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牛布鲁菌病奶液PCR检测方法的建立及初步应用被引量：5: 2011年; 为探讨以牛奶为材料检测牛布鲁菌感染的可行性,本试验建立了可鉴定布鲁菌属的单重PCR以及可鉴定布鲁菌种的多重PCR。结果显示,单重PCR方法的特异性强,只特异性的扩增布鲁菌DNA,对照菌株大肠杆菌、牛败血性波氏杆菌、根瘤农杆菌和苍白杆菌的扩增结果均为阴性;奶液中细菌检测灵敏度为1.08×104CFU/mL。用建立的多重PCR对7株不同种的布鲁菌体和基因组进行鉴定,表明该方法可以区分不同种布鲁菌。本试验中建立的PCR方法能够鉴定所有致病性布鲁菌并对疫苗株和野生毒株加以区分,适用于实验室布鲁菌的快速鉴定。; 李彦伟高明春张文龙王倩王君伟K. NielsenYU Wei-ling; 关键词：布鲁菌病多重PCR

流产布鲁菌BP26蛋白B细胞线性表位的鉴定被引量：1: 2012年; 为了对流产布鲁菌BP26蛋白进行抗原表位研究,设计了3个相互重叠15个氨基酸、覆盖整个BP26蛋白的重叠短肽,经克隆并在大肠杆菌中实现了融合表达。用流产型布鲁菌感染血清对3个融合蛋白进行免疫印迹分析,结果初步鉴定出BP26蛋白B细胞线性抗原表位位于第51-165氨基酸区域。在此基础上,针对BP26 2(51-165aa)短肽,设计了5个相互重叠10个氨基酸的短肽片段,进一步鉴定出了BP26蛋白B细胞线性表位位于第109-141氨基酸区域。该结果为进一步探索BP26蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。; 羡东堡高明春曹涤非王晓东王君伟; 关键词：B细胞

3种奶牛布鲁氏菌病血清学检测方法的贝叶斯评估被引量：6: 2010年; 在无"金标准"的情况下,为评估虎红平板凝集试验(RBT)、荧光偏振分析法(FPA)和间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA)用于奶牛布鲁氏菌病的抗体检测能力,作者分别以RBT、FPA、I-ELISA3种方法对采自某奶牛场的血清样品进行检测,通过贝叶斯分析法对检测结果进行分析,研究3种方法检测奶牛布鲁氏菌血清抗体的敏感性(Se)和特异性(Sp)。结果显示,RBT、FPA、I-ELISA3种检测方法的敏感性(Se)分别为91.81%、95.92%和95.98%;特异性(Sp)分别为98.80%、86.54%和98.65%。本研究表明,3种血清学检测方法中以I-ELISA的检测能力最好。; 刘晓民杨华高明春李彦伟王君伟; 关键词：布鲁氏菌病间接酶联免疫吸附试验贝叶斯分析

我国奶牛布病与结核病的发病情况与防控措施建议被引量：28: 2010年; 我国为奶牛大国,2010全国奶牛优势区域的奶牛存栏数已超过1400万头,奶产量居世界第3,但单产只能排到世界第15,除品种和饲养管理等因素外,奶牛疾病也是制约我国奶业发展的重要原因之一。在各种奶牛传染病中,布病(布鲁氏菌病)与结核病危害最为严重,且近年流行呈上升趋势,为稳步推进奶业的持续健康发展,现简述我国奶牛布病、结核病的危害及流行现状,并提出防控措施建议,谨供参考。; 王君伟杨志强王志亮; 关键词：布病结核病奶牛

大肠杆菌菌株ATCC 25922碱性磷酸酶的原核表达、纯化及其活性研究被引量：5: 2010年; 使用常规PCR法以大肠杆菌菌株ATCC 25922基因组为模板,克隆到该菌株的碱性磷酸酶成熟肽基因,并将其构建到原核表达载体pET-30a（＋）的Bam HⅠ、XhoⅠ之间,获得重组表达载体pET-30a-EAP。并且我们将pET-30a-EAP转化到大肠杆菌RosettaTM（DE3）pLysS中,经IPTG诱导表达后,获得大小为52ku的目的蛋白EAP。经试验证明该蛋白以可溶形式为主。进而,高效表达的重组碱性磷酸酶经亲和层析法纯化后被用于活性鉴定。pNPP的显色反应与去磷酸化试验证实来自ATCC 25922的重组碱性磷酸酶具有催化磷酸单酯水解活性,而且酶热稳定性高、有效工作温度范围大,与其他蛋白融合表达时仍保持酶活性。以上研究结果为大肠杆菌菌株ATCC 25922碱性磷酸酶的规模化生产及在免疫酶技术领域中的应用提供了重要的参考依据。; 高明春李雪萌张润祥王君伟; 关键词：表达纯化活性鉴定

奶牛布鲁菌病奶液抗体检测方法的初步应用被引量：1: 2011年; 布鲁菌病（以下简称布病）目前在国内一些地区广泛流行,不但影响畜牧业的健康发展,也严重威胁人类健康。布鲁菌感染奶牛的主要症状是网状内皮系统和妊娠期细胞的炎症反应,通常会导致妊娠5至7个月的奶牛胎儿流产和死亡,伴随着流产,大量的布鲁菌会被排出，继而感染同群动物中的其他个体。; 李彦伟刘晓民高明春王倩张文龙王君伟; 关键词：布鲁菌抗体检测方法奶牛炎症反应妊娠期

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