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恶性疟原虫抗原对健康人外周血T细胞免疫功能的影响: 2014年; 目的探讨恶性疟原虫抗原对健康人外周血T淋巴细胞免疫功能的影响。方法健康成人外周血单个核细胞(PBMC)体外分别用恶性疟原虫(P.f)抗原(5μg/ml)和正常红细胞(nRBC)抗原(5μg/ml)进行刺激,同时给予IL-2维持细胞增殖,另外设立只加IL-2的阴性对照组进行培养。培养12 d时,刺激组细胞再用对应的抗原刺激20 h,用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群分泌IL-4和IFN-γ的情况,并用羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(Carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFSE)标记法检测T细胞增殖反应。结果健康人PBMC经P.f抗原刺激扩增后CD4+T细胞的增殖指数(PI)明显高于nRBC抗原刺激组和阴性对照组(P均<0.05),但3组γδT的PI差异无统计学意义(P>0.05)。P.f抗原组分泌IL-4的CD4+T细胞百分率明显高于nRBC抗原组和阴性对照组(P均<0.05),但3组分泌IFN-γ的CD4+T细胞百分率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 P.f抗原在体外可刺激健康人外周血CD4+T细胞增殖活化,后者通过优先分泌IL-4而发挥免疫调节作用。; 陈立陶莉李倩陶志勇方强夏惠; 关键词：恶性疟原虫抗原 T细胞 IL-4 IFN-Γ

抗疟原虫单抗M26-32 IgM的单体化及其免疫学特性研究被引量：2: 2014年; 目的改造IgM类抗疟原虫单抗M26-32为单体IgM亚单位,胶体金标记天然和改造后两种M26-32用于检测疟原虫抗原。方法复苏培养M26-32杂交瘤细胞,接种BALB/c小鼠,收集含有单抗的腹水,用商品HiTrap IgM HP柱纯化腹水中的IgM抗体,并用L-半胱氨酸裂解IgM类M26-32单抗成单体IgM亚单位。经间接免疫荧光检定两种抗体的效价,并用胶体金标记,分别检测恶性疟原虫和间日疟原虫可溶性抗原。结果接种20只小鼠,共采集约80mL单抗腹水,经HiTrap IgM HP柱纯化,获得了纯度较高的M26-32单抗。经L-半胱氨酸裂解后,Native电泳显示天然IgM被裂解为单体亚单位,IFA结果显示,亚单位M26-32与天然五聚体IgM滴度无差别。经胶体金标记后,两种金标抗体均分别能检测1∶100稀释的恶性疟原虫和1∶10稀释的间日疟原虫可溶性抗原。结论建立了L-半胱氨酸裂解IgM类M26-32单抗为单体IgM亚单位及其胶体金标记的方法,为利用M26-32进一步制备相应快速诊断工具奠定基础。; 陶志勇徐岁夏惠顾亚萍刘耀宝方强高琪; 关键词：疟疾 IGM 胶体金

基于蛋白重复序列及线性B细胞表位预测筛选间日疟原虫特异性抗原肽: 2014年; 目的建立一种基于蛋白重复序列及线性B细胞表位预测筛选间日疟原虫(Plasmodium vivax,P.vivax)特异性抗原肽的方法。方法以PlasmoDB数据为基础,建立间日疟原虫蛋白序列数据库。编写重复序列查找软件,逐一检索16 aa多肽在全部蛋白序列中的重复次数,统计出重复较高者进行连续B细胞表位预测,优选具有间日疟原虫特异性的肽进行合成,偶联钥孔戚血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)后免疫小鼠,并检测抗体滴度。结果通过软件分析间日疟原虫全部5 432个蛋白序列中的16肽的重复次数,利用BcePred网站预测其中重复较高的1 000个序列,获得22个候选肽,经聚类分析和相似性比较,优选到5个潜在特异性肽,人工合成并偶联KLH后免疫小鼠诱生的抗体滴度均超过1:9 000。结论建立了一种基于蛋白重复序列联合线性B细胞表位预测筛选间日疟原虫特异性抗原肽的方法,得到的5个肽均能诱导小鼠产生高滴度抗体。; 陶志勇徐岁王媛媛方强夏惠高琪; 关键词：间日疟原虫疟疾抗原表位

中国中部地区间日疟原虫分离株Duffy血型结合蛋白Ⅱ区的克隆表达与初步鉴定: 2012年; 目的克隆中国中部地区间日疟原虫分离株Duffy血型结合蛋白Ⅱ区基因(PvDBPⅡ),体外表达和鉴定重组PvDBPⅡ蛋白。方法PCR法从间日疟患者血液DNA样品中扩增PvDBPⅡ基因,将产物插入到原核表达载体pET28a(+)中,构建pET28a PvDBPⅡ重组表达质粒,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3+),异丙基βD硫代吡喃半乳糖苷诱导表达带有His标签的重组蛋白,采用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,相应表达物分别采用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行分析鉴定。结果PCR扩增的PvDBPII基因为1.1 kb,重组pET28a PvDBPⅡ质粒经测序验证,其插入片段序列与GenBank参考序列相似性为99%,转化E.coli所表达的重组蛋白分子量约为44 kDa,且能被间日疟患者血清特异性识别。结论成功克隆了PvDBPⅡ基因,表达了重组PvDBPII蛋白,为进一步研究基于PvDBPⅡ的红内期间日疟疫苗奠定了基础。; 刘丹夏惠陶志勇陈勇方强王雪梅孙新高颖买月琴; 关键词：间日疟原虫疟疾

急性期间日疟患者血浆γ-干扰素和白细胞介素-17水平分析: 2014年; 目的:分析急性期间日疟患者血浆中γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-17(IL-17)水平。方法:用酶联免疫吸附方法检测19名急性期间日疟患者(间日疟组)和20名健康志愿者(对照组)血浆中IFN-γ、IL-17水平。结果:间日疟组患者血浆中IFN-γ和IL-17水平分别为(18.86±6.77)pg/ml和(41.46±21.03)pg/ml,均明显高于对照组的(9.99±8.78)pg/ml和(25.23±11.83)pg/ml(P<0.01)。结论:间日疟患者血浆中IFN-γ和IL-17的水平均升高。; 孔评石陶志勇陶莉方强夏惠; 关键词：间日疟 Γ-干扰素白介素-17

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安徽省高校省级自然科学研究项目(KJ2012A200)