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干细胞标志物Nanog的检测在胃癌诊断中的意义被引量：32: 2009年; 目的检测胃癌患者癌组织和癌旁组织中干细胞标志物Nanog的表达水平并探讨其与临床病理参数的相关性。方法用RT-PCR和Real-timePCR检测62例胃癌患者癌组织和癌旁组织中Nanog的表达。结果RT-PCR结果显示胃癌组织和癌旁组织中Nanog的表达阳性率分别为58.1%(36/62)、9.7%(6/62),差异有统计学意义(P<0.0001);Real-timePCR结果表明胃癌组织中Nanog相对表达水平高于癌旁组织(P<0.05);胃癌组织中Nanog阳性表达与肿瘤分化状态相关,低、未分化组高于中、高分化组(P<0.05),但与年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、TNM分期和有无淋巴结转移无关。结论Nanog表达与胃癌的发生及其分化状态相关,可作为胃癌诊断的一个新的分子标志。; 陈忠许文荣钱晖朱伟王胜步雪峰毛飞曹慧玲徐学静; 关键词：胃癌 NANOG PCR 肿瘤干细胞

TNFα-Tumstatin融合基因腺病毒载体的构建及其在人脐带间质干细胞中的表达被引量：1: 2008年; 目的:构建携带绿色荧光蛋白的TNFα-Tumstatin融合基因腺病毒表达载体,转染人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)。方法:设计含有GM-CSF信号肽序列和BglⅡ及HindⅢ酶切位点的引物,PCR扩增TNFα-Tumstatin,将扩增产物亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后转化含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183中同源重组。筛选获得含有融合基因的重组腺病毒质粒,酶切鉴定并测序。重组病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞,经过包装、扩增后感染hUCMSCs并检测细胞内融合基因的表达。结果:重组腺病毒质粒经PCR和PacⅠ酶切鉴定,证实含有TNFα-Tumstatin融合基因,测序结果和设计片段的序列一致。重组腺病毒感染的hUCMSCs表达绿色荧光蛋白和融合基因。结论:成功构建了TNFα-Tumstatin融合基因的腺病毒表达载体,能高效率感染hUCMSCs,为进一步研究融合基因修饰的hUCMSCs抗肿瘤效应奠定了基础。; 周忠海许文荣朱伟乔纯王兴忠陈圆司煜安徐静周洪兴张蕾蕾李继刚钱晖; 关键词：腺病毒载体融合基因细胞转染

BMI-1干扰基因重组腺病毒质粒的构建及鉴定: 2008年; 背景:BMI-1的表达对于维持干细胞特别是造血干细胞、神经干细胞、肿瘤干细胞的自我更新能力是不可缺少的。目的:以细菌内同源重组法构建携带BMI-1干扰基因的重组腺病毒载体,制备重组腺病毒pShuttle-H1-AdEasy-1-P1P2/P3P4。设计、时间及地点:开放性实验,于2006-02/2007-08在江苏大学医学技术研究所完成。材料:限制性内切酶由NewEngland BioLabs提供,腺病毒骨架质粒pAdEasy-1、大肠杆菌BJ5183、Ad293细胞由南京师范大学生科院分子医学生物技术江苏省重点实验室惠赠。方法:采用细菌内同源重组法构建RNA干扰腺病毒载体pShuttle-H1,PmeⅠ线性化质粒,通过同源重组腺病毒骨架蛋白pAdeasy-1,得到重组的腺病毒干扰质粒;经PacⅠ线性化后用脂质体转染方法转染293A细胞,收获腺病毒重组病毒子,以未转入小干扰RNA片段的重组质粒为对照,包装后收集细胞,反复裂解细胞获得腺病毒。主要观察指标:腺病毒质粒重组构建及鉴定情况。结果:经酶切鉴定,已成功构建siRNA的重组腺病毒表达载体pShuttle-H1-AdEasy-1-P1P2/P3P4,获得了重组病毒子。结论:利用新型腺病毒载体pAdeasy-1系统可在短期内制备BMI-1干扰基因的腺病毒表达载体,并制备出重组腺病毒P1P2/P3P4。; 朱伟许文荣乔纯钱晖; 关键词：SIRNA BMI-1 腺病毒载体

