国家自然科学基金(30930079)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- 附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白的原核表达及纯化被引量：1
- 2011年
- 目的构建人附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白的重组质粒pET28a(+)-Eppin,并研究该质粒在原核细胞中的表达及纯化。方法本研究以人睾丸组织cDNA为模板获得人Eppin基因片段,将其插入pET28a(+)载体His_6-Tag上游,构建重组质粒pET28a(+)-Eppin,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组人Eppin蛋白后,运用SDS-PAGE进行分析和鉴定。大量表达的重组Eppin蛋白经镍柱亲和层析进行纯化,并采用SDS-PAGE进行纯度分析。结果 PCR扩增出约381 bp的Eppin基因片段,双酶切及PCR鉴定证实Eppin基因成功插入pET28a(+)中,SDS-PAGE分析显示表达产物为分子量单位约为17 ku的重组蛋白,与预期结果一致;Eppin的表达量在IPTG诱导表达4 h时最高;约占菌体总蛋白的30%;重组蛋白主要在沉淀中出现,表明原核表达时重组Eppin蛋白以包涵体形式存在;经镍柱纯化后可得纯度高达95%的重组Eppin蛋白。结论成功构建了人附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白重组质粒pET28a(+)-Eppin,该质粒在原核系统中获得了高效融合表达,进一步纯化后可得高纯度的重组蛋白,为开展免疫避孕与生殖免疫的研究奠定基础。
- 张洁丁新良
- 关键词：避孕疫苗原核表达纯化
