国家高技术研究发展计划(2007AA02Z487)
- 作品数：9 被引量：14H指数：2
- 相关作者：张瑞韩宝三彭承宏吴薇吴旭波更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院内蒙古医学院内蒙古医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 壳聚糖球形多孔微载体支持下人肝细胞L-02的高浓度细胞培养被引量：1
- 2011年
- 背景:微载体培养技术作为一项体外高浓度细胞培养技术,近年来已在肝细胞的体外培养中得到应用。目的:对壳聚糖球形多孔微载体培养的人肝细胞L-02进行定时的形态学观察。方法:以自制的壳聚糖球形多孔微载体样本为支架来培养人肝细胞L-02设为实验组;无壳聚糖球形多孔微载体支持下人肝细胞的培养设为对照组。对两组细胞进行定时的细胞计数,并对实验组进行形态学观察,包括倒置相差生物显微镜观察和扫描电子显微镜观察。结果:两组培养的细胞数量均呈现前3d增长,在第3天细胞数量达到最高值;而且实验组3个样本培养的细胞数明显高于对照组无微载体培养的细胞数量(P<0.05),实验组各样本之间差异无显著性意义(P>0.05);倒置相差生物显微镜下动态观察,可见前3d微载体表面黏附生长的肝细胞则逐渐增多,第3天可见大部分微载体表面有许多肝细胞黏附成团,总的存活率均在90%以上,且肝细胞保持着良好的形态学结构;扫描电子显微镜观察,微载体表面、切面和内部均可看到有许多球状肝细胞紧密黏附。提示,以自制的壳聚糖球形多孔微载体作为一种支架,在体外三维环境下可以进行高浓度细胞培养。
- 张瑞韩宝三彭承宏
- 关键词：微载体壳聚糖人工肝脏肝细胞培养
- 构建与人肝细胞系L02相容的聚丙烯生物杂化界面(英文)
- 2008年
- 学术背景:具有良好生物相容性的肝细胞/聚合物界面是生物反应器设计和构建的关键因素,然而,目前临床实践中使用的生物反应器并不理想。目的:构建与人肝细胞相容的聚丙烯生物杂化界面,为用聚丙烯中空纤维管构建生物人工肝反应器奠定基础。设计、时间及地点:对比观察,细胞相容性实验,于2003-02/10在上海交通大学完成。材料:聚丙烯利用光化学接枝聚合改性技术,在微孔聚丙烯超滤膜表面通过化学键的形式接枝亲水性丙烯酰胺基团形成接枝改性微孔聚丙烯超滤膜。方法:将人肝细胞系L02接种于聚丙烯膜、接枝改性聚丙烯膜表面,以聚苯乙烯作为正常对照。主要观察指标:聚丙烯膜接枝改性前后的静态水相接触角度;人肝细胞系L02在不同材料表面形态、贴壁率及增殖活性。结果:聚丙烯膜接枝改性后的静态水相接触角小于接枝前(P<0.05)。人肝细胞L02在改性后聚丙烯膜上的贴壁率为0,细胞成球形聚集体生长,其增殖活性明显高于聚苯乙烯和改性前聚丙烯膜。结论:在聚丙烯表面接枝聚丙烯酰胺可建立良好的人肝细胞系L02与聚丙烯生物杂化界面,并可通过简单的静止培养形成肝细胞球形聚集体。
- 韩宝三沈柏用张瑞高长有马祖伟王兆海程东峰彭承宏李宏为
- 关键词：肝细胞聚丙烯类表面改性生物材料
- 接枝改性微孔聚丙烯超滤膜的生物相容性评价被引量：2
- 2008年
- 背景：生物反应器膜材料不仅具备双向物质交换、良好的理化特性,还要具有良好的生物相容性。目的：通过溶血试验、细胞毒性试验、全身急性毒性试验、热原试验、皮肤和皮内刺激试验来评价接枝改性微孔聚丙烯超滤膜（modified micropore polypropylene semipermeable ultrafiltration membrane,Modified MPP）的生物相容性。设计、时间及地点：动物实验观察。
- 张瑞韩宝三吴旭波吴薇彭承宏高长有
