山西省青年科技研究基金(20051044)
- 作品数：15 被引量：15H指数：2
- 相关作者：牛勃杨利军姚建强樊慧杰王晓媛更多>>
- 相关机构：山西医科大学首都儿科研究所中国疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：山西省青年科技研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 一种超滤管电洗脱装置及应用研究
- 2010年
- 目的介绍一种自制超滤管电洗脱装置的制作方法,并与其他洗脱方法进行比较。方法以超滤管离心管、滤网和海绵制作成超滤电洗脱装置。待分离的蛋白样品用非变性聚丙酰胺凝胶电泳分离后染色、切胶、碎胶后,分别用上述自制超滤电洗脱装置、被动洗脱法和半透膜电洗脱法回收凝胶中的蛋白样品,再通过超滤离心进行脱盐浓缩。最后用Bradford法测定样品浓度,并比较三种洗脱方法的洗脱效率。结果超滤管电洗脱、被动洗脱和半透膜电洗脱分成0.5μg和5μg两组,以三种电洗脱法的蛋白回收率依次为:0.5μg组82%、44%、46%;5μg组77%、58.6%、63.6%。结论用超滤管自制的电洗脱装置制作简单方便,其回收效率比被动扩散法和半透膜电洗脱法高,特别适用于小量蛋白样品的回收。
- 朱智强牛勃
- 关键词：电洗脱超滤
- 蚯蚓体内一组脱氧核糖核酸酶的酶学性质研究被引量：2
- 2008年
- 目的:研究一组新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶(earthworm desoxyribonucleases,EWDs)的主要生化性质。方法:采用SDS-PAGE、MALDI-TOF、紫外分光光度方法。结果:确定了EWD1,EWD2、EWD3(总称为:EWDs)的分子量分别为157.2kDa,69.1kDa和63.5kDa。37℃,pH4.6以小牛胸腺DNA为底物时,EWDs的Km值分别为1.58mg/ml,3.95mg/ml,1.52mg/ml;Vmax分别为5.36mg/(ml·min),2.87mg/(ml·min),4.89mg/(ml·min)。EWDs在55℃保温10min,酶活性完全丧失,在40℃以下酶活性都比较稳定。这3种脱氧核糖核酸酶最适pH值分别是5.2,4.4,4.8,酸性条件下较稳定。Mn2+,Ca2+是蚯蚓组织脱氧核糖核酸酶EWD1,EWD2,EWD3的抑制剂,Mg2+对EWD3有较明显的抑制作用。结论:蚯蚓组织中发现的脱氧核糖核酸酶EWDs具有独特的酶学特征,不同于已经发现的DNaseⅠ和DNaseⅡ,是种新型的脱氧核糖核酸酶,但其作用机理和分类有待于进一步的研究和归类。
- 刘志贞樊慧杰康慧芳姚建强杨利军牛勃
- 关键词：分子量酶学性质
- 蚯蚓体腔液抗病毒活性及其机制的研究被引量：7
- 2008年
- [目的]以赤子爱胜蚓为原料,研究其体腔液的抗病毒活性及可能的机制,为新型抗病毒药物的开发提供思路。[方法]用分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法测定蚯蚓体腔液蛋白酶活性和核酸酶活性;用鸡胚培养检测其抗流感病毒的活性,乙型肝炎病毒表面抗原及e抗原诊断试剂盒检测其对乙型肝炎病毒表面抗原及e抗原的破坏作用。[结果]蚯蚓体腔液具有蛋白酶活性、核酸酶活性和抗病毒活性;各种不同浓度的蚯蚓体腔液对流感病毒的增殖都有显著的抑制作用,且可以抑制乙型肝炎病毒表面抗原和e抗原表达,呈浓度依赖关系。[结论]蚯蚓体腔液具有抗病毒活性,其可能机制是蛋白酶、核酸酶及各种活性成分单独和/或协同作用的结果。
- 刘志贞康慧芳樊慧杰李方杨利军牛勃杨琦
- 关键词：赤子爱胜蚓抗病毒活性蛋白酶活性
- 三种方法测定蚯蚓脱氧核糖核酸酶(EWD_2)的分子量
- 2007年
- 目的用不同方法测定蚯蚓组织中一种新型脱氧核糖核酸酶分子量。方法采用凝胶过滤层析法、SDS-PAGE法和基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF)三种方法测定一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶(EWD2)的分子量。结果凝胶过滤层析法、SDS-PAGE法和质谱法测定其分子量分别为62.16kD、62.08kD和69.075kD。结论EWD2为单亚基脱氧核糖核酸酶,其分子量在60-70kD。
- 姚建强王晓媛罗佳李方张建林杨利军牛勃
- 关键词：色谱法蚯蚓脱氧核糖核酸酶分子量
- 一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶酶学性质的研究被引量：2
- 2008年
- 目的研究蚯蚓组织中1种新型脱氧核糖核酸酶(EWD1)的主要酶学性质。方法用SDS-PAGE凝胶电泳、质谱分析、毛细管等点聚焦电泳法和酶活性测定等方法。结果EWD1的相对分子质量约为157000。Mn2+、Ca2+是该酶的抑制剂,Mg2+对酶的活性基本上没有影响。该酶的最适温度为37℃,最适pH值为5.2,等电点为6.12。以小牛胸腺DNA为底物,测得Km为1.58 mg/mL,Vmax为5.36 mg/(mL.min)。结论蚯蚓组织中发现的此种脱氧核糖核酸酶EWD1具有特殊的酶学性质,明显区别于已知的脱氧核糖核酸酶类。
