辽宁省科学技术计划项目(2012225072)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 相关作者：高英王恩华徐慧慧惠林萍邱雪杉更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第四医院中国医科大学更多>>
- 发文基金：辽宁省科学技术计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 非小细胞肺癌中过表达RNF146对Axin和β-catenin表达和定位的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:观察E3泛素连接酶RNF146表达对Axin和β-catenin蛋白表达的影响,探讨RNF146与Wnt/β-catenin信号通路在非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展中的作用。方法:应用免疫组织化学EnVision法检测133例NSCLC患者肺癌中RNF146、Axin和β-catenin的表达。构建RNF146过表达质粒,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot和细胞免疫荧光方法研究RNF146在肺癌细胞株A549和LTE中过表达对Axin和β-catenin表达及定位的影响。结果:NSCLC患者肺癌组织中RNF146高表达72例(54.1%)中49例(68.1%)显示Axin表达减弱或缺失,19例(26.4%)出现β-catenin细胞核阳性表达;RNF146低表达61例(45.9%)中只有26例(42.6%)显示Axin表达减弱或缺失,7(11.5%)例出现β-catenin细胞核阳性。RNF146与Axin的表达呈明显的负相关(P=0.003),与β-catenin的细胞核表达呈正相关(P=0.047)。肺癌细胞系中过表达RNF146能够下调Axin蛋白的表达,诱导β-catenin蛋白表达和核内分布,但对Axin和β-catenin mRNA水平没有影响。结论:RNF146可能通过Wnt/β-catenin通路参与肺癌的发生发展。
- 高英徐慧慧李锐王睿惠林萍邱雪杉王恩华
- 关键词：非小细胞肺癌E3泛素连接酶AXIN
- shRNA沉默环指蛋白146基因对非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭及其相关蛋白表达的影响
- 2014年
- 目的:shRNA沉默环指蛋白146(RNF146)基因,观察非小细胞肺癌细胞中RNF146沉默对肺癌细胞迁移和侵袭及其相关蛋白表达的影响。方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法用于筛选RNF146高表达肺癌细胞系。构建shRNA-RNF146真核表达载体,瞬时转染A549和H1299肺癌细胞,Western blot检测转染效率。划痕实验评价肺癌细胞体外迁移能力;Buyden小室实验检测肺癌细胞体外侵袭能力。Western blot检测肺癌细胞中迁移和侵袭相关蛋白的表达。结果:RT-PCR和Western blot方法筛选RNF146高表达肺癌细胞系,显示A549和H1299细胞中RNF146蛋白均高于其它细胞系。shRNA-RNF146转染A549和H1299细胞系后,划痕实验显示转染组细胞24小时迁移率明显低于空载体组和未转染组(P<0.01)。Buyden小室实验结果表明转染组比空载体组和未转染组穿膜细胞数目明显减少(P<0.05)。Western blot检测与细胞迁移和侵袭相关的调控蛋白(MMP2、MMP7、MMP9、RhoA、RhoB、RhoC、Rock1、TIMP-1等)的表达情况,结果显示干扰RNF146后A549细胞中MMP2和MMP7表达明显减少,而MMP9、RhoA、RhoB、RhoC、Rock1、TIMP-1等蛋白的表达变化不明显。结论:RNF146可能通过调控MMP2和MMP7的蛋白水平促进肺癌细胞迁移和侵袭。
- 高英王睿徐慧慧李锐惠林萍邱雪杉王恩华
- 关键词：非小细胞肺癌E3泛素连接酶迁移
- PRKACB基因真核表达载体的构建及稳转细胞株的筛选
- 2016年
- 目的:克隆人c AMP依赖性蛋白激酶催化亚单位β基因(PRKACB),构建重组真核表达载体p EGFP-C1-PRKACB,并筛选其稳定转染肺癌细胞株。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从真核细胞中扩增得到人PRKACB的全长序列,克隆至表达增强型绿色荧光蛋白载体中,经酶切、PCR鉴定后测序证实克隆成功。将重组载体转至真核细胞,采用RT-PCR、Western blot技术检测外源基因PRKACB的表达。应用新霉素(G418)筛选出稳定转染p EGFP-C1-PRKACB的非小细胞肺癌细胞株。结果:测序结果证实成功将PRKACB基因克隆至真核表达载体中,酶切片段与预期大小一致(1 200bp)。RT-PCR及Western blot结果显示:转染后的细胞中PRKACB在转录和翻译水平的表达均有明显提高。稳定转染p EGFP-C1-PRKACB的细胞株经Western blot证实其PRKACB蛋白上调最显著。结论:成功构建了真核表达载体p EGFP-C1-PRKACB,并筛选其稳定转染后上调最显著的细胞株,为进一步研究PRKACB的生物学功能奠定了基础。
- 郭剑波陈拥田大力高英
- 关键词：克隆
