国家自然科学基金(30270974)
- 作品数：8 被引量：46H指数：4
- 相关作者：余为一仲大莲李槿年许发芝鲍鸣更多>>
- 相关机构：安徽农业大学中国科学技术大学山东省滨州畜牧兽医研究院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省“十五”科技攻关项目安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 新城疫病毒(NDV)F基因的克隆及其真核表达重组质粒的构建被引量：9
- 2003年
- 应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和一对自行设计的引物,从新城疫病毒(NDV)F48E9株扩增出长度为1664bp的DNA片段。与已报道的NDV-融合蛋白(F)基因比较,两者大小一致。经限制性内切酶反应,获得两个预期大小的片段。将克隆的F基因定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经酶切和测序鉴定,证明构建的重组质粒含有NDV-F基因。
- 许发芝仲大莲余为一
- 关键词：新城疫病毒F基因真核表达重组质粒
- 小鼠Ii基因克隆、表达及其抗体制备
- 为获取小鼠Ii编码基因,利用原核表系统进行诱导表达,提取与纯化目的蛋白,并制备其相应抗体。应用RT-PCR获取小鼠Ii编码基因;插入pGEX-4T-1表达载体,SDS-PAGE分析蛋白表达;纯化融合蛋白,免疫家兔,制备抗...
- 董林王艳萍沈志强余为一
- 关键词：基因克隆抗体
- 文献传递
- 鸡Ii基因的克隆、鉴定及其原核表达被引量：2
- 2003年
- 从ConA诱导的5周龄SPF鸡脾细胞中提取总RNA,用自行设计的一对引物通过RT-PCR方法扩增出鸡恒定链(invariantchain,Ii)基因片段。经酶切鉴定后,再将该片段克隆到pcDNA3载体中,测定其DNA序列,结果表明该片段长度为669bp,其DNA序列与GenBank登录的基本一致。再将该片段插入原核表达载体PGEX-4T-1,并导入菌株BL21,经诱导培养、蛋白提取和SDS-PAGE,获得分子量约为50kD的特定蛋白条带,表明所克隆的鸡Ii基因在原核细胞中得到表达。
- 刘玉华仲大莲许发芝余为一
- 关键词：II基因克隆原核表达
- 鸡血清IgG纯化方法研究被引量：9
- 2007年
- [目的]为了获得高纯度鸡免疫球蛋白(Ig),并保持其生物学活性。[方法]比较几种纯化鸡血清免疫球蛋白(IgG)的方法。用饱和硫酸铵(NH4)2SO4沉淀法或乙醇沉淀法提取鸡血清IgG,经透析除盐,将初提物过sephadexG-200柱进一步分离IgG,经免疫电泳和SDS-PAGE电泳进行纯度鉴定。[结果]结果表明:在该试验条件下,(NH4)2SO4盐析和乙醇沉淀法获得的鸡IgG经sephadexG200柱分离获得高纯度的鸡IgG。[结论]该研究为找到较好的纯化鸡血清IgG方法提供了试验依据。
- 舒文祥余为一王静
- 关键词：IGG纯化SDS-PAGE
- 小鼠Ii基因克隆、表达及其抗体制备
- 2009年
- 为了获取小鼠Ii编码基因,利用原核表达系统进行诱导表达,提取纯化目的蛋白并制备其相应抗体,应用RT-PCR获取小鼠Ii编码基因;插入pGEX-4T-1表达载体,SDS-PAGE分析蛋白表达;纯化融合蛋白,免疫家兔,制备抗血清。结果扩增出了与预期大小相同的700bp的特异性基因条带,其与GenBank登录的鼠Ii基因同源性高达99.2%～99.8%;SDS-PAGE检测到大小约49.5ku的特异性蛋白条带;应用琼脂双向免疫扩散、间接ELISA、Western-blot、间接免疫荧光法等进行抗体活性鉴定,证明获得了特异性强、具有良好生物活性的抗体。成功克隆了小鼠Ii编码基因,有效进行了诱导表达,并制备了具有良好免疫学活性的特异性抗Ii抗体。
- 董林王艳萍沈志强余为一
- 关键词：基因克隆抗体
- 鸡IL-2基因克隆及其重组质粒的构建与表达被引量：2
- 2004年
- 利用一对自行设计的引物,通过反转录-聚合酶链反应(RT PCR),从ConA诱导的5周龄SPF鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素2(IL 2)基因片段,其长度为439bp,经酶切鉴定,初步确定为鸡IL 2基因。再将该IL 2基因片段定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经DNA序列鉴定,表明构建的重组质粒含有IL 2基因,该基因的cDNA序列与Sundick报道的结果基本一致。然后,将IL 2基因片段插入原核表达载体pGEX 4T 1,并导入菌株BL21,经诱导培养、蛋白提取和SDS PAGE,获得分子量约为42000的蛋白条带,表明所克隆的鸡IL 2基因在原核细胞中得到表达。
- 许发芝仲大莲刘玉华余为一李槿年曾明华
- 关键词：IL-2基因基因克隆重组质粒RT-PCR白细胞介素2
- 鸡γ-干扰素基因的克隆与原核表达被引量：11
- 2004年
- 应用反转录-聚合酶链式反应(RT PCR)技术,通过一对自行设计的引物,从经ConA诱导活化的鸡脾淋巴细胞的RNA中扩增出一特异性基因片段,其大小约为500bp。该片段经酶切和测序鉴定为鸡IFN γ基因。将其插入原核表达载体pGEX 4T 1,并导入大肠杆菌BL21细胞中,经IPTG诱导培养,获得分子量约为43000的蛋白带,表明所克隆的CHIFN γ基因在原核细胞中得到表达。
- 鲍鸣仲大莲许发芝余为一李槿年
- 关键词：Γ-干扰素基因克隆RT-PCR免疫学
- 鸡MHCⅡβ链基因的克隆和表达及其抗体制备被引量：11
- 2006年
- 用自行设计的1对引物,通过RT-PCR从鸡脾细胞中分别克隆了鸡MHCⅡβ链基因片段,大小为798bp。核苷酸测序结果表明,与已登录的基因序列同源性为95%。将该基因片段插入含谷胱甘肽(GST)基因的质粒pGEX-4T-1,构建了pGEX-4T-1-chMHCⅡβ。经诱导表达,获得分子大小约为53 000的融合蛋白,其中chMHCⅡβ链大小约27 000。经亲和层析,获得纯化GST-β融合蛋白,进一步用此蛋白免疫小鼠,制备了鼠源抗鸡MHCⅡβ链抗体。经过琼扩和ELISA检测,表明该融合蛋白具有良好的抗原性。
- 徐志本余为一仲大莲李槿年周杰
- 关键词：克隆原核表达
- 编码鸡CD8α链无信号肽基因片段的克隆与表达被引量：4
- 2006年
- 应用RT-PCR技术,通过自行设计的1对引物以ConA诱导的鸡胸腺淋巴细胞RNA为模板,扩增出编码鸡CD8α链的无信号肽基因片段,大小为651 bp。该片段经酶切初步鉴定后,被插入pMD18-T载体进行测序,发现与已发表的鸡CD8α链基因序列的同源性达98%。进一步将该片段插入原核表达质粒,构建pGEX-4T-1-CD8α,并转化大肠杆菌BL21。经IPTG诱导培养并提取表达蛋白质。在SDS-PAGE电泳图谱中可见大小约为50 000的蛋白带,表明所克隆的编码鸡CD8α链无信号肽基因片段在原核细胞中得到表达。
- 谢国化鲍鸣仲大莲余为一李槿年
- 关键词：CD8Α原核表达
