国家自然科学基金(81100057)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
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- Accutase和胰蛋白酶消化传代对人胚纹状体来源神经干细胞凋亡的影响被引量：4
- 2015年
- 目的探讨Accutase和胰蛋白酶消化神经干细胞（NSCs）后对其凋亡过程的影响。方法来自人类12～16周自然流产胚胎纹状体组织,分离并体外培养NSCs,将体外培养的第3～5代神经球,分别用胰蛋白酶、Accutase消化,消化过程中仅振荡打散,避免巴斯德吸管反复吹打。将神经球打散成的单细胞悬液接种。用Annexin V/碘化丙啶染色、Hoechst 33342活细胞染色镜下观察等方法,在培养传代后2和24 h时间点检测神经干细胞凋亡率。结果两种酶消化后立即用台盼蓝染色判断细胞活性,Accutase消化后活细胞比例为（91.65±4.43）%,胰蛋白酶仅有（83.10±6.76）%,二者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。体外培养的第3～5代人胚纹状体NSCs形成的神经球传代后2 h,Accutase和胰蛋白酶传代的细胞凋亡率差异有统计学意义（P〈0.01）,而到24 h时间点,Accutase消化的细胞凋亡率经Annexin V/碘化丙啶、Hoechst 33342活细胞染色两种方法检测已经达到50%,而胰蛋白酶消化后的细胞凋亡率在此时间点维持在15%～20%。Accutase消化后的NSCs生长4 d后,克隆形成率和神经球直径分别为（7.83±1.32）%和（43.5±9.76）μm,均显著低于胰蛋白酶传代组的（19.22±3.66）%和（58.4±18.73）μm（P〈0.01）。结论虽然台盼蓝染色显示Accutase消化神经球后的细胞存活比胰蛋白酶更多,但消化后24 h内,Accutase消化的细胞凋亡率显著升高,最终神经球新克隆形成率低,直径更小。胰蛋白酶消化振荡打散神经球后的凋亡率较Accutase具有明显优势;神经球消化后台盼蓝即时染色的结果不足以预示后期NSCs凋亡率。
- 李婷李晨张翠英赵杰
- 关键词：神经干细胞神经球胰蛋白酶
- 激活谷氨酸促代谢型受体8促进肺腺癌A549细胞凋亡被引量：3
- 2015年
- 本文旨在检测谷氨酸促代谢型受体(metabotropic glutamate receptors,mGluR)各亚型在肺腺癌A549细胞中的表达,并进一步探讨呈高表达的mGluR8和mGluR4激活对A549细胞体外生长的影响。采用real-time PCR技术检测A549细胞mGluR各亚型的m RNA表达,采用免疫组化技术检测A549细胞以及肺腺癌组织mGluR8和mGluR4蛋白表达。采用CCK-8试剂盒检测细胞生长,EdU掺入检测细胞DNA合成率,hoechst 33258染色及流式细胞仪检测细胞的凋亡的变化,分别观察mGluR8的激动剂(S)-3,4-DCPG及mGluR4的激动剂VU0155041对A549细胞生长的影响。结果显示:A549细胞I组促代谢型受体mGluR1和mGluR5m RNA呈低水平表达,II组促代谢型受体mGluR2和mGluR3 mRNA无表达,III组促代谢型受体mGluR4、mGluR6、mGluR7和mGluR8 m RNA均有表达,其中以mGluR8的m RNA表达水平最高,mGluR4表达次之;A549细胞及部分患者肺腺癌组织上有mGluR4和mGluR8的蛋白表达。VU0155041对A549细胞的体外生长无明显影响,而(S)-3,4-DCPG呈剂量依赖性抑制A549细胞的生长,并促进其凋亡。这些结果揭示mGluR8激活具有抑制肺癌细胞生长作用,为肺癌防治的研究提供新的线索。
- 李天娇黄艳红陈曦周舟罗四维冯丹丹汉建忠罗自强
- 关键词：A549细胞凋亡