胃癌周围淋巴结组织间充质干细胞的分离和鉴定: 2016年; 目的试分离培养胃癌患者周围淋巴结组织中的间充质干细胞(h GCL-MSCs),并鉴定其生物学特性。方法采用组织块贴壁法分离培养24例胃癌患者周围淋巴结组织,通过测定生长曲线、细胞周期、RT-PCR、染色体分析、免疫组化染色、成骨成脂诱导染色及裸鼠致瘤等实验,评价其生物学特性,并与人骨髓间充质干细胞(h BM-MSCs)进行比较。结果 24例胃癌患者周围淋巴结组织中分离培养出3例h GCL-MSCs;生长曲线试验发现,h GCL-MSCs增殖速率高于h BM-MSCs;染色体分析示其核型正常,裸鼠致瘤实验未见致瘤;RT-PCR检测其表达Oct-4、Nanog、ABCG2、CD44、CD73、α-SMA、Bmi-1等干细胞相关基因;免疫组化染色结果表明,h GCL-MSCs中α-SMA、P53、ABCG2染色呈强阳性,PCNA染色呈弱阳性。结论 h GCL-MSCs与h BMMSCs的生物学特性相似,对研究胃癌微环境及其发生具有重要意义。; 龚浩李锡丁许文荣; 关键词：胃癌间充质干细胞肿瘤微环境

骨髓间质干细胞突变的致瘤肿瘤干细胞分离及培养: 2009年; 目的建立合适的骨髓间质干细胞突变的肿瘤细胞系F6(肿瘤干细胞)分离及体外长期培养方法并探讨其生物学特性。方法采用抗CD133-PE抗体经流式细胞仪分选F6肿瘤干细胞(F6 CSCs),研究不同培养体系对F6 CSCs体外生长的影响,探讨最适体外培养条件。结果一次分选获得F6 CSCs纯度达到80%。分选的F6 CSCs对Balb/c小鼠有体内致瘤能力,在含2%胎牛血清的L-DMEM营养液中可以长期稳定的培养,其CD133表面标志的表达维持在68.87%。结论低浓度胎牛血清的培养液能维持F6 CSCs的生长并保留其相应的生物学特性,这为肿瘤干细胞体外培养及研究提供了新的思路和方法。; 徐学静许文荣钱晖朱伟张徐曹慧玲陈忠; 关键词：肿瘤干细胞间质干细胞 CD133

髓系白血病干细胞培养及其特征鉴定被引量：1: 2008年; 目的对急性髓系白血病(AML)骨髓单个核细胞进行体外培养,获得白血病干细胞并进行特征鉴定。方法体外培养AML患者的骨髓单个核细胞,观察其形态学特征、长期存活及增殖特性,用染色体分析和流式细胞分析技术研究其核型和细胞表面标志,用RT-PCR技术分析其nucleostemin、Bmi-1、ABCG2、prominin1、OCT4、Nanog等干细胞相关基因的表达。结果培养的白血病细胞呈集落样悬浮生长,在体外能存活12个月以上并保持增殖特性。染色体核型呈亚四倍体。表达上述干细胞相关基因。细胞表面表达CD38、CD29、CD44和HLA-DR,弱表达CD19和CD71,不表达CD34、CD13、CD2和CD105。结论经培养获得的白血病细胞,具备肿瘤干细胞的一些特征,提示为白血病干细胞。; 周忠海许文荣王兴忠邱国强谢晓宝周洪兴钱晖阴晴朱伟徐静司煜安; 关键词：白血病干细胞基因表达

慢病毒转染大鼠骨髓间质干细胞条件优化及其性质研究: 目的建立慢病毒载体稳定转染大鼠骨髓间质干细胞的方法并研究转染后细胞性质.方法采用基于HIV-1的VSV-G假膜化的慢病毒载体转染大鼠骨髓来源的间质干细胞；研究不同转染条件包括感染复数、感染方式、感染次数对转染效率的影...; 张徐朱伟王梅曹慧玲徐学静钱晖许文荣; 关键词：间质干细胞基因治疗慢病毒转染

