国家自然科学基金(81000005)
- 作品数：6 被引量：34H指数：4
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- 相关机构：广州医学院第一附属医院广州医科大学更多>>
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- 人Ⅱ型肺泡上皮细胞的分离培养及表型维持研究被引量：4
- 2012年
- 目的建立人Ⅱ型肺泡上皮细胞（ATⅡ）分离、纯化、原代培养及鉴定的方法，探索体外培养的表型维持情况。方法取手术切除的边缘肺组织，用胰酶、弹性蛋白酶联合法消化分离人ATⅡ细胞粗悬液，经过滤、差速贴壁、密度梯度分离、磁珠分选纯化。用肺表面活性蛋白C前体（pro-SP-C）免疫荧光、溶酶体绿色荧光染料（Green DND-26）荧光探针染色以及透射电镜鉴定人ATⅡ细胞；用pro-SP-C免疫荧光法和Green DND-26荧光探针染色法评估细胞纯度；锥虫蓝染色法评估细胞活性；并运用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测体外培养过程中肺表面活性蛋白（SP-A、SP-B、SP-C、SP-D）的表达情况。结果人ATⅡ细胞产量为（5～10）×10^5／g；锥虫蓝染色细胞活性为（93±2）％；pro-SP-C免疫荧光、Green DND-26荧光探针鉴定、评估细胞纯度一致，为98％左右，透射电镜下观察ATⅡ细胞特有的板层小体结构清晰可见。SP-A、SP-C表达持续时间在24d左右（SP-A16d：0．52±0．03，20d：0．35±0．02，24d：0．26±0．01，28d：0．10±0．08；SP-C16d：0．68±0．16．20d：0．31±0．04，24d：0．18±0．06，28d：0．14±0．09），SP-B、SP-D表达持续时间可在28d左右（SP-B16d：1．05±0．17．20d：0．76±0．35．24d：0．55±0．15，28d：0．36±0．19；SP-D16d：0．52±0．19，20d：0．33±0．12，24d：0131±0．04，28d：0．23±0．02）。结论成功建立了一种分离、纯化及鉴定人ATⅡ细胞的方法，此方法能较持久维持ATⅡ细胞表型。
- 吴松林毛璞傅成莫红樱何为群刘晓青黎毅敏
- 关键词：肺泡上皮细胞原代细胞培养表面活性物质板层小体
- 血清降钙素原在严重脓毒血症病原诊断中的价值研究被引量：14
- 2014年
- 目的评价血清降钙素原（PCT）水平是否可以早期区分血流感染的不同病原体。方法回顾性分析广州医科大学第一附属医院重症医学科2011年1月至2013年12月收治的脓毒血症并有血培养阳性的资料完整患者142例,根据血培养阳性结果分成革兰阳性菌组（G＋组）51例、革兰阴性菌组（G-组）75例和真菌组（fungal组）16例。比较三组患者间PCT与白细胞（WBC）计数水平。结果 G-组患者的PCT（65.32±49.23）μg/L明显高于G＋组（5.36±4.37）μg/L和真菌组（1.59±1.22）μg/L,三组间差异有统计学意义。而WBC在三组间比较差异无统计学意义（P=0.62）。为PCT诊断是否由G-菌导致血流感染而描绘ROC曲线,曲线下面积为0.973（95%CI0.953～0.993）。诊断阈值为〈17μg/L。特异度为95%,敏感度为84%。为PCT诊断是否由鲍曼不动杆菌导致血流感染而描绘ROC曲线,曲线下面积为0.965（95%CI0.941～0.990）。诊断阈值为〈42μg/L,特异度为92%,敏感度为85%。为PCT诊断是否由真菌导致血流感染而描绘ROC曲线,曲线下面积为0.965,95%CI0.934～0.996。利用cut-off法得出PCT对于诊断是否真菌导致血流感染的诊断阈值为〈2.1μg/L。特异度为82%,敏感度为95%。结论血清PCT升高水平可以早期鉴别血流感染的病原菌,具有较高的敏感度和特异度。
- 刘晓青桑岭农凌波陈思蓓何为群黎毅敏
- 关键词：血流感染降钙素原革兰阳性菌革兰阴性菌
- 机械牵张对人肺上皮细胞转分化的影响被引量：7
- 2013年
- 目的 研究周期性机械牵张刺激对人肺上皮细胞BEAS-2B向间质转分化的影响.方法 应用FX-5000T细胞牵张加载系统对BEAS-2B细胞以0.33 Hz频率分别施加10％或20％牵张应力24、48和72 h,相差显微镜下观察细胞形态变化；应用免疫荧光双标染色和实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）分别检测牵张前后E-钙黏蛋白（E-cadherin）、细胞角蛋白-8（CK-8）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和波形蛋白（Vimentin）的蛋白及mRNA表达情况.结果 ①20％病理牵张48 h后,BEAS-2B细胞开始由鹅卵圆形变为长梭形,牵张72 h细胞间隙明显增宽,细胞长梭形改变更明显.10％生理牵张下细胞形态无明显改变.②免疫荧光双标染色结果显示,20％牵张72 h时CK-8蛋白表达明显下调,E-cadherin表达明显下调,α-SMA蛋白表达明显增强.③与未牵张对照组（作为1）相比,20％牵张组E-cadherin mRNA表达在牵张48 h和72 h分别下调至0.388±0.056和0.247±0.064（均P＜0.05）,CK-8 mRNA表达在牵张72 h下调至0.436 ±0.060 （P＜0.01）,α-SMA mRNA表达在牵张48 h和72 h分别上调至1.437±0.267和1.261±0.247（均P＜0.05）,VimentinmRNA表达在牵张48 h上调至1.679±0.172（P＜0.05）.10％牵张组E-cadherin mRNA表达在牵张72 h下调至0.387±0.081（P＜0.05）,Vimentin mRNA表达在牵张48 h上调至1.688±0.179（P＜0.05）；其余各指标变化不明显,差异无统计学意义.结论 持续过度牵张能诱导人肺上皮细胞BEAS-2B发生上皮向间质转分化.
