中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(RISF6141)
- 作品数：4 被引量：17H指数：3
- 相关作者：李纪元范正琪殷恒福孙迎坤周兴文更多>>
- 相关机构：中国林业科学研究院青岛农业大学玉林师范学院更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 茶花CjAPL1基因干扰表达载体的构建与遗传转化被引量：3
- 2013年
- 茶花CjAPL1基因是MADS-box基因家族的AP1同源基因,AP1基因对于植物花器官的发育具有重要调控功能。本实验选取CjAPL1基因中长度为292bp的基因干扰片段,采用双酶切方法构建了有反向重复序列的RNA干扰中间载体pUCC-CjAPL1。分别用Pst I单酶切pUCC-CjAPL1中间载体和pCAMBIA1300植物表达载体,将有反向重复序列的小片段与pCAMBIA1300大片段连接,得到最终植物干扰表达载体pCAMRNAi-CjAPL1。采用热激法转化农杆菌GV3101,花序浸染法转化野生型拟南芥植株。利用潮霉素筛选阳性植株,进一步进行PCR扩增验证和表型观察统计。结果表明,pCAMRNAi-CjAPL1表达载体构建完整,且干扰载体成功地导入拟南芥基因组中。转基因植株表现出雄蕊缺失1～2枚的花型变化,证明CjAPL1基因对于雄蕊等花器官的发育起到了调控作用。
- 孙迎坤李纪元殷恒福
- 关键词：茶花
- 托桂型茶花‘金盘荔枝’中花器官发育基因CjAG1的克隆与功能分析被引量：3
- 2013年
- 为探讨山茶重瓣花形成的机理,在山茶A和B类基因研究的基础上,通过同源基因查找分析,从山茶(Camellia japonica)重瓣品种‘金盘荔枝’(‘Jinpan Lizhi’)早期花芽中克隆了长度为1 418 bp的C类基因CjAG1全长cDNA序列(Genbank登录号JX843816),包括长度为224 bp的5′非编码区、768 bp的编码区和426 bp的3′非编码区三部分。基因编码的蛋白质包含258个氨基酸残基,属于不稳定亲水性蛋白,α-螺旋和无规则卷曲构成了其结构骨架。Real-time PCR检测结果显示,CjAG1基因在‘金盘荔枝’内轮花器官雄蕊和心皮的相对表达量高于外轮花器官萼片和花瓣,最高表达量是在花柱部位,子房、雄蕊、瓣化雄蕊和瓣化萼片的表达量居中。转拟南芥ag-1突变体后,阳性植株雄蕊数量恢复为6枚,证实了CjAG1基因具有调控雄蕊数量增加的功能。说明CjAG1基因可能对于‘金盘荔枝’重瓣花形成具有重要的调控作用。
- 孙迎坤李纪元殷恒福范正琪
- 关键词：茶花克隆功能分析
- 重瓣茶花‘红十八学士’MADS-box家族B-function基因序列分析与原核表达被引量：4
- 2012年
- 对山茶重瓣花‘红十八学士’(Camellia japonica‘Hong Shibaxueshi’)中的4个B类功能基因构建了系统进化树,预测了其蛋白结构,并构建了相应的原核表达载体。生物信息学分析结果表明:4个基因分属3个亚家族,其中CjHGLO1和CjHGLO2属PI亚家族,CjHTM6属TM6-like亚家族,CjHDEF属AP3亚家族;4个基因的编码蛋白均为不稳定蛋白,均无信号肽存在;其蛋白二、三级结构均以α-螺旋为主,其次是无规则卷曲,然后以延伸链三种构象形式存在;分析的特定位点中磷酸化位点数量最多,尤其是蛋白激酶C磷酸化位点最多。原核表达实验结果显示:当IPTG浓度在0.2 mmol/L、30℃、经1 h诱导CjHGLO1蛋白可获表达;当IPTG浓度在0.1 mmol/L、30℃、诱导1.5 h CjHGLO2蛋白可获表达;当IPTG浓度在0.5 mmol/L、16℃、过夜(>16 h)诱导CjHDEF蛋白可获表达;当IPTG浓度在0.3 mmol/L、20℃、诱导5 h CjHTM6蛋白可获表达。这些研究为山茶B-function基因的更深入研究奠定了基础。
- 朱高浦李纪元范正琪倪穗李辛雷周兴文孙迎坤
- 关键词：山茶花生物信息学分析原核表达
- 金花茶FLS基因的克隆及其植物表达载体的构建被引量：9
- 2013年
- 利用RT-PCR和RACE技术,从我国珍稀濒危植物金花茶花瓣中获得了黄酮醇合成酶(Flavonol synthase,FLS)基因的cDNA全长,命名为CnFLS,GenBank登录号JF343560.1。根据该基因序列设计全长扩增引物P3/P4进行PCR扩增,将扩增产物插入PMD18-T载体并转化克隆菌株DH5α,提取质粒DNA酶切鉴定,通过酶切连接的方法将该基因与改造后的pCAMBIA1300表达载体连接,成功构建了该基因的正义表达载体pCAM-CnFLS。根据该基因的保守序列设计了含有酶切位点的特异引物G1/G2,扩增出250 bp的干扰片段并将其克隆到PMD18-T载体,在中间载体pUCCRNAi及表达载体pCAMBIA1300的基础上,通过多次酶切连接,成功构建了金花茶FLS基因的干扰表达载体pCAMRNAi-CnFLS。金花茶正义及干扰植物表达载体的成功构建,为进一步研究该基因的功能及其对花色的调控效应奠定了基础。
- 周兴文李纪元殷恒福范正琪李辛雷
- 关键词：金花茶RNA干扰表达载体构建