- 关键词：人工肝脏生物相容性
- 壳聚糖球形多孔微载体的血液相容性评价被引量：3
- 2011年
- 背景:文献报道的微载体大多为实心的、大孔的,虽然较二维微载体的比表面积有明显的增加,但距理想的三维微环境相差甚远。目的:构建壳聚糖球形多孔微载体,通过溶血实验、凝血实验、血小板计数及聚集实验评价其血液相容性。方法:利用液氮冷冻干燥技术成功构建浓度为1%,2%,3%的壳聚糖球形多孔微载体。选择健康成年新西兰兔为宿主,采用溶血实验、凝血实验、血小板计数及其聚集实验评价壳聚糖球形多孔微载体的血液相容性。结果与结论:浓度为1%,2%,3%的壳聚糖球形多孔微载体的溶血率分别为1.56%,2.07%,2.31%,均小于5%,均无致溶血性;3种浓度壳聚糖球形多孔微载体样本材料对兔血时间无明显影响,三者与生理盐水阴性对照组间也无明显差别(P>0.05);3种浓度壳聚糖球形多孔微载体样本材料对兔血小板计数无明显影响,注入浸提液前后比较和组间比较差异均无显著性意义(P>0.05)。证实壳聚糖球形多孔微载体无致溶血性、无凝血性和无血小板聚集性,表明壳聚糖球形多孔微载体具有良好的血液相容性。
- 张瑞韩宝三彭承宏
- 关键词：人工肝脏壳聚糖微载体血液相容性
- 三维多孔微载体支持下人肝细胞L-02的培养被引量：2
- 2011年
- 目的:对壳聚糖三维多孔微载体培养的人肝细胞L-02进行定时的形态学观察、细胞功能和代谢活性检测。方法:本研究以自制的壳聚糖三维多孔微载体样本为支架来培养人肝细胞L-02,用细胞计数、倒置相差生物显微镜和扫描电子显微镜对其进行定时的形态学观察,并进行定时的细胞功能检测(包括测定谷草转氨酶,谷丙转氨酶和乳酸脱氢酶水平)和代谢活性检测(包括检测培养基中白蛋白、尿素、葡萄糖含量)。结果:两组培养的细胞数量均呈现前3d增长,在第3d细胞数量达到最高值;而且实验组3个样本培养的细胞数与对照组无微载体培养的细胞数量相比,均始终明显高于后者,两者差异具有统计学意义(P<0.05),而实验组各样本培养的细胞之间无明显差异(P>0.05);在倒置相差生物显微镜下进行动态观察,可看到前3d微载体表面黏附生长的肝细胞则逐渐增多,在第3d时可见大部分微载体表面有许多肝细胞黏附成团,总的存活率均在90%以上,且肝细胞保持着良好的形态学结构;扫描电子显微镜下,在微载体表面、切面和内部均可看到有许多球状肝细胞紧密黏附。实验组和对照组测定的AST、ALT和LDH含量在前3d持续下降,第3d降到最低,而从第4dAST、ALT、LDH含量开始重新反弹上升,但ALB、UREA和GLUCOSE含量在前3d持续上升,第3d升到最高值,而从第4d ALB、UREA和GLUCOSE含量开始逐渐下降,实验组每天测定上述各项含量始终明显高于对照组,表明两组各项含量的差异具有统计学意义(P<0.05),提示实验组中的人肝细胞L-02代谢活性较对照组增强;而实验组中微载体样本1、2、3之间测定的各项含量无明显差异,表明实验组3个样本间各项含量的差异无统计学意义(P<0.05)。结论:本研究以自制的壳聚糖三维多孔微载体作为一种支架,在体外三维环境下可以进行高密度细胞培养,为肝细胞移植、生物人工肝研究中�
- 梁卫张瑞
- 关键词：人工肝脏肝细胞培养微载体
- 壳聚糖球形多孔微载体的组织相容性评价被引量：1
- 2011年
