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磁珠富集法筛选实验豚鼠微卫星分子标记被引量：5: 2010年; 目的直接从实验豚鼠基因组DNA中筛选获得微卫星分子标记。方法应用磁珠和生物素标记的微卫星探针与豚鼠基因组酶切片段杂交,捕获200～1000 bp含有微卫星序列的DNA片段,连接到pMD-18V载体中,转化到感受态细胞E.coli DH5α中构建富集微卫星序列的小片段插入文库。然后用PCR法进行筛选。结果从约2000个转化子中获得240个阳性克隆。对其中98个进行了测序,并成功设计豚鼠微卫星引物17对。结论经过优化的磁珠富集法能够稳定、高效地获得豚鼠微卫星标记。本研究获得的微卫星位点将成为豚鼠遗传学研究的有力工具。; 朱亮蔡月琴屠珏应华忠徐剑钦陈民利; 关键词：磁珠富集法微卫星

浙江省不同地区实验兔血液蛋白多态性研究: 目的研究浙江省不同产地实验兔血液蛋白的多态性,了解各地实验兔的遗传背景,指导优良品系的选育。方法选择兰溪、农科院、上虞和余姚等地生产的实验兔的11个血液蛋白位点进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,根据电泳图谱分析基因频率、Hardy...; 赵伟春徐孝平李莉王德军喻琦陈民利; 关键词：血液蛋白多态性基因频率杂合度; 文献传递

WHBE兔血液蛋白的特性被引量：4: 2009年; 目的比较大耳白黑眼兔(WHBE兔)与日本大耳白兔(JW兔)和新西澜兔(NZW兔)血液蛋白的多态性,从分子水平了解WHBE兔特殊性状的遗传背景。方法采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对WHBE兔、JW兔和NZW兔血液中的前白蛋白(Pr),后白蛋白(Po),前转铁蛋白1(Prt1),前转铁蛋白2(Prt2),转铁蛋白1(Tf1),转铁蛋白2(Tf2),后转铁蛋白(Ptf),慢α球蛋白(Sag)、血红蛋白(Hbα、Hbβ)和白蛋白(Alb)共11个蛋白位点进行检测。结果Pr、Ptf、Hbα、Hbβ、Alb、Po、Sag和Prt2在所有实验兔个体中的表型一致,而Tf1、Tf2和Prt1的表型在各实验兔品系间存在显著差异。在Tf1位点,NZW兔以BC表型为主,无AA型;JW兔只有AA型,而WHBE兔以AB型为主。在Tf2位点,NZW兔有AA型,而JW兔和WHBE兔无AA型。在Prt1位点,NZW兔无AB、BB和BC表型而有AC表型。NZW兔蛋白位点的平均杂合度大于JW兔和WHBE兔。JW兔与WHBE兔的遗传距离最近。结论Tf1、Tf2和Prt1可作为区分NZW兔、JW兔和WHBE兔的特征标记,并且与WHBE兔特殊性状形成有关。JW兔与WHBE兔的亲缘关系最近。; 陈民利赵伟春应华忠徐孝平王德军鲍静; 关键词：血液蛋白多态性基因频率杂合度

浙江省不同地区实验兔血液蛋白多态性研究被引量：2: 2010年; 目的研究浙江省不同产地实验兔血液蛋白的多态性,了解各地实验兔的遗传背景,指导优良品系的选育。方法选择兰溪、农科院、上虞和余姚等地生产的实验兔的11个血液蛋白位点进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,根据电泳图谱分析基因频率、Hardy-weinberg平衡状态、遗传变异程度和遗传相似性。结果 Pr、Ptf、Hbα、Hbβ和Alb在所有实验兔中表现为单态,其余蛋白位点呈多态。各蛋白位点的变异程度Prt1>Sag>Tf1>Po>Tf2>Prt2。各地实验兔蛋白位点平均杂合度为兰溪>农科院>上虞>余姚。农科院与余姚实验兔间的遗传距离最近,上虞与兰溪实验兔的亲缘关系最远,遗传相似系数分别为0.7938和0.7687。结论血液蛋白多态性反映了浙江省不同地区生产的实验兔的遗传背景,为实验兔的选育提供了实验依据。; 赵伟春徐孝平李莉王德军喻琦陈民利; 关键词：血液蛋白多态性基因频率杂合度

应用微卫星标记研究Dunkin Hartley豚鼠封闭群的遗传背景被引量：9: 2011年; 目的检测我国现有Dunkin Hartley豚鼠封闭的遗传背景,分析评估其遗传多样性水平和遗传分离情况,为建立标准化的豚鼠封闭群监测方法提供基础资料。方法应用筛选获得的8个微卫星位点,从一个数量为1000的豚鼠封闭群中随机选择72个个体,通过PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,进行等位基因检测。并根据检测结果分析评估了该豚鼠封闭群的遗传现状。结果共检测到28个等位基因,每个座位的等位基因数为2～5个,有效等位基因数为1.5191～3.4422,平均2.3093。平均期望杂合度为0.5294。各位点多态信息含量在0.3154～0.6545之间,平均值为0.4687。有5个位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡。结论豚鼠封闭群的遗传多态性处于中等水平,遗传平衡检测结果提示种群的繁殖过程未能实现完全随机交配,近交现象一定程度上存在。本研究的结果将为豚鼠封闭群遗传监测方法和标准的建立提供基础。; 朱亮蔡月琴屠珏应华忠徐剑钦陈民利; 关键词：封闭群微卫星标记

MDR1基因单靶点双荧光素酶报告基因系统的建立被引量：2: 2008年; 目的通过构建以MDR1启动子为启动序列的双荧光素酶报告基因系统并进行活性分析,为MDR1基因表达的单靶点调控研究和逆转剂的筛选提供一种有效的方法。方法从HCT-8细胞中提取DNA并克隆含有MDR1基因启动子中Y-box序列。将该序列重组到萤光素酶报告基因载体pGL-3-Basic的启动区域中,从而构建报告基因载体pGL-MDR1。将pGL-MDR1和pRL-TK载体共转染到HCT-8和HCT-8/VCR细胞中。通过调节不同载体的比例来优化转染效率。利用MDR1基因激活剂(热诱导)和抑制剂(EGCG)等处理来分析其启动转录活性受外界因素的影响。结果通过直接测序法验证了pGL-MDR1含有MDR1基因启动子Y-box序列且没有出现碱基突变。在pGL-MDR1和pRL-TK的转染比例为5:5时,转染效率最高并具有最高的萤光素酶活性。通过MDR1基因激活处理后表现为时间依赖性地激活MDR1基因的表达,而MDR1基因抑制剂的作用则相反。结论MDR1启动子为启动序列的双荧光素酶报告基因系统建立成功。该系统不但可以用于研究活体生物发光成像和MDR1基因表达的机理,而且可用于单靶点的多药耐药抑制剂的筛选。; 李长龙萨晓婴; 关键词：启动子荧光素酶报告基因活性鉴定

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浙江省科技厅实验动物公共服务平台项目