国家自然科学基金(30572177)
- 作品数：13 被引量：73H指数：5
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- 肺癌细胞特异性结合肽的体内筛选及初步鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的筛选能与肺癌细胞特异性结合的多肽并初步鉴定其亲和力和特异性。方法用人肺癌细胞A549使裸鼠致瘤,尾静脉注射肽库。取荷瘤鼠的肿瘤组织,用体内噬菌体展示技术进行筛选;经过3轮体内筛选,获得在肿瘤组织中富集的噬菌体;利用ELISA和细胞免疫化学DAB染色法初步鉴定各克隆亲和力、特异性;对阳性克隆行DNA测序,利用生物信息学对此多肽进行分析、比对。结果随机挑选的10个单克隆中,8个均对A549细胞具有较高亲和力,其中3号克隆亲和力最高,其可特异性结合肺癌细胞A549和NCI-H1299,且对A549的亲和力强于NCI-H1299。DNA测序结果显示该序列与美国国立生物技术信息中心(NCBI)GenBank DNA序列数据库和Swiss-Prot蛋白数据库中的已知基因和蛋白无同源性。结论筛选出了能与肺癌细胞特异性结合的多肽。
- 潘琴石磊潘雪刁巫玮金桂芳臧林泉
- 关键词：肺癌细胞特异性结合肽
- 紫苏醇对肺癌细胞的体外药效作用及毒理学评价被引量：3
- 2010年
- 目的研究紫苏醇对肺癌细胞的体外药效作用,及其对小鼠的毒理学评价。方法以质量浓度为0.637-6.829 mg.L-1的紫苏醇对肺鳞癌细胞NCI-H1299和肺腺癌细胞A549作用24 h后,用噻唑蓝（MTT）比色法、Hoechst 33258荧光染色法检测凋亡率和细胞毒性。取随机分组的小鼠,将紫苏醇以灌胃方式给药,剂量范围为5.736-1.912 g.kg-1,观察小鼠中毒症状,按照改良寇氏法计算紫苏醇的半数致死量（LD50）以及95%平均可信限。结果紫苏醇呈浓度依赖性抑制NCI-H1299和A549细胞生长,质量浓度为1.707 mg.L-1时,对NCI-H1299和A549细胞的抑制率分别为93.97%和95.45%,Hoechst33258荧光染色观察到两株细胞均出现细胞核浓缩变亮,呈分叶状、数量显著减少等凋亡特征变化。小鼠给药后出现中毒症状,其程度与紫苏醇呈剂量依赖性,测得紫苏醇LD50和95%可信限为（3.696±0.504）g.kg-1.结论紫苏醇体外对NCI-H1299和A549细胞的生长有显著抑制作用,口服紫苏醇有相对高的LD50和治疗指数。
- 李询罗军强周捷冯文彬刘海洋臧林泉
- 关键词：肺癌细胞凋亡毒理学
- 利用RNAi沉默KIAA0280后对缺氧诱导大鼠神经元凋亡的影响被引量：2
- 2008年
- 目的利用RNA干扰（RNAi）技术，观察脑缺血相关新蛋白KIAA0280被特异性沉默后对正常神经元和缺氧诱导神经元凋亡的影响。方法取新生大鼠培养至5-7d的神经元，经由密闭容器引起缺氧诱导神经元凋亡模型。采用RNAi技术封闭KIAA0280的表达，观察该基因被封闭后对正常神经元的生长以及缺氧诱导神经元凋亡的作用和影响。结果脂质体转染KIAA0280基因特异性siRNA 12、24h后对正常细胞生长具有一定的影响；在此基础上缺氧4、8h，发现RNAi组的神经元对缺氧诱导的神经元凋亡比对照组对缺氧更加敏感，更易受损伤。结论KIAA0280对正常神经元具有一定的作用，并且对缺氧诱导凋亡神经元具有一定的保护作用。
- 黄海潮潘雪刁金桂芳巫玮潘琴石磊臧林泉