- 目的:构建壳聚糖球形多孔微载体,通过细胞毒性试验、全身急性毒性试验、热原试验和皮肤刺激试验来评价壳聚糖球形多孔微载体的组织相容性。方法:利用液氮冷冻干燥技术成功构建浓度为1%,2%,3%的壳聚糖球形多孔微载体。选择健康成年新西兰兔和ICR小鼠为宿主,采用细胞毒性试验、全身急性毒性试验、热原试验和皮肤刺激试验来对其的组织相容性进行评价。结果:3种浓度的微载体浸提液对L-929细胞增殖活性无明显的抑制作用,细胞的毒性级别为0;3种浓度的微载体浸提液和生理盐水在注射后24h、48h和72h,所有试验小鼠无死亡,体重无明显变化(P>0.05),未观察到眼睑下垂、呼吸困难、发绀、腹部刺激症、腹泻、运动减少、震颤等全身急性毒性反应;3种浓度的微载体的热原试验中兔体温变化范围在-0.2～0.4之间,每只兔体温升高度数均<0.6℃,三只兔体温升高总合在0.0～0.4之间,各组均<1.4℃;3种浓度的微载体皮肤刺激试验区未见明显发红、皮疹和水肿等反应。结论:本研究证实壳聚糖球形多孔微载体无细胞毒性、无全身急性毒性、无致热原性和无皮肤刺激致敏性,表明壳聚糖球形多孔微载体具有良好的组织相容性。
- 张瑞韩宝三彭承宏
- 关键词：人工肝脏组织相容性微载体
- 壳聚糖球形多孔微载体的制备和表征被引量：2
- 2011年
- 目的:制备和研究一种新的体外三维环境下肝细胞黏附培养的微载体支架-壳聚糖球形多孔微载体。方法:利用壳聚糖为基本材料,以2%乙酸为溶剂,采用液氮冷冻干燥技术制备壳聚糖球形多孔微载体,采用光学显微镜、扫描电子显微镜等仪器和方法对其形态结构及理化性质进行表征。结果:本研究成功地制备出壳聚糖球形多孔微载体,成球率>90%,内外多孔且相互连通,孔径在20～80μm之间,具有一定的密度、弹性、溶胀性、亲和性和形态结构,并具有良好的机械强度、稳定性和较大的比表面积。结论:本研究制备的壳聚糖球形多孔微载体为以其作为支架来进行肝细胞体外三维环境下的培养提供了一定的理论和实验依据。
- 张瑞韩宝三彭承宏
- 关键词：微载体多孔壳聚糖细胞培养
- 微载体及其在肝细胞培养中的作用与应用被引量：4
- 2008年
- 微载体具有比表面较大等优点,是目前较常用而有效的动物细胞大规模培养的载体,微载体培养技术已经成为动物细胞工程的基础和细胞学研究的主要技术和热点之一,广泛地应用于生产一些具有重要实用和商业价值的产品,积累了大量的实践经验和关键的实验数据,并在肝细胞、软骨细胞、成纤维细胞等组织工程种子大规模扩增研究领域取得了许多进展。文章就微载体及其在肝细胞培养中的研究进展做一综述,为动物细胞培养的载体研究提供理论基础。
- 张瑞韩宝三吴薇吴旭波彭承宏
- 关键词：微载体细胞培养肝细胞生物材料
- 壳聚糖球形多孔微载体支持下培养的肝细胞功能及其代谢活性检测
- 2011年
- 背景:在肝细胞移植及生物型人工肝研究中,肝细胞培养仍然是其关键,如何方便地获取足够数量、活性较好、功能良好的肝细胞已经成为其首要问题。微载体培养技术作为一项体外高密度细胞培养技术,近年来已在肝细胞的体外培养中得到应用。目的:对壳聚糖球形多孔微载体培养的人肝细胞L-02进行定时的细胞功能和代谢活性检测。方法:对以自制的壳聚糖球形多孔微载体样本为支架培养的人肝细胞L-02进行定时的细胞功能检测(包括测定谷草转氨酶,谷丙转氨酶和乳酸脱氢酶质量浓度)和代谢活性检测(包括检测培养基中白蛋白、尿素、葡萄糖含量),其中实验组为壳聚糖球形多孔微载体支持下培养人肝细胞L-02,对照组为无壳聚糖球形多孔微载体支持下培养人肝细胞L-02,检测时间点为人肝细胞L-02培养的第1,2,3,4,5天。结果与结论:实验组和对照组测定的谷草转氨酶、谷丙转氨酶和乳酸脱氢酶活性在前3d持续下降,第3天降到最低,而从第4天开始重新反弹上升;但白蛋白、尿素和葡萄糖水平在前3d持续上升,第3天升到最高值,而从第4天开始逐渐下降,实验组每天测定上述各项水平始终明显高于对照组(P<0.05),提示实验组中的人肝细胞L-02代谢活性较对照组增强。
- 张瑞韩宝三彭承宏
- 关键词：人工肝脏肝细胞培养微载体壳聚糖
