教育部留学回国人员科研启动基金(2008889)
- 作品数：8 被引量：14H指数：2
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- 靶向人肝素酶短发卡状RNA表达载体的构建及其沉默作用
- 2010年
- 目的构建靶向人肝素酶（HPSE）的短发卡状RNA（shRNA）表达载体，探讨其基因沉默作用。方法根据人肝素酶mRNA序列设计shRNA，合成两条互补的寡核苷酸链，退火后连接人pGenesil-1载体，转化扩增后进行测序鉴定；重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine2000的介导下，瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901、人前列腺癌细胞株PC-3、人膀胱癌细胞株EJ，每种细胞分别设空白对照组、空载体pGenesil-Negative转染组、pGenesil-HPSEshRNA转染组3组，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Westernblot法检测各种细胞中肝素酶基因表达水平，黏附实验和transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力。结果所构建的shRNA载体插入基因片段与设计序列完全匹配，载体构建成功；重组质粒转染SGC-7901、PC-3、EJ细胞后，肝素酶mRNA表达分别下调78．6％（P〈0．01）、82．6％（P〈0．01）、81．9％（P〈0．01），肝素酶蛋白表达分别下调76．4％（P〈0．01）、85．9％（P〈0．01）、83．3％（P〈0．01），细胞黏附能力分别下降37．7％（P〈0．01）、44．6％（P〈0．01）、43．8％（P〈0．01），细胞侵袭能力分别下降66．8％（P〈0．01）、76．6％（P〈0．01）、80．5％（P〈0．01）。结论成功构建了靶向人肝素酶的shRNA表达载体，沉默肝素酶基因表达后，能抑制多种癌细胞的游走和侵袭能力。
- 蒋国松曾甫清郑丽端童强松董继华侯晓华
- 关键词：肝素酶短发卡状RNA肿瘤基因表达
- 睾丸特异表达基因-1在小鼠隐睾模型中的表达及其意义被引量：3
- 2010年
- 目的 探讨睾丸特异表达基因-1（TSEG-1）在小鼠隐睾模型中的定位、定量表达变化及其意义.方法 将46只雄性昆明新生小鼠随机分为对照组（n=10）、丙二醇（溶剂）注射组（n=15）、17β-雌二醇注射组（n=21）,应用苏术素-伊红（HE）染色观察睾丸组织形态学改变,原位杂交、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和实时定量PCR检测TSEG-1 mRNA的定位和定量变化.结果 17β-雌二醇注射组发生隐睾,而对照组和丙二醇注射组睾丸位置正常.与对照组比较,17β-雌二醇组睾丸组织80%曲精小管管腔消失,Ⅰ～Ⅳ级生精细胞数目减少,60%精母细胞或精子细胞核皱缩,90%精子发生障碍.在对照组睾丸组织中,TSEG-1 mRNA表达水平是模型组25倍,主要定位于精母细胞和早期精子细胞,而隐睾组TSEG-1 mRNA表达水平显著下调.结论 17β-雌二醇诱导小鼠隐睾模型是制作隐睾模型的有效方法 ,新基因TSEG-1可能参与雌激素诱导隐睾模型的发生过程.
- 顾朝辉曾甫清童强松
- 关键词：17Β-雌二醇隐睾
- 缺氧诱导丝裂原因子在高氧诱导肺上皮和成纤维细胞凋亡中的作用及意义被引量：1
- 2013年
- 目的探讨缺氧诱导丝裂原因子（HIMF）在高氧诱导肺上皮和成纤维细胞凋亡中的作用及其意义。方法肺泡Ⅱ型上皮MLE-12细胞和成纤维NIH／3T3细胞分别转染靶向HIMF的小干扰RNA后，置于正常氧（21％O2）、高氧（85％O2）条件下培养3—18h，采用实时定量聚合酶链反应（Real．timePCR）法检测细胞中HIMFmRNA水平，运用吖啶橙-溴化乙锭染色法、Hochest33258染色法及膜联蛋白V（AnnexinV）-碘化丙锭（PI）双染流式细胞术检测细胞凋亡变化。结果与对照组比较，高氧暴露3、6、9、18h后，MLE-12和NIH／3T3细胞中HIMFmRNA水平分别增高2．783—5．023倍（P〈0．05）、2．864～15．162倍（P〈0．05），细胞凋亡率增高1．5～2．3倍（P〈0．05）、1．1～2．1倍（P〈0．05）；沉默HIMF基因后，高氧诱导的MLE．12和NIH／3T3细胞凋亡率分别进一步升高1．5～2．5倍（P〈0．05）、1．3—2．0倍（P〈0．05）。结论HIMF基因可能通过对抗高氧诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞和成纤维细胞凋亡，参与高氧肺损伤的发病机制。
- 杨春雷张桓瑜普佳睿郑丽端童强松李爽
- 关键词：肺泡上皮细胞成纤维细胞小干扰RNA
- 人pre-miR-145真核表达载体的构建及其对胃癌细胞游走、侵袭活性的影响被引量：3
- 2011年
- 目的构建人微小RNAl45（miR-145）前体的真核表达载体，探讨其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法根据人pre-miR-145序列，合成两条互补的寡核苷酸链，退火后连接人pPG-miR-EGFP载体，转化扩增后进行测序鉴定；重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine2000的介导下，瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901，实时定量聚合酶链反应（PCR）检测细胞中miR．145表达水平，黏附实验和Transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力。结果所构建的pPG—miRl45-EGFP载体中插入基因片段与设计序列完全匹配；重组质粒转染SGC．7901细胞后，miR-145表达分别上调20．45倍（P〈0．01），细胞黏附能力分别下降51．5％（P〈0．01），细胞侵袭能力分别下降30．4％（P〈0．01）。结论成功构建人pre—miR-145真核表达载体，转染胃癌细胞过表达后，能抑制癌细胞的游走和侵袭能力。
- 张桓瑜梁铸林郑丽端童强松董继华
- 关键词：胃癌
- 缺氧诱导丝裂原因子在小鼠支气管肺发育不良模型中的表达及意义被引量：2
- 2010年
- 目的 探讨缺氧诱导丝裂原因子（HIMF）在小鼠支气管肺发育不良（BPD）模型中的表达及意义.方法 32只新生昆明小鼠随机分为对照组（n=16）、高氧暴露组（n=16）,分别置于正常空气（21%,O2）及氧箱（85%,O2）中,于暴露后第7、14、21、28天每组随机选取4只,采用苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织形态学改变,运用实时定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot方法检测肺组织中HIMF mRNA和蛋白表达水平.结果 对照组肺泡逐渐发育成熟,大小均匀,肺间质变薄 高氧暴露组肺泡隔增厚、肺泡融合,放射状肺泡计数减少31.1%～65.3% 与对照组比较,高氧暴露7、14、21 d后肺组织HIMF mRNA和蛋白水平分别增高2.435～2.528倍（P〈0.05）、2.45～5.42倍（P〈0.05）,而高氧暴露28 d后分别下调52.81%（P〈0.05）、74.60%（P〈0.05）.结论 成功建立小鼠BPD模型,HIMF基因表达异常可能参与BPD的发生、发展过程.
