海南省卫生厅科研基金(2006-61)
- 作品数：4 被引量：7H指数：1
- 相关作者：刘贤杰朱中元王海波陈奎霖马宏伟更多>>
- 相关机构：海南医学院附属新华医院海南大学海口市结核病防治所更多>>
- 发文基金：海南省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌ESAT-6蛋白免疫优势肽段的重组表达、纯化与鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的构建结核分枝杆菌(MTB)ESAT-6免疫优势肽段(ESAT-6P)的基因表达工程菌,以获得大量重组肽段。方法根据编码ESAT-6P的MTB基因序列,设计1对特异引物,通过PCR技术从H37Rv基因组DNA扩增出ESAT-6P编码基因,目的片段克隆到原核表达载体pET-30 a中,构建N端带有6H is-tag的表达载体。将重组表达载体转化E.coliBL21(DE3)后,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析表达产物,斑点免疫结合法(D IBA)鉴定重组肽段的免疫反应性。结果成功诱导表达ESAT-6蛋白的免疫优势肽段,与表达载体氨基酸序列融合后,表达产物相对分子质量约为16 500,该重组肽段以包涵体形式存在。D IBA结果表明,该重组肽段可被结核患者血清特异识别。结论获得MTB ESAT-6免疫优势肽段的基因表达工程菌,为将此重组肽段应用于结核诊断试剂和新型疫苗的研制奠定了基础。
- 王海波朱中元刘贤杰
- 关键词：结核分枝杆菌抗原表位
- 重组结核分枝杆菌38KDa蛋白抗原制备及其血清学诊断价值被引量：4
- 2008年
- 目的通过基因工程技术获取纯化的结核分枝杆菌重组38KDa蛋白并评价其血清学诊断价值。方法在大肠杆菌中表达38KDa蛋白,通过亲和层析纯化并复性后用于ELISA检测结核患者血清中特异性抗结核抗体。结果38KDa蛋白表达量占总蛋白的22.80%,以包涵体的形式存在。纯化复性后的蛋白抗原检测54例肺结核患者敏感性为62.96%,其中检测痰涂阳性和痰涂阴性患者的敏感性分别为64.29%和62.50%,二者无显著性差异(χ2=0.02,P>0.05),检测38KDa抗体特异性为84.38%。另外,通过与结核蛋白芯片检测,结果比较发现研制的重组38KDa蛋白免疫活性与国外进口的蛋白免疫活性相当。结论制备的重组38KDa蛋白抗原具有血清学诊断价值,可用于结核病诊断试剂的开发。
- 刘贤杰朱中元陈奎霖
- 关键词：结核分枝杆菌血清学诊断
- 结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的表达及纯化研究被引量：1
- 2008年
- 目的构建表达结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的表达系统,建立表达及纯化方法,为其应用打下基础。方法根据ESAT-6的基因序列设计引物,从结核菌基因组DNA中扩增基因,酶切后插入表达载体,测序证实后转入大肠杆菌JM109菌株,经IPTG诱导表达,产物经谷胱甘肽-琼脂糖凝胶法纯化。结果ESAT基因产物大小、酶切片断大小和载体的大小与设计一致、ESAT-6基因测序的结果与目的基因完全符合。表达纯化的蛋白的大小与蛋白质分子量标准比较一致。结论构建结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的表达载体成功,纯化出目的蛋白。
- 马宏伟朱中元罗越华王海波黄惜刘贤杰
- 关键词：结核分枝杆菌纯化
- 结核分支杆菌蛋白抗原表位研究进展被引量：1
- 2008年
- 寻找结核分支杆菌中有应用价值的蛋白抗原正逐渐成为热点,而抗原表位作为蛋白抗原引起机体免疫应答的关键部位,其研究进展对在分子水平上研究结核菌各种蛋白抗原的免疫学应用将有着很大的帮助。
- 刘贤杰朱中元曾会才
- 关键词：抗原表位变态反应和免疫学
