重庆市自然科学基金(CSTC2005BB5027)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 相关机构：第三军医大学新桥医院更多>>
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- 少突胶质细胞祖细胞高效分离培养及EGFP基因转染
- 2008年
- 目的:建立高效分离少突胶质细胞祖细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)的方法,并转染增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因。方法:采用2次接种培养和差速振荡分离,结合使用神经营养因子(bFGF、PDGF-AA),体外分离纯化和扩增培养OPCs,用抗A2B5、GFAP、CNPase免疫荧光抗体鉴定细胞类型。采用脂质体介导EGFP基因转染OPCs,筛选获得稳定表达EGFP的OPCs细胞。结果:分离培养的OPCs细胞呈A2B5阳性,纯度达到99%,具有增殖和双向分化的潜能(GFAP阳性的2型星形胶质细胞和CNPase阳性的少突胶质细胞),传代培养1个月仍具有增殖能力。EGFP基因转染后OPCs细胞能发出绿色荧光,并继续保持增殖分化特性。结论:二次接种培养和差速振荡分离法可获得高纯度OPCs细胞;EGFP基因转染可作为示踪OPCs迁移的有效方法。
- 陈焕然黄其林杨辉马玉新阴金波张伟严稽文
- 关键词：细胞培养增强型绿色荧光蛋白基因转染
- Sema3A-Fc真核表达载体构建及诱导少突胶质细胞祖细胞迁移作用观察
- 2008年
- 目的构建真核表达载体pIGSema3A-Fc,并观察Sema3A-Fc融合蛋白对少突胶质细胞祖细胞(OPCs)迁移的作用。方法运用DNA重组技术自原核表达载体上将鸡来源的Sema3A基因克隆到真核表达载体pIGIgG1Fc上,并用双酶切、测序法进行鉴定。采用脂质体法转染非洲绿猴肾细胞株(COS-7)细胞进行融合蛋白表达,培养3天后提取上清液,经蛋白A亲和纯化,Western blotting进行鉴定。利用插入式细胞迁移小室(millicell-PCF)细胞迁移仓观察其对OPCs细胞迁移的诱导作用。结果重组质粒双酶切产生了2.24kb目的片段及5.7kb载体片段。测序证实构建的Sema3A膜外区与Sema3A-Fc cDNA阅读框完整,连接部位序列正确;Western blotting证实有Sema3A-Fc融合蛋白表达。迁移试验证明其对少突胶质细胞祖细胞迁移具有推斥作用。结论成功构建了Sema3A-Fc真核表达载体,并使有生物学活性的Sema3A-Fc融合蛋白在COS-7细胞上获得了稳定表达,为进一步研究OPCs细胞定向迁移奠定了基础。
- 陈焕然黄其林杨辉马玉新张伟
- 关键词：真核表达细胞迁移
