国家公益性行业科研专项(201005032-4)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 相关作者：陈波曾倩王毓舒俞勇孙鲲更多>>
- 相关机构：华东理工大学中国极地研究中心国家海洋局更多>>
- 发文基金：国家公益性行业科研专项中国极地科学战略研究基金上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学更多>>
- 北冰洋海单胞菌β-D-半乳糖苷酶的异源表达及酶学特性研究被引量：1
- 2015年
- 初筛表明,一株分离自北极加拿大海盆海冰心芯样品的海单胞菌（Marinomonas sp.BSi20584）具有较高的β-D-半乳糖苷酶活性,为了研究清楚其酶学性质,将经hiTAIL-PCR扩增得到的β-D-半乳糖苷酶基因（galt）与pET-28a（＋）原核表达载体结合,转入大肠杆菌BL21（DE3）。经IPTG诱导后对重组β-D-半乳糖苷酶（GALT）的表达条件进行了优化,采用金属螯合亲和层析技术制备纯酶,并对重组GALT的酶学性质进行了研究。结果显示,重组酶的最适诱导温度为20℃,在IPTG浓度为0.07mmol/L时诱导22h后,酶活和产酶量达到最大值。GALT单体分子量约为6.6×104 g/mol,天然酶为同源三聚体。GALT最适作用温度为35℃,其热稳定性较好,在60℃处理5h后,仍可保持50%以上的相对活性。GALT的最适作用pH为9.0,在pH为6.0~11.0范围内比较稳定。GALT的最适NaCl浓度为0.5mol/L,对盐度具有较高的耐受性。Mg2＋、K＋、DTT和EDTA对酶活不具有显著影响,而Mn2＋、Fe2＋对酶活有促进作用,Zn2＋和L-谷胱甘肽对酶活有抑制作用。GALT对Galβ1-4GlcNAc具有水解作用,而对Galβ1-3GalNAc和Galβ1-3GlcNAc糖苷键型没有水解能力。本研究实现了海单胞菌属菌株的β-D-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌系统中的高效表达,并系统研究了重组酶的酶学特性,为后续开展该酶的代谢适应性和潜在应用研究提供详细的酶学数据基础。
- 孙茜廖丽丁海涛刘双陈波
- 关键词：Β-D-半乳糖苷酶异源表达酶学特性
- 一株分离自北极海冰的产β-半乳糖苷酶的海单胞菌(Marinomonas sp. BSi20414)的筛选、鉴定和产酶条件研究被引量：3
- 2011年
- 从北极海冰中分离筛选出一株产β-半乳糖苷酶的菌株BSi20414,经初步鉴定,该菌株归属于海单胞属(Marino-monas),命名为Marinomonassp.BSi20414。对该菌株的产酶条件实验表明,最适产酶条件为:30℃,180 rpm摇瓶培养96 h,培养基中加1.5%(w/v)乳糖,初始pH7.0,接种量3%,500 mL三角瓶装产酶培养基80 mL。在该条件下酶活由复筛阶段的1.01 U/mL提高到条件优化后的2.92 U/mL。实验初步表明粗酶液对ONPG底物的最适作用温度为60℃,该菌株具有低温菌产高温酶的可能特点。
- 曾倩王毓舒孙鲲俞勇陈波
- 关键词：Β-半乳糖苷酶产酶条件
- 北极海洋放线菌R-527F的抗菌活性筛选、鉴定及其抗菌物质发酵条件研究被引量：4
- 2012年
- 对分离自北冰洋73°N以北海域沉积物中的一株放线菌R-527F进行分子鉴定及生物活性研究。通过对菌株的形态特征、培养性状、生理生化特征以及16S rDNA序列进行综合分析,确定该株菌为链霉菌属,暂定名为Streptomy-ces sp.R-527F。其含有聚酮类Ⅰ型(PKSⅠ)和非核糖体含硫多肽类(nonribosomal peptide synthetase,NRPS)化合物的合成基因。对其抗菌活性及活性物质发酵条件进行了研究,实验结果表明,该菌株所产生的抗菌物质对枯草芽孢杆菌具有显著抑制效果,抑菌圈直径达到18.2 mm。适合其抗菌物质的发酵条件:种子液接种量为4%,培养基初始pH为8.0,培养温度为28℃,培养时间为6 d,摇床转速为180 r.min-1,装液量为40%,为该菌株抗菌物质的进一步研究奠定发酵条件参数基础。
- 王毓舒曾倩俞勇陈波
- 关键词：放线菌抗菌活性
