扩增