- 普佳睿吴泽华童强松胡涛梅红张桓瑜杨春雷郑丽端
- 关键词：支气管肺发育不良基因表达
- TSEG-2基因真核表达载体的构建及其在细胞内的表达被引量：2
- 2010年
- 目的构建睾丸特异表达基因2（TSEG-2）的真核表达载体，探讨TSEG-2存细胞中的表达及其生物学功能。方法以小鼠睾丸组织cDNA为模版，设计携带HindⅢ和BamHI酶切位点的引物序列，聚合酶链反应（PCR）扩增基因片段，克隆至携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的真核表达载体pEGFP—N1；在阳离子聚合物聚乙烯亚胺（PEI）的介导下，重组质粒转染体外培养的精母细胞株GC-2spd48h后，荧光显微镜下观察TSEG-2基因在细胞内的表达定位，噻唑蓝（MTT）比色法测定细胞生长活性，AO／EB荧光染色法、Hoechst33258荧光染色法、AnnexinV—FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡，实时定量PCR测定Fas、bcl-2、bax表达水平。结果成功构建了TSEG-2与EGFP的融合表达载体pEGFP—TSEG2，转染GC-2spd细胞后可见胞质内绿色荧光蛋白表达。转染pEGFP—TSEG248h后，GC-2spd细胞生长抑制39．2％（P〈0．05），出现细胞凋亡形态学改变，凋亡率为28．3％（P〈0．05）；GC-2spd细胞中Fas和bcl-2的表达分别下调17．9％、64．8％（P〈0．05），而bax的表达上调25．1％（P〈0．05）。结论成功构建TSEG-2基因的真核表达载体，能在精母细胞株中表达并促进细胞凋亡。
- 胡涛王智宇童强松曾甫清陈晓春顾朝辉郑丽端
- 关键词：真核表达载体脱噬作用
- 人胃癌组织中肝素酶基因启动子甲基化状态与肿瘤侵袭转移的关系被引量：1
- 2010年
- 目的探讨人胃癌组织中肝素酶（HPA）基因启动子的甲基化状态及其与HPA表达、肿瘤侵袭转移的关系。方法应用免疫组织化学、逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测48例胃癌组织标本及相应癌旁组织中HPA蛋白和mRNA表达；采用亚硫酸氢钠修饰、甲基化PCR（MSP）、甲基化克隆测序（BSP）法检测胃癌组织和癌旁组织中HPA基因启动子区域CpG岛甲基化状态，并探讨与胃癌临床病理特征的关系。结果胃癌组织中HPAmRNA和蛋白的阳性表达率分别为79．20％（38／48）、93．75％（45／48），显著高于癌旁组织（P〈0．05）。MSP、BSP检测发现13例胃癌组织HPA启动子CpG岛呈低甲基化状态，且其甲基化程度与HPA的表达及胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移、远处转移明显相关（P〈0．05）。结论HPA基因启动子区域CpG岛甲基化程度与HPA的表达及胃癌的发生、发展有关，在肿瘤侵袭、转移过程中起重要调节作用。
- 吕清王国斌童强松郑丽端
- 关键词：胃癌肝素酶启动子甲基化
- 人肠凝集素-1真核表达载体的构建及其在胃癌细胞中的表达被引量：2
- 2012年
- 目的构建人肠凝集素-1（ITLN-1）基因的真核表达载体，观察其在胃癌细胞中的表达。方法采用逆转录聚合酶链反应（1iT-PCR）法扩增ITLN-1eDNA，定向克隆至真核表达载体pEGFP—N1，测序鉴定；在脂质体的介导下，重组质粒瞬时转染人胃癌细胞株SGC-790172h后，West—ernblot法检测细胞培养上清中ITLN．1表达，四甲基偶氮唑盐比色（MTr）法、Transwell小室实验检测癌细胞增殖、侵袭活性。结果真核表达载体pEGFP—ITLN-1转染SGC-7901细胞72h后，ITLN-1蛋白表达上调5．72倍（P〈0．01），细胞增殖活性降低52．8％（P〈0．01），细胞侵袭能力下调58．1％（P〈0．01）。结论成功构建人ITLN-1真核表达载体，转染胃癌细胞过表达后，能抑制癌细胞的增殖和侵袭活性。
- 齐盟张桓瑜郑丽端戚腾童强松
- 关键词：胃癌基因表达
