国家自然科学基金(30572141)
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 相关作者：赵宝昌胡燕荣崔秀云田余祥刘淑清更多>>
- 相关机构：大连医科大学赤峰学院更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 白眉蝮蛇去整合素Adinbitor定点突变体的构建及其功能检测被引量：1
- 2009年
- 目的构建白眉蝮蛇去整合素Adinbitor的RIARGD→RPTRGD突变体,研究其主要功能及其作用的分子机制。方法重叠延伸PCR法获得Adinbior定点突变cDNA序列,表达并纯化突变体蛋白。血小板聚集试验检测其对血小板聚集的影响;鸡绒毛尿囊膜模型体内血管新生试验检测其对血管新生的抑制功能;流式细胞仪检测其对血小板膜受体去整合素αⅡbβ3与CD41结合的影响。结果双酶切、PCR及测序证实突变体构建正确,纯化的突变体蛋白纯度在90%以上。野生型Adinbitor可识别αⅡbβ3,竞争性抑制纤维蛋白原与血小板结合,从而发挥抑制血小板聚集的功能;在相同剂量下,突变型Adinbitor几乎不具备此功能,而保留了抑制血管新生的功能。结论已成功构建了白眉蝮蛇去整合素Adinbitor定点突变体,与野生型Adinbitor比较,突变体抑制血小板聚集的功能得到了有效抑制,抑制血管新生功能保持不变,为其今后的功能开发奠定了理论基础。
- 胡燕荣刘淑清赵霆田余祥洪艳于丽华崔秀云赵宝昌
- 关键词：去整合素突变血小板聚集血管新生
- 基因重组去整合素rAdinbitor对C6神经胶质瘤细胞FAK-Ras/MAPK通路的影响被引量：2
- 2009年
- rAdinbitor为大连医科大学生物化学与分子生物学教研室从旅顺产白眉蝮蛇毒腺中采用克隆技术得到的去整合素.之前研究已证明rAdinbitor具有抑制C6神经胶质瘤细胞增殖、促进C6神经胶质瘤细胞凋亡的作用.rAdinbitor对C6细胞作用的分子机制需要进一步研究.在此研究中,用E.coliBL21/pET23b-adinbitor表达rAdinbitor,通过Ni Sepharose 6 Fast Flow亲和层析柱对rAdinbitor进行纯化,纯化蛋白经Western blotting鉴定.用纤连蛋白(fibronectin,FN)诱导C6细胞.通过免疫沉淀和免疫印迹检测不同浓度的rAdinbitor对FN诱导的C6细胞中黏着斑激酶(FAK)、MEK1/2、Caspase-3的表达以及对FAK、ERK1/2活性的影响.研究表明:各实验组不同浓度的rAdinbitor均能明显降低FAK、MEK1/2的表达,对Caspase-3的表达起促进作用,并对ERK1/2的磷酸化有明显的抑制作用;除10mg/LrAdinbitor对FAK磷酸化无明显抑制作用外,其余浓度的rAdinbitor对FAK的磷酸化起了明显抑制作用.这说明rAdinbitor对FAK及其下游Ras-MAPK传导通路的抑制在其抑制C6增殖过程中起了重要作用,Caspase-3表达升高提示,rAdinbitor可能通过抑制ILK及其下游的PI-3K/Akt途径起到了促进细胞凋亡的作用.
- 赵霆李金萍胡燕荣洪艳赵宝昌
- 关键词：白眉蝮蛇去整合素
- 重组白眉蝮蛇去整合素定点突变对其生物活性的影响(英文)被引量：1
- 2006年
- RGD为存在于许多糖蛋白配体中的氨基酸序列,对整合素具有识别作用.此序列也发现于许多蛇毒去整合素分子中.采用基因克隆技术从大连产白眉蝮蛇的毒腺中克隆出的去整合素adinbitor是含73个氨基酸残基的去整合素,分子中含有12个半胱氨酸和RGD模体.实验证明,adinbitor作为去整合素的新成员,具有典型的抗ADP诱导的人血小板聚集作用和抗肿瘤血管新生作用.为了将adinbitor的这2种功能分开,采用PCR基因定点突变的方法,将其cDNA序列中RGD模体改变成KGD.重组adinbitor(KGD)在E.coliBL21得到表达,并通过His·Bind亲和层析予以纯化.实验发现,adinbitor对ADP诱导的人血小板聚集具有明显抑制作用,其IC50=85nmol/L,明显优于adinbitor(RGD)(IC50=150nmol/L).然而,与adinbitor(KGD)相比,adinbitor(KGD)则丧失了对血管生成的抑制作用.结果说明,adinbitor(KGD)可作为专一的抗人血小板聚集药具有潜在的开发前景.
