天津市科技发展战略研究计划项目(003119611)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：孟磊许静刘俊霞贾海蓉宋增璇更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：天津市科技发展战略研究计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 原核表达载体pOPE101-8E5的改构及单链抗体的表达鉴定
- 2007年
- 利用基因重组技术将链亲和素(core-streptavidin)cDNA插入原核表达载体pOPE101-8E5的3′端,并用单链抗体scFv-C4的重链和轻链可变区cDNA取代其scFv-8E5,构建重组表达载体pOPE101-C4∷core-streptavidin。将该表达载体转化入在大肠杆菌中进行诱导表达,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法分析表达产物的表达量和产物活性。结果提示成功地获得一个分子量约为45kDa的scFv-C4∷core-streptavidin的融合蛋白,它可结合KG1a细胞裂解物中分子量约为60kDa、45kDa的蛋白带,且其结合功能可以通过融合蛋白中的链亲和素基因直接测定。
- 许静刁世勇张磊徐洁孟磊
- 关键词：链亲和素单链抗体融合蛋白
- 引导选择抗细胞表面分子单链抗体被引量：3
- 2004年
- 目的 用引导选择方法从抗KG1a细胞的噬菌体展示抗体库中分离单链抗体。方法 首先用KG1a细胞吸附法富集抗体库3轮或未富集,再分别用抗CD34单克隆抗体为引导分子进行引导选择,分离单克隆后用免疫荧光和流式细胞术鉴别其细胞结合特异性。酶联免疫吸附法分析部分克隆与CD34抗原的结合,并对10个阳性克隆进行DNA序列分析。用一级结构不同的单链抗体作免疫印迹,鉴别其抗原分子量。结果 从144个经3轮富集和引导选择的单菌落中挑选出100个阳性单克隆,从96个未经富集的文库中引导选择出2个阳性克隆。102个阳性克隆中47个可识别KG1a、HL60、U937、和CEM细胞(:KG1a+、HL60+、U937+、CEM+),55个只识别KG1a细胞(KG1a+、HL60-、U937-、CEM-)。其中28个只识别KG1a细胞的单克隆经ELISA检测均不结合CD34抗原。10个阳性克隆的DNA序列分析显示来自4种不同克隆,所结合的抗原显示不同的分子量。结论从抗KG1a单链抗体库分出102个能识别造血干细胞和祖细胞的阳性克隆,引导选择在改进筛选效率方面具有优越性。
- 刘俊霞孟磊许静贾海蓉宋增璇
- 关键词：单链抗体