- 王晓媛姚建强康慧芳樊慧杰杨利军牛勃
- 关键词：蚯蚓脱氧核糖核酸酶酶学性质
- 蚯蚓新型脱氧核糖核酸酶的相对分子质量测定被引量：1
- 2007年
- 目的测定蚯蚓组织中一种新型脱氧核糖核酸酶(EWD3)的相对分子质量。方法采用凝胶过滤层析法、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳法(SDS-PAGE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)3种方法测定一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶(EWD3)的相对分子质量。结果凝胶过滤层析法、SDS-PAGE法和质谱法测定其相对分子质量分别为55080、58270和63460。结论凝胶过滤层析法和SDS-PAGE法可以常规粗略测定蛋白的相对分子质量,质谱法可以比较准确测定蛋白的相对分子质量,EWD3为单亚基蛋白,其相对分子质量约在55000￣65000之间。
- 罗佳姚建强王晓媛李方杨利军王建华牛勃
- 关键词：地龙分子量
- 分离地龙DNA裂解蛋白过程中组织破碎法、pH及温度的选择(英文)
- 2009年
- 目的观察分离过程中三种处理方法制备的地龙组织匀浆及pH、温度对地龙DNA裂解蛋白(EWDNase)的影响。方法采用糖溶解法、机械法和超声破碎法制备地龙组织匀浆;不同温度、pH条件下进行EWDNase的粗提取。测定地龙组织匀浆及不同温度、pH条件下制备的粗提取液中EWDNase活性和蛋白含量,计算其比活性。结果三种方法获得地龙组织匀浆中EWDNase比活性大小无显著性差异(P>0.05);EWDNase耐热(75℃,30min仍有活性),pH3.4-5.4具有较高比活性。结论机械法因其操作简便、经济实用、误差小、重复性高可以用来处理地龙组织制备组织匀浆。提取EWDNase过程中宜采用酸性缓冲体系和较高温度(65-75℃)的热变性条件。
- 闫萍郭睿张栋王建华王惠珍牛勃
- 关键词：地龙温度PH
- 蚯蚓组织脱氧核糖核酸酶EWD3的生化性质被引量：1
- 2008年
- 目的研究赤子爱胜蚓组织中1种脱氧核糖核酸酶（EWD3）的主要生化性质。方法采用Lowry法测定酶的蛋白含量，SDS-PAGE和MALDI-TOF方法测定相对分子质量，毛细管等点聚焦电泳法测定等电点，并测定EWD3酶的酸、碱稳定性、温度稳定性、激动剂和抑制剂对酶活性的影响及酶促反应米氏常数Km值。结果EWD3酶的蛋白含量为2．1mg／ml，相对分子质量为63460，等电点为6．20，Km值为1．52mg／ml，最适pH值为4．4～5．2，不耐高温。Mg^2＋、ca^2＋、Mn^2＋、10和20mmol／LEDTA对EWD3酶活性有抑制作用。这些参数与已发现的各种DNases相比有明显差异。结论蚯蚓组织中已发现的脱氧核糖核酸酶EWD3具有特殊的酶学特征。
- 康慧芳樊慧杰王晓媛姚建强杨利军牛勃
- 关键词：赤子爱胜蚓脱氧核糖核酸酶生化性质
- 地龙脱氧核糖核酸酶的部分性质研究及作用初探被引量：1
- 2008年
- 目的研究地龙体内两种新型脱氧核糖核酸酶(LDs)的部分生化性质,并对其作用进行初步探索。方法采用Sephacryl-200柱层析、毛细管等电聚焦电泳法、琼脂糖凝胶电泳等方法。结果初步得出LD1、LD2分子量为126、62kDa;确定了等电点分别为6.12、6.05。LD1、LD2对细菌质粒DNA、λDNA均有分解作用。结论地龙中的LDs是一种新型的脱氧核糖核酸酶。明确LDs的分子量、等电点有助于优化LDs的提取工艺以及LDs的进一步研究。对细菌质粒DNA、λDNA的降解提示LDs有可能对抗细菌的耐药性。
- 樊慧杰康慧芳姚建强王晓媛杨利军牛勃
- 关键词：地龙脱氧核糖核酸酶分子量等电点
- 一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶相对分子质量的测定被引量：1
- 2007年
- 目的测定从蚯蚓组织中提取纯化的一种新型脱氧核糖核酸酶的相对分子质量。方法采用凝胶过滤层析法、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法和基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法三种方法测定一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶(EWD1)的相对分子质量。结果凝胶过滤层析法、SDS-PAGE法和质谱法测定其相对分子质量分别为126440、136320和157190。结论EWD1由两个亚基组成,其相对分子质量最终确定为157190。
- 姚建强张建林王晓媛李方樊慧杰杨利军牛勃
- 关键词：分子质量