干细胞标志物ABCG2的检测在胃癌诊断中的意义被引量：6: 2009年; 目的检测干细胞标志物ABCG2在胃癌患者癌组织、癌旁组织中的表达,探讨其与临床病理因素的相关性及作为胃癌诊断新的分子标志物的可能性。方法收集62例胃癌患者手术切除的癌组织和对应的癌旁组织,用RT-PCR检测ABCG2的mRNA表达,用western blot和免疫组织化学在蛋白质水平上验证胃癌和癌旁组织ABCG2的表达,分析ABCG2在胃癌组织的表达与临床病理参数的相关性。结果胃癌组织ABCG2 mRNA的阳性表达率为61.3%(38/62),癌旁组织为11.3%(7/62),差异有统计学意义(P<0.01);在蛋白质水平上胃癌组织ABCG2的表达与肿瘤分化状态相关,低、未分化组高于中、高分化组(P<0.05),但与年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、TNM分期和有无淋巴结转移无关。结论胃癌组织中ABCG2的表达与肿瘤分化状态相关,可望作为胃癌诊断的新的分子标志物。; 钱晖陈忠朱伟王胜步雪峰毛飞曹慧玲徐学静许文荣; 关键词：胃癌 ABCG2 RT-PCR

白血病细胞、多种肿瘤细胞及胃癌组织中pokemon基因的定量检测被引量：1: 2008年; 目的建立检测pokemon基因表达的实时荧光定量PCR的方法,用以研究pokemon在白血病细胞、多种肿瘤细胞株及胃癌组织中的表达水平。方法通过RT-PCR、T-A克隆、real-time PCR等方法精确测定并比较pokemon基因在白血病细胞、人结肠癌细胞株(SW480)、人胃癌细胞株(SGC)、人肺癌细胞株(LTEP)、人髓系白血病细胞株(U937)、人前列腺癌细胞株(PC3)、人宫颈癌细胞株(HELA)、人内皮细胞株(UEVC-304)、健康人外周血单个核细胞(PBMC)、胃癌组织中的表达水平。绘制pokemon基因real-time PCR的标准曲线。结果急性淋巴细胞白血病(ALL)中pokemon的表达显著高于急性粒细胞白血病(AML)和慢性粒细胞白血病(CML)及健康人PBMC(P<0.05);SW480中的表达量明显高于SGC、LTEP、U937、PC3、HELA和UEVC-304(P<0.05);胃癌组织表达量高于胃癌旁组织,阳性率为5/7。结论建立的测定pokemon基因表达的real-timePCR方法稳定、准确,pokemon基因可以作为某些肿瘤的一个新的靶点,其表达水平的检测可作为判断某些肿瘤发生的参考指标。; 徐静许文荣钱晖朱伟李继刚周洪兴周忠海阴晴司煜安张蕾蕾; 关键词：POKEMON 肿瘤实时定量PCR 白血病

人脐带间质干细胞的分离纯化及生物学特性鉴定被引量：4: 2008年; Objective To isolate mesenchymal stem cells(MSCs)from human umbilical cord and investigate the basic biological characteristics.Methods Human umbilical cord mesenchymal stem cells(hUCMSCs)were separated from culture of tissue adherence and the biological characteristics,including morphologic appearance,surface antigens,growth curve,cell cycle,cytogenetic features,differentiation potential and gene expression,were investigated.Results After two weeks of incubation,fibroblast-like cells appeared to be dominant.During the second passage the cells presented a homogeneous population of spindle fibroblast-like cells.Flow cytometry analysis revealed that CD29,CD44,CD95,CD105 and HLA-I were expressed on the surface of cells,but there was no expression of hematopoietic lineage markers,e.g.,CD34,CD38,CD71 and HLA-DR.Chromosomal analysis showed the cells kept normal karyotype.The cell cycle at the third passage showed the percentage of G0/G1,G2/M and S phase were 88.86%,5.69% and 5.45% respectively.The assays in vitro demonstrated the cells exhibited multipotential differentiation into osteogenic and adipogenic cells.Both BMI-1 and nucleostemin genes,expressed in adult MSCs from bone marrow,were also expressed in hUCMSCs.Conclusion Here we show the umbilical cords may be a novel alternative source of human MSCs for experimental and clinical applications,which almost have the same biological characteristics of human adult MSCs.; 乔纯许文荣朱伟胡嘉波钱晖阴晴杨欢王兴忠严永敏毛飞陈永昌; 关键词：间质干细胞脐带分化

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江苏省自然科学基金(BK2007705)

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