- 张容毛璞傅威庞晓清王银燕杨淳何为群刘晓青黎毅敏
- 关键词：机械牵张上皮间质转化急性呼吸窘迫综合征肺上皮细胞
- 用实时荧光定量PCR选择急性呼吸窘迫综合征患者血清microRNA内参照基因
- 2015年
- 目的探讨用实时荧光定量PCR检测急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者血清微小RNA(microRNA,miRNA)的表达并选择最优内参照基因。方法用实时荧光定量PCR检测40例ARDS患者及20例体检健康者血清中5个miRNA候选内参照基因miR-16-5p、miR-93-5p、miR-101-3p、miR-191-5p和U6,并用ge Norm法、Norm Finder法、bestkeeper法和相对△Ct法4种算法分析内参照基因稳定性,通过对4种算法稳定值进行排序并计算几何均数的方法分析综合稳定值。结果比较5个候选内参照基因在ARDS患者和体检健康者的表达水平,差异均无统计学意义(P均>0.05)。4种算法综合分析显示,miR-16-5p以最小的稳定值1.32成为综合稳定性最高的内参照基因,其次是miR-101-3p、U6、miR-93-5p和miR-191-5p。结论实时荧光定量PCR法确定ARDS患者血清miRNA最优的内参照基因为miR-16-5p。
- 李建春毛璞李希潘莹吴苏龙庞晓清许智恒黄勇波刘晓青黎毅敏
- 关键词：急性呼吸窘迫综合征实时荧光定量PCR
- 脂多糖诱导气道上皮细胞过氧化物氧化还原酶1的表达被引量：3
- 2013年
- 目的探讨脂多糖（LPS）作用于气道上皮细胞后对过氧化物氧化还原酶1（prdx1）表达的影响。方法培养正常人气道上皮细胞株BEAS-2B，以0、1、10mg／LLPS作用于气道上皮细胞12h和24h后，用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测prdx1 mRNA表达；以0、0．1、0．5、1、5、10mg／L LPS作用于气道上皮细胞12h后，用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测prdx1蛋白表达。结果RT—PCR结果显示：LPS作用于细胞12h内，随着LPS作用剂量的增加，prdx1 mRNA表达增高，10mg／LLPS作用12hprdx1 mRNA表达较对照组显著增加（2．014±0．197比0．644±0．178，P〈0．05）；但随着LPS作用时间的延长，24h时prdx1 mRNA表达有所回落。Western blotting结果显示，随着LPS作用剂量的增加，prdx1蛋白表达逐渐增高，5mg／L LPS作用12h时prdx1蛋白显著高于对照组（1．069±0．175比0．328±0．010，P〈0．05），10mg／LLPS作用12h时维持在高水平（0．984±0．220）。结论10mg／L的LPS作用于BEAS-2B细胞12h后可诱导prdx1的基因和蛋白表达增加。
- 刘祎婷毛璞刘晓青何为群莫红缨黎毅敏
- 关键词：脂多糖人气道上皮细胞
- 机械牵张对人肺动脉内皮细胞中细胞因子及细胞间黏附分子-1表达的影响被引量：8
- 2013年
- 目的 观察机械牵张力对人肺动脉内皮细胞（HPAEC）中细胞因子及黏附分子表达的影响,为探讨呼吸机相关性肺损伤（VILI）提供理论依据.方法 采用机械牵张装置Flexcell FX-5000T对HPAEC细胞以0.5 Hz频率施加10％或20％牵张应力牵张3、6、12和24 h.应用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）以及蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测机械牵张前后白细胞介素（IL-6、IL-8）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）等细胞因子及细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的基因和蛋白表达.结果 随牵张应力的增加,IL-8、MCP-1、ICAM-1的mRNA和蛋白表达随牵张时间的延长逐渐增加.与对照组（作为1）相比,20％牵张组牵张24 hHPAEC细胞的IL-8 mRNA表达上调至1.58±0.10,MCP-1mRNA表达上调至2.85±0.52,ICAM-1mRNA表达上调至1.90±0.14（均P＜0.05）.与对照组相比,20％牵张组牵张24 h HPAEC细胞的IL-8、MCP-1蛋白表达（均ng/L）显著增加（IL-8∶3401.08±439.60比1422.60±66.98,MCP-1∶1117.64±237.54比307.88±80.84,均P＜0.05）；ICAM-1蛋白表达上调至2.15±0.40（P＜0.05）；而IL-6 mRNA和蛋白水平较对照组无明显变化.结论 机械牵张可上调HPAEC细胞IL-8、MCP-1和ICAM-1的表达,这可能是机械通气致肺损伤的发病机制之一.
- 傅威毛璞张容庞晓清莫红缨何为群刘晓青黎毅敏
- 关键词：机械牵张炎症因子细胞间黏附分子-1
