国家高技术研究发展计划(2007AA02Z470)
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 相关作者：张秀敏隋延仿胡沛臻林慧王军伟更多>>
- 相关机构：第四军医大学解放军第306医院第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金陕西省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 胃肠道间质瘤KIT及PDGFRA基因突变的检测及分析被引量：5
- 2012年
- 目的:检测胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GISTs)KIT及PDGFRA基因的突变位点及类型,探讨其在GIST发病机制中的作用。方法:收集西京医院病理科2006年10月至2010年10月胃肠道间质瘤病例38例,男性20例(52.6%),女性18例(47.4%),从福尔马林固定石蜡包埋(formalin-fixed paraffin-embedded,FFPE)组织中提取基因组DNA。通过PCR扩增目的片段后测序,检测38例样本的KIT和PDGFRA基因突变类型。结果:在38例样本中共检测出KIT基因突变34例,其中32例发生在外显子1 1,突变形式有点突变、插入突变与缺失突变;2例发生在外显子9,均为重复性突变。同时还检出PDGFRA基因突变1例,其余3例样本为野生型。结论:大多数GISTs中存在KIT基因的突变,PDGFRA基因突变可见于部分缺乏KIT突变的GIST中。
- 张秀敏林慧叶菁郭风袁媛隋延仿李增山
- 关键词：胃肠道间质瘤石蜡组织KITPDGFRA基因突变
- 新基因MAGE-n表位肽与人HSP70融合基因的构建及表达纯化被引量：1
- 2010年
- 目的构建MAGE-n159-167(QLVFGIEVV)表位肽与人热休克蛋白70(HSP70)的融合基因并表达纯化。方法应用PCR方法,将QLVFGIEVV的cDNA序列融合到人HSP70基因的3'端,将融合基因克隆入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)QLVFGIEVV-HSP70;采用双酶切(Sac Ⅰ、Hind Ⅲ)及PCR鉴定后测序;转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),用IPTG诱导表达,Ni Sepharose6FF亲和填料进行分离纯化,SDS-PAGE检测表达及纯化结果。结果经PCR扩增成功获得约2.0kb的目的片段,重组体经Sac Ⅰ、Hind Ⅲ双酶切分析及PCR结果与预期结果一致,测序正确。转入重组质粒的E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导、SDS-PAGE分析得到71kD左右的目的蛋白条带。用Ni Sepharose6FF亲和填料分离纯化,获得了纯化的融合蛋白。结论成功构建原核表达载体pET-28a(+)QLVFGIEVV-HSP70,并获得纯化的融合蛋白,为基于MAGE-n的肿瘤疫苗研制提供良好的抗原奠定了实验基础。
- 张秀敏史琪琪李增山叶菁王军伟林慧曲萍胡沛臻隋延仿
- 关键词：基因融合癌症疫苗MAGE-N表位肽
- 免疫重建荷人高转移肝癌SCID鼠模型的建立及其鉴定被引量：5
- 2009年
- 目的:建立具有人免疫学特性的高转移肝癌SCID鼠模型。方法:SCID小鼠腹腔注射人外周血淋巴细胞,皮下接种人高转移肝癌细胞MHCC97-H,免疫重建人高转移肝癌SCID小鼠模型,并鉴定建立的结果。结果:①免疫重建荷人高转移肝癌细胞小鼠的成瘤率为100%,较荷瘤组成瘤潜伏期延长,体积缩小(P<0.05);转移率为100%,其从皮下转移到肝脏所需时间较荷瘤组延长(P<0.05)。②第2、4、6周小鼠血中人IgG含量的测定:同期相比,人化荷瘤组小鼠血中人IgG含量高于人化组(P<0.05)。③第6周SCID小鼠外周血中人CD3+T淋巴细胞和人CD20+B淋巴细胞含量的测定:人化荷瘤组小鼠血中人CD3+T淋巴细胞和人CD20+B淋巴细胞含量高于人化组(P<0.05)。④免疫组化检测人化荷瘤组小鼠脾脏中存在人CD3+T淋巴细胞和CD20+B淋巴细胞。结论:成功建立免疫重建荷人高转移肝癌SCID鼠模型,为肝癌转移的研究及治疗提供了理想的动物模型。
- 李文新张秀敏胡沛臻隋延仿师建国王军伟史琪琪
- 关键词：肝癌转移SCID小鼠免疫重建动物模型
- 肿瘤基因工程纳米疫苗NL(MH)抗肿瘤复发的实验研究
- 2008年
- 目的:在小鼠体内观察纳米疫苗NL(MH)抗肿瘤复发作用。方法:以PBS、空白脂质体、MH、MH/NL、NL(MH)免疫C57BL/6小鼠3次后,IFN-γELISPOT和LDH杀伤实验检测纳米疫苗激活小鼠特异性细胞免疫反应的情况;以肿瘤攻击实验和肿瘤切除后复发实验来评价纳米疫苗预防肿瘤复发作用。结果:与对照组相比,NL(MH)组小鼠脾淋巴细胞中分泌IFN-γ的T细胞数量明显增多(P<0.05),CTL对B16-MAGE3细胞具有显著的特异性杀伤作用;在肿瘤攻击实验中,NL(MH)组B16-MAGE3肿瘤成瘤时间长、成瘤率低;肿瘤切除后,NL(MH)组B16-MAGE3肿瘤复发时间延迟,复发率明显降低。结论:NL(MH)能够刺激机体产生强烈的MAGE3特异性的细胞免疫反应,对表达MAGE3的肿瘤细胞具有显著的杀伤作用,能有效预防B16-MAGE3切除后复发。
- 李侠胡沛臻张秀敏黄杨司少艳隋延仿陈娟
- 关键词：肿瘤特异性抗原肿瘤疫苗肿瘤复发