- 关键词：RNAI缺氧神经元凋亡
- 肾癌特异性配体多肽ZT-2筛选及新标志物的研究
- 2009年
- 目的寻找肾癌早期诊断和靶向治疗的标志物。方法以肾癌细胞株A498为靶细胞，正常肾细胞株HK-2为吸附细胞，37℃下对噬菌体十二肽库进行4轮减性筛选。挑取单克隆采用ELISA方法初步鉴定噬菌体克隆亲和力；阳性克隆提取质粒，测序后合成多肽，鉴定多肽的亲和力及特异性。结果经ELISA初步鉴定，随机挑选20个单克隆中，2号多肽对A498细胞亲和力最高（AZT-2／AN月比值为3．15），命名为Phage-ZT-2。细胞免疫荧光试验证明，合成的相应多肽FITC-ZT-2对A498细胞具有特异性结合。利用荧光标记的ZT-2检测肾癌组织芯片，肾癌组织ZT-2的荧光吸光度（A）值为0．453±0．123，正常组织及非肾癌炎性组织为0．148±0．075，2组间比较差异有统计学意义（t=2．776，P〈0．01）。结论成功筛选出与肾癌细胞特异性结合的多肽ZT-2，为肾癌的早期诊断和靶向治疗提供了实验依据。
- 涂响安臧林泉赵亮邓立文王文卫赵良运梁辉曾令友庄锦涛
- 关键词：肾肿瘤药物筛选试验抗肿瘤
- 利用肺癌特异性结合多肽ZS-6筛选肺癌相关标志物被引量：6
- 2010年
- 目的利用本实验室已获得的与肺癌特异性结合的十二肽ZS-6从人类肺癌cDNA文库中筛选出肺癌相关标志物,为肺癌的临床早期诊断和靶向治疗奠定基础。方法以生物素标记的十二肽ZS-6为探针,筛选人类肺癌cDNA噬菌体展示文库,经过四轮减性筛选后,挑取与ZS-6特异性结合的噬菌体单克隆、扩增、纯化,再通过PCR技术扩增、产物纯化后,进行DNA测序,测序结果经过生物信息学分析。结果筛选出18个与ZS-6特异性结合的噬菌体克隆,测序结果显示其中1个为未知功能的新基因,其余的均已确定为肿瘤相关基因。结论从人类肺癌cDNA噬菌体展示文库中筛选出潜在的肺癌肿瘤标志物,为肺癌的早期诊治奠定基础。
- 冯文彬潘雪刁周捷石磊罗军强李询臧林泉
- 关键词：CDNA文库肺癌肿瘤标志物
- 噬菌体随机肽库淘选肺癌细胞NCI-H1299特异性结合多肽被引量：7
- 2009年
- 目的利用噬菌体展示肽库筛选出与肺癌NCI-H1299细胞特异性结合的多肽,鉴定其特异性和亲和力,为寻找肺癌早期诊断和治疗标志物打下基础。方法以肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,肺二倍体成纤维细胞MRC-5为吸附细胞,在37℃下对噬菌体随机十二肽库进行三轮减性筛选,挑取单克隆ELISA初步鉴定噬菌体克隆亲和力;阳性克隆提取质粒,测序后合成多肽,鉴定多肽的亲和力及特异性。结果经ELISA初步鉴定,随机挑选的20个单克隆中,其中6号对NCI-H1299亲和力最高,将其命名为PhageZS6。细胞免疫荧光试验进一步证明,合成的相应多肽FITCZS6对NCI-H1299具有高亲和力。结论利用噬菌体随机十二肽成功筛选出与肺癌细胞具有较高亲和力的多肽ZS6,为肺癌的早期诊断和靶向治疗奠定基础。
- 石磊潘雪刁王军业潘琴巫玮金桂芳房思练侯炳忠何兴祥臧林泉
- 关键词：噬菌体肽库多肽肺癌
- 抗人肺癌蛋白质肽类药物的研究
- 2008年
- 陈耀宗臧林泉
- 关键词：肺癌
- 从噬菌体随机肽库中筛选及鉴定肺癌特异性多肽
- 2009年
- 目的利用Phage display随机肽库筛选出与肺癌NCI-H1299细胞特异性结合的多肽,并通过ELISA和免疫组化鉴定其特异性和亲和力,为寻找肺癌早期诊断和治疗标志物打下基础。方法以肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,肺二倍体成纤维细胞MRC-5为吸附细胞,在37℃下对噬菌体随机十二肽库进行四轮减性筛选,挑取单克隆、扩增纯化噬菌体、并经ELISA初步鉴定噬菌体克隆亲和力;对阳性克隆提取质粒,测序后合成多肽,多肽标记荧光素FITC,以其在肺癌组织芯片上鉴定多肽的亲和力及特异性。结果经ELISA初步鉴定,随机挑选的18个单克隆中,其中3号对NCI-H1299亲和力最高,将其命名为PhageZL-3。细胞免疫荧光试验进一步证明,荧光素标记的多肽FITC-ZL-3对NCI-H1299具有高亲和力。结论利用噬菌体随机十二肽成功筛选出与肺癌细胞具有较高亲和力的多肽ZL-3,为肺癌的早期诊断和靶向治疗奠定基础。
- 邓伟雄罗时敏蓝代颜梁伟灿臧林泉
- 关键词：噬菌体肽库多肽肺癌
- 原代神经元及PC12细胞用于药物体外急性毒性评价的实验研究被引量：2
- 2009年
- 【目的】研究原代神经元及PC12细胞用以评价药物或化合物的急性毒性，以判断是否可以替代动物实验，为建立稳定的体外高通量筛选化合物和药物的急性毒性评价体系奠定基础。【方法】原代分离培养大鼠皮质神经元，传代培养大鼠类神经元细胞——PC12细胞，取17种药物和化合物，分别稀释不同浓度，与上述两种细胞分别孵育24h，与空白对照组比较，以MTT法检测药物／化合物对细胞的抑制率，据此量效曲线计算出IC50，与大鼠口服LD50进行相关性分析。【结果】体外神经元的IC50与体内LD50相关性为：R^2=0．7253，PC12细胞毒性检测结果的IC50与动物体内急性毒性LD50相关性为：R^2=0．6441，二者均有明显相关性。【结论】利用体外分离培养的原代神经元以及PC12细胞，在短时间（24h）内可以评价药物或化合物的急性毒性，并可以预测化合物对人及动物的毒性，基本可以替代或减少动物实验。
- 巫玮周捷潘雪刁潘琴石磊臧林泉
- 关键词：细胞毒性免疫神经元PC12细胞
- 花椒挥发油抗肿瘤药理作用研究被引量：41
- 2006年
- 目的 提取花椒挥发油，并对其进行抗人肺癌杀伤及诱导凋亡试验。观察花椒是否具有抗肿瘤活性，并确定其最小杀伤肿瘤细胞的剂量；同时观察诱导细胞凋亡的最小剂量以确定其抗肿瘤机制。方法 利用改进水蒸气法提取花椒挥发油，利用Tween-80作为助溶剂对花椒倍比稀释，对人A549肺癌细胞进行抗肿瘤试验，利用SRB方法和形态学确认细胞杀伤率，采用荧光染料Hochest33258染色检测细胞的凋亡水平。将试验同时分为时间-效应组（24、48、72h）和剂量-效应组（0．125～16mg／ml）。结果 ≥4mg／ml以上剂量的花椒挥发油提取物对A549具有较高的抑瘤率，达到87．9％；最低抑瘤浓度为1mg／ml，抑瘤率为40．2％。形态学观察结果表明，被杀伤的细胞体积萎缩，细胞膜皱缩，成活细胞数稀疏，数量明显低于空白对照组。不同给药时间的研究结果表明，药物最佳作用时间为48h及72h。利用低于杀伤浓度的剂量作用于A549进行研究，观察其对A549细胞凋亡的影响，利用Hochest33258观察对细胞核的影响。结果表明，0．51mg／ml剂量的花椒挥发油提取物作用于细胞72h对肿瘤细胞具有明显的诱导细胞凋亡作用。结论 高浓度（4～16mg／m1）的花椒挥发油对人肺癌A549细胞株有杀伤作用，低浓度（1mg／ml）的花椒挥发油对A549有诱导细胞凋亡的作用。
- 臧林泉胡枫韦敏由天辉何波宁宗李丽
- 关键词：花椒抗肿瘤
