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基于无细胞蛋白表达的蛋白质微阵列技术被引量：3: 2010年; 高密度蛋白质微阵列构建的主要瓶颈之一是蛋白质的来源和蛋白质在载体表面的稳定性问题。传统的蛋白质微阵列构建依赖于对大量蛋白的分别表达、纯化和固定,这种方法费时费力,且不易维持蛋白质的稳定性。无细胞蛋白表达技术在蛋白质微阵列构建中的应用,使得目标蛋白可以在载体表面直接从固定的DNA和RNA模板合成,克服了传统构建方法的局限。本文简要介绍无细胞蛋白表达的蛋白质微阵列技术及其应用研究进展。; 吕林莉刘必成; 关键词：蛋白质微阵列蛋白质组学蛋白质芯片生物标志物

基于琼脂糖膜为载体的抗体芯片工作条件的优化被引量：2: 2008年; 目的:优化以琼脂糖修饰的玻片为载体的抗体微阵列的制备方法,提高微阵列信噪比及检测灵敏度。方法:选取单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)作为待检的靶蛋白,在琼脂糖膜上首先固定MCP-1捕获抗体,经过洗涤、封闭,然后依次加入标准抗原、生物素标记的检测抗体以及亲和素标记的cy3,分别孵育、洗涤后,激光共聚焦扫描仪扫描获取图像,分析各点的荧光强度,根据荧光强度确定捕获抗体的最佳固定时间、温度以及最适宜的洗涤缓冲液。结果:与4、37℃过夜固定相比,捕获抗体室温(25℃左右)过夜固定时,蛋白质在载体上的固定效率和反应活性最高;捕获抗体过夜固定比固定2 h获得更高的检测灵敏度;另外,通过比较相同pH值不同溶质缓冲液的洗涤效应,pH 7.4的缓冲液PBST可获得更优信号强度。结论:本研究优化了以琼脂糖修饰的玻片为载体的蛋白质微阵列的反应条件,提高了微阵列的检测灵敏度。; 朱颖吕林莉陆祖宏刘必成; 关键词：抗体芯片琼脂糖玻片灵敏度

上皮细胞间充质转化的研究进展被引量：3: 2010年; 上皮细胞发生间充质转化（EMT）是近年细胞生物学领域的重大发现，南于其与胚胎形成、组织再生以及上皮细胞肿瘤恶性进展等方面均存在重要联系，因而EMT形成机制的相关研究正成为临床和基础研究领域十分活跃的课题，对于众多疾病的防治具有深远影响。本文综述当前关于EMT形成机制的最新认识，着重比较不同类型EMT的形成机制，并分析其潜在的临床意义。; 伍敏刘必成; 关键词：上皮细胞肿瘤间充质细胞生物学 EMT 细胞发生

白蛋白对肾小管上皮细胞血管紧张素转换酶表达的影响: 2008年; 目的观察白蛋白对肾小管上皮细胞血管紧张素转换酶（ACE）mRNA和蛋白水平表达的影响，并探讨尿蛋白激活肾脏局部肾素．血管紧张素系统（RAS）的机制。方法分别采用2．5、5、10g／L的牛血清白蛋白（BSA）刺激人近端肾小管上皮细胞株（HK-2）6h和12h。并分别采用实时定量PCR和Western印迹检测ACEmRNA和蛋白水平的表达。结果与对照组相比，随着BSA刺激浓度的增加，HK-2细胞ACEmRNA表达均显著增加（均P〈0．05）。同时，Western印迹显示ACE蛋白表达也均显著增加（均P〈0．05）。另外，BSA10g／L作用于HK-2细胞6h和12h后，ACEmRNA表达显著增加（均P〈0．05）；Western印迹显示ACE蛋白也显著增加（均P〈0．05）。结论BSA可显著增加HK-2细胞ACE表达，此作用可能是导致肾间质局部AngⅡ蓄积从而启动肾小管间质纤维化的重要机制之一。; 高珺刘必成张晓良宫壮弓玉祥; 关键词：血管紧张素转换酶白蛋白肾小管上皮细胞

基于夹心免疫分析的抗体微阵列的构建: 2008年; 目的:建立一种基于夹心免疫分析的抗体微阵列构建的优化方法。方法:将MCP-1的捕获抗体点样于修饰后的玻片,标准抗原加样覆盖所点阵列,生物素标记抗体和链酶亲和素-cy3依次加样孵育,激光共聚焦扫描仪获取图象并进行数据分析。对捕获抗体浓度、封闭液种类、系统可重复性和定量检测能力、两种因子平行性检测对信号分析的影响及点样后玻片稳定性进行分析和评价。结果:随着捕获抗体浓度的升高,信号强度逐渐增加;2%BSA/PBS和5%酪蛋白可作为本系统的封闭液;所构建系统具有较好的可重复性(组内变异1.3%,组间变异8.7%)和定量分析能力(所建立的抗原浓度-相对信号强度标准曲线相关系数达0.9995);并实现了两因子的平行性分析和点样后玻片的稳定性。结论:确立了基于夹心免疫分析的抗体微阵列构建的优化方法,为进一步构建多因子定量检测抗体微阵列奠定了基础。; 吕林莉刘必成朱颖陆祖宏; 关键词：蛋白质芯片免疫分析

临床蛋白质组学研究中值得注意的问题: 2008年; 后基因组时代的到来使临床蛋白质组学成为各种疾病的研究热点。然而，由于研究过程中一些共识性规范的缺乏，研究设计缺乏合理性和科学性，尤其是在研究分组设计、样本量、样本处理、数据质量控制、统计学评价以及独立的结果验证等环节，导致研究结果难以充分解释或重复性较差。本文针对目前临床蛋白质组学研究存在的问题结合文献进行综述。; 吕林莉王丽梅刘必成; 关键词：临床蛋白质组学后基因组时代数据质量控制样本量

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江苏省自然科学基金(BK2007709)