- 陈洪岩崔秀云张春鹏王继红赵霆吕莉韩国柱赵宝昌
- 关键词：去整合素定点突变血管生成作用血小板聚集白眉蝮蛇
- 基因重组白眉蝮蛇去整合素Adinbitor对人肝癌细胞系SSMC7721增殖、凋亡和侵袭的影响
- 2009年
- [目的]研究基因重组白眉蝮蛇去整合素Adinbitor对SSMC7721细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。[方法]用Hoechst33258试剂盒染色,观察Adinbitor对细胞形态的影响;Western-blotting检测浓度梯度Adinbitor作用下Caspase-3表达情况,分光光度法考察Caspase-3活化程度;MTT法检测Adinbitor对细胞增殖的作用,Transwell及Matrigel检测其对细胞侵袭的影响。[结果]Hoechst染色显示Adinbitor可明显促进细胞凋亡。在Adinbitor作用下,胞浆Caspase-3含量减少,活化程度增高,活化倍数2.24－3.85。Adinbitor可明显抑制SSMC7721细胞增殖,IC50为0.296μmol,也可抑制细胞侵袭能力。[结论]基因重组Adinbitor可明显抑制SSMC7721细胞的增殖及侵袭,并且可通过活化Caspase-3促进细胞凋亡。
- 胡燕荣刘淑清田余祥田晓光于丽华崔秀云赵宝昌
- 关键词：增殖凋亡去整合素
- 重组去整合素rAdinbitor对肝癌细胞H22生长的抑制作用
- 2014年
- 目的:探讨源于白眉蝮蛇的重组去整合素rAdinbitor对肝癌细胞H22生长的抑制作用及其机制。方法:通过诱导重组表达、纯化、鉴定等步骤获得rAdinbitor;采用右腋皮下注射1×106个H22细胞制备肝癌小鼠模型,随机分为模型组(0.9%氯化钠注射液0.2 ml/kg)、阳性对照组(重组人血管内皮抑制素1.65 mg/kg)和高、中、低剂量治疗组(rAdinbitor 5、1.25、0.5 mg/kg),每组8只,肌肉注射相应药物,每日1次,连续给药3周后处死小鼠,取瘤称质量,镜下观察肿瘤组织切片中5个视野下的血管数量。结果:成功诱导表达并纯化rAdinbitor,其蛋白含量为1.4 mg/ml,相对分子质量约为9 kD。各组小鼠瘤质量和血管数量分别为模型组:(1.513±0.922)g和3.34±0.58;阳性对照组:(0.562±0.304)g和1.33±0.58;高剂量治疗组:(0.318±0.205)g和1.18±0.56;中剂量治疗组:(0.434±0.323)g和1.32±0.60;低剂量治疗组:(0.536±0.328)g和1.35±0.58。与模型组比较,各剂量治疗组小鼠的瘤质量和血管数量均明显下降(P<0.05);与阳性对照组比较,中、高剂量治疗组小鼠的瘤质量差异有统计学意义(P<0.05),高剂量治疗组小鼠的血管数量差异有统计学意义(P<0.05),其余差异无统计学意义。结论:rAdinbitor对H22细胞的生长具有明显的抑制作用,其机制可能是抑制瘤组织周边新血管的形成。
- 刘雪梅王冬梅王众田余祥赵宝昌
- 关键词：去整合素肝癌细胞H22血管新生
- 白眉蝮蛇去整合素Adinbitor对Akt信号转导通路及对SSMC7721细胞增殖、迁移和凋亡的影响被引量：8
- 2009年
- 研究白眉蝮蛇去整合素adinbitor对蛋白激酶B(Akt)通路信号分子的影响及对SSMC7721细胞增殖、迁移及凋亡的影响.采用MTT法检测adinbitor对SSMC7721细胞增殖的作用;Hoechst33258试剂盒检测adinbitor对SSMC7721凋亡的影响;Transwell检测adinbitor对SSMC7721细胞迁移的作用;Western印迹检测adinbitor对信号分子Akt及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、核因子κB(NF-κB)的抑制蛋白IκB-α及NF-κBp65的影响;分光光度法检测其对半胱天冬蛋白酶-3(caspase-3)活性的影响.结果显示,adinbitor可显著抑制SSMC7721细胞的迁移和增殖(与对照组比较,P<0.05),促进凋亡.在浓度梯度adinbitor作用下,Akt表达量基本不变,但其磷酸化受到抑制.细胞浆内IκB-α表达增加,细胞核内NF-κBp65表达减少,caspase-3活化倍数平均在2.24～3.85之间,以上作用均呈现剂量依赖性.结果说明,adinbitor可通过抑制Akt相关信号转导分子的作用而抑制SSMC7721细胞增殖和迁移,并促进其凋亡.
- 胡燕荣刘淑清田余祥于丽华崔秀云赵宝昌
- 关键词：去整合素迁移凋亡蛋白激酶B核因子ΚB半胱天冬蛋白酶-